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Enterococcus spp. isolado de vegetais: perfil de suscetibilidade a antimicrobianos e formação de biofilme / Enterococcus spp. isolated from vegetables: susceptibility profile to antimicrobials and biofilm formation

Tormen, Silvia Helena 29 January 2016 (has links)
CNPQ; Fundação Araucária / Os enterococos são cocos Gram-positivos que pertencem ao grupo das bactérias ácido láticas (BAL). Podem ser isolados de plantas, solo, água, alimentos e do trato digestório de humanos e outros mamíferos. Alguns isolados são potencialmente patogênicos e resistentes a antimicrobianos, principalmente à vancomicina e demais antimicrobianos clinicamente importantes. Devido a este cenário, alimentos estão sendo sugeridos como reservatórios de enterococos resistentes a antimicrobianos. Contudo, são escassos os estudos que analisam a presença deste microrganismo em vegetais. Portanto, este trabalho teve como objetivo isolar e identificar Enterococcus spp. a partir de amostras de vegetais folhosos, legumes e raízes, e verificar sua suscetibilidade a antimicrobianos e formação de biofilme. Os isolados foram identificados ao nível de gênero/espécie pela reação da polimerase em cadeia (PCR), utilizando os oligonucleotídeos iniciadores das principais espécies. A sensibilidade a antimicrobianos foi determinada pelo método de disco-difusão e a presença dos genes ermB, aac-(6'), tetL, tetM, vanA e vanB pela PCR. A capacidade de formação de biofilme foi determinada, in vitro, por biomassa total. Foram obtidos 85 isolados de Enterococcus distribuídos em 62% das amostras analisadas. As espécies identificadas foram: Enterococcus casseliflavus/flavescens, Enterococcus columbae, Enterococcus faecium, Enterococcus mundtii e Enterococcus avium. Dos isolados 64% apresentaram resistência fenotípica a todos os antimicrobianos testados, principalmente à vancomicina, eritromicina, teicoplanina, ampicilina e penicilina. A maioria das espécies apresentou pelo menos um isolado resistente à vancomicina. Dos isolados resistentes 61% apresentaram multirresistência. Os genes detectados foram: tetM (15%), tetL (8%), vanA (5%), vanB (4%) e aac-(6') (2%). Todos os isolados foram capazes de formar biofilme, onde 27% foram classificados como produtor de biofilme fraco, 60% moderado e 13% forte. Os isolados produtores de biofilme moderado foram os que mais apresentaram resistência à vancomicina, teicoplanina, eritromicina e penilicina. De acordo com estes resultados, os vegetais podem atuar como reservatório de enterococos resistentes a diversos antimicrobianos de importância clínica, principalmente à vancomicina. Isso representa um risco para a saúde pública uma vez que a vancomicina é o último recurso terapêutico para o tratamento de infecções enterocócicas graves. / The e enterococci are Gram-positive cocci that belong to the group of lactic acid bacteria (LAB). They can be isolated from plants, soil, water, food and the digestive tract of humans and other mammals. Some strains are potentially pathogenic and resistant to antibiotics, especially vancomycin and other clinically important antibiotics. Due to this scenario, foods are being suggested as reservoirs enterococci resistant to antimicrobials. However, there are few studies that analyze the presence of this organism in food vegetable. Therefore, this study aimed to isolate and identifyenterococci from samples of leafy vegetables, legumen and roots, and verify their susceptibility to antimicrobial and biofilm formation. Isolates were identified to genus / species by polymerase chain reaction (PCR) using the primers of the main species.The antimicrobial susceptibility was determined by disk diffusion method and thepresence of ermB genes, aac (6 '), tetL, tetM, vanA and vanB by PCR. Biofilm formation ability was determined in vitro by the total biomass. 85 were obtainedEnterococcus distributed in 62% of samples. The species identified were:Enterococcus casseliflavus/flavescens, Enterococcus columbae, Enterococcus faecium, Enterococcus mundtii and Enterococcus avium. From the isolates showed 64% phenotypic resistance to all tested antibiotics, especially vancomycin, erythromycin, teicoplanin, ampicillin and penicillin. Most species had at least one isolate resistant to vancomycin. 61% of resistant isolates showed multidrug resistance. The genes were detected: tet M (15%), tetL (8%), vanA (5%), vanB (4%)and aac-(6 ') (2%). All isolates were able to form biofilm, where 27 % were classifiedas weak biofilm producer, 60 % moderate and 13 % stronger. Isolated producers of moderate biofilm were the ones who were resistant to vancomycin, teicoplanin, erythromycin and penillicin. According to these results, the vegetables can act as a reservoir of enterococci resistant to several antibiotics of clinical importance, especially vancomycin. This represents a risk to public health since vancomycin is the last therapeutic option for the treatment of severe enterococcal infections.

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