Resumo: A cana-de-açúcar é uma das culturas mais plantadas no mundo e o Brasil é o maior produtor e exportador de açúcar. Pensando no aumento dessas exportações, pesquisas vêm sendo realizadas para se conseguir cultivares mais resistentes a pragas e intempéries. Uma possibilidade é a transformação genética, porém são necessários aperfeiçoar os protocolos existentes de regeneração in vitro de plantas, pois cada cultivar de cana-de-açúcar responde de forma distinta em meio nutritivo. Nesse contexto, experimentos para obtenção de calos embriogênicos foram realizados, a fim de possibilitar estudos posteriores de transformação genética da cultura por biobalística. Diante disso, objetivou-se estabelecer protocolos de regeneração in vitro para três cultivares e um clone de cana-de-açúcar, visando a obtenção de calos embriogênicos. Sendo assim, os experimentos foram realizados em etapas, testando cinco concentrações de 2,4-D (1, 3, 9, 16 e 27 ?M) em RB986419 e RB966928. Para o cultivar RB855156, analisou-se a influencia da luminosidade e três concentrações de 2,4-D (3, 9 e 16 ?M) sobre a formação de calos embriogênicos. Testes com diferentes meios de cultura (MS, MS/2 e MS/Fe) em cinco concentrações de 2,4-D (1, 3, 9, 16 e 27 ?M) foram realizados no cultivar RB72454. Pôde-se concluir que a utilização de 9 ?M para RB986419 e 16 ?M de 2,4-D para o cultivar RB966928 propiciaram maiores formações de calos embriogênicos e regeneração de plantas. O cultivar RB855156 tem maiores porcentagens de formação da embriogênese somática no escuro, com reduzida oxidação dos explantes. A calogênese do cultivar RB72454 é mais facilmente obtida em meio de cultura com a redução dos macro e micronutrientes em concentrações de 9 e 16 ?M de 2,4-D.