CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / As sementes de Platymiscium floribundum Vogel, uma espÃcie pertencente à famÃlia Leguminosae, subfamÃlia Papilionoideae, tribo Dalbergieae, possuem uma lectina manose/N-acetil-D-glicosamina especÃfica, que aglutina eritrÃcitos nativos ou tratados com enzimas proteolÃticas de coelho. A lectina de sementes de P. floribundum foi purificada por precipitaÃÃo com sulfato de amÃnio seguida por cromatografia de afinidade em matriz de Sepharose-manose. Esse procedimento resultou na lectina purificada, nomeada de PFL. O processo de purificaÃÃo da PFL foi monitorado por SDS-PAGE e atividade hemaglutinante especÃfica, observou-se que a lectina purificada à caracterizada por um perfil eletroforÃtico composto por uma Ãnica banda, com massa molecular aparente de aproximadamente 29 kDa, tanto na presenÃa quanto na ausÃncia de um agente redutor. A anÃlise por espectrometria de massa indicou que PFL possui massa molecular de 27.054  2 Da, e teve sua estrutura primaria parcialmente sequenciada atravÃs de espectrometria de massa sequencial. PFL à uma glicoproteÃna e demonstra elevada estabilidade, sendo capaz de manter sua atividade hemaglutinante apÃs exposiÃÃo a temperaturas de atà 60  C por 1 hora e na faixa de pH de 7,0 a 9,0. A PFL nÃo apresentou atividade anti-inflamatÃria.em modelo de edema de pata. PFL foi cristalizada em diferentes condiÃÃes de cristalizaÃÃo. / Platymiscium floribundum Vogel seeds, a species of the Leguminosae family, Papilionoideae subfamily, Dalbergieae tribe, have a lectin mannose/N-acetyl-D-glucosamine specific rabbit erythrocytes that agglutinate native or treated with proteolytic enzymes. The lectin from P. floribundum was purified by precipitation with ammonium sulfate followed by affinity chromatography on Sepharose-mannose. This procedure resulted in a purified lectin, named PFL. PFL purification process was monitored by SDS-PAGE and showed that the purified lectin is characterized by an electrophoretic profile consists of a single band with apparent molecular mass of approximately 29 kDa, in both presence and absence of an reducer agent. The analysis by mass spectrometry indicated that PFL has a molecular mass of 27,054 Da, and its primary structure was partially sequenced. PFL is a glycoprotein and shows high stability, being able to maintain its haemagglutinating activity after exposure to temperatures up to 60 ÂC for one hour and at pH 7.0 to 9.0. The PFL showed no anti-inflammatory activity in paw edema model. PFL was crystallized under different crystallization.

Made available in DSpace on 2016-06-02T19:30:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TeseMCCS.pdf: 1536763 bytes, checksum: 92b8a6ae866e9b063beed7cb2ae1dbb4 (MD5) Previous issue date: 2005-03-30 / Universidade Federal de Sao Carlos / In this work was evaluated the seeds and fruits development of Plathymiscium floribundum Vog. and associated it with the phenophases, in order to get seeds with high physiological quality. The phenological observations were carried out using 20 matrix from Parque Estadual Alberto Löfgren belong to Instituto Florestal - SP, since January 2001 until December 2003. For the maturation study fruits and seeds were collected, and were realized determinations as physical, chemical parameters, physiology and color patterns. The data recorded showed that the flower and fruit production occurred at the spring, during the rainy season. Besides it, in several trees the flower production was not followed by fruit development. The total abscision of these organs was observed. The seed production occurred in periods longer than one year, and was restricted to some individuals. The fruits produced at 2002 did not reach the mature stage, and only two matrix produced flowers and fruits. During 2003 all the fruits were detached by abscision. The fruit color and the dry weight of the fruits and seeds are good indicators for the physiology maturity of the seeds. This work also evaluated the vigor of Plathymiscium floribundum Vog. seeds, fresh harvest with 8,97% of moisture and stored during 75 days at room environment inside paper bags. The determinations were done each 15 days and included: moisture content, rate and percentage germination, electrical conductivity (EC) accelerated aging (AA) and tetrazolium test (TZ). The experiments were carried out with four replications of 15 seeds. For the EC test the seeds were weight and after were put inside plastic cups with 75 mL of distilled water, during 24h at 25oC. The values obtained differ after storage during 15 days. The AA was realized at 40oC and 100% of R.U. during 6 and 24 h and a difference was only registered after storage during 75 days. For the TZ test the seeds were pre imbibed during 24h at 25oC, without pericarp and immersed in solution 1% concentrated. The seeds presented high physiological quality, and the decrease only occurred at the last storage period. In this research was also evaluated the maximum tolerance limits for water and salt stresses on Platymiscium floribundum seeds, imbibed in KCl, NaCl, mannitol and PEG 6000 solutions for salt and water stress, respectively with osmotic potentials: 0; -0,2; -0,4; -0,6; -0,8; and -1,0MPa. The experiments were carried out with four replications of 20 seeds germinated at 27°C, and continuous light The obtained data were submitted to variance analysis and Tukey test. A significance reduction on rate and percentage germination was registered at -0,2MPa and -0,6MPa, respectively, using mannitol solutions. When PEG solutions were used a significantly reduction on rate and germination percentage was at -0,4 MPa. When KCl and NaCl solutions were used a gradual reduction on germination percentage occurred. The highest values of rate and germination percentage were registered for seeds germinated in mannitol solutions, in all osmotic potentials. In relation to salt stress the reductions on rate and germination percentage occurred slightly, in contrast to water stress. A significantly decrease on germination percentage was verified at -0,4MPa, for both salt solutions. In relation to germination rate, the reduction was first detected at -0,6MPa and -0,8MPa for KCl and NaCl solutions, respectively. The maximal tolerance limit was the same, between -1,0 and -1,2MPa, for salt and water stress. / Como os estudos fenológicos sobre as sementes são efetivamente o ponto de partida para utilização e exploração de forma racional de espécies nativas, este trabalho teve como meta investigar aspectos da fenologia e fisiologia de Platymiscium floribundum Vog. localizadas em um fragmento de Mata Atlântica, no Parque Estadual Alberto Löfgren, pertencente ao Instituto Florestal de São Paulo-SP. Foram realizadas observações semanais em 20 matrizes previamente demarcadas e constatou-se uma sincronia entre os eventos fenológicos e os fatores climáticos como, a precipitação pluvial, umidade relativa do ar e temperatura, para os anos de 2001 a 2003. Em relação à determinação do ponto de maturidade fisiológica das sementes, a colheita foi iniciada nas 20 matrizes demarcadas anteriormente, em intervalos regulares e consecutivos de sete dias, quando começou a ocorrer abscisão espontânea dos frutos ainda imaturos. As avaliações nos testes de viabilidade foram realizadas diariamente, considerando-se germinadas as sementes que apresentavam a emissão da raiz ou da plúmula, segundo o critério botânico. A partir dos 197 dias após o início do florescimento, houve um aumento considerável na porcentagem de germinação em sementes colhidas durante ano de 2002, sendo que os valores obtidos nas épocas subseqüentes de colheitas não diferiram estatisticamente entre si, ao nível de 5% de probabilidade. Para avaliar o vigor e a viabilidade das sementes armazenadas foram utilizados os testes de condutividade elétrica (CE), envelhecimento acelerado (EA) de germinação e do tetrazólio (TZ), conduzidos em diferentes períodos. As sementes recém colhidas, com 31,37% de teor de água foram armazenadas durante 75 dias em condição de bancada de laboratório em saco de papel, e quinzenalmente foram retiradas amostras para realizar os testes citados acima. O teste de CE foi conduzido a 25°C, com 15 sementes embebidas em 75 mL de água, durante 24 horas, havendo diferença significativa entre os valores obtidos antes e após quinze dias de armazenamento. No teste do EA, realizado a 40°C durante 6 e 24 horas, foram registradas diferenças significativas após 45 dias de armazenamento, para sementes envelhecidas durante seis horas. Para o teste do TZ utilizou-se as sementes com o pericarpo removido, que foram pré-condicionadas durante 24 horas a 25°C e imersas em solução de TZ a 1%. As sementes mantiveram sua qualidade fisiológica em níveis satisfatórios durante armazenamento, porém ocorreu diminuição da viabilidade das sementes após 75 dias de armazenamento. Os testes realizados foram eficientes na discriminação do vigor de sementes armazenadas durante diferentes períodos. Também foram realizados experimentos para avaliar o limite de tolerância ao estresse hídrico e salino, com o uso de soluções de manitol, PEG 6000 e dos sais NaCl e KCl, respectivamente, preparadas com os seguintes potenciais osmóticos (0; -0,2; -0,4; -0,6; -0,8; -1,0 MPa). Os experimentos foram realizados com quatro repetições de 20 sementes distribuídas em caixas tipos gerbox® forradas com papel de filtro umedecido com 12 mL das soluções teste e colocadas para germinar a 27ºC. Verificou-se reduções significativas nos valores de porcentagem e velocidade de germinação a partir de -0,2 e -0,4MPa, respectivamente, para sementes embebidas em soluções de manitol. Quando soluções de PEG 6000 foram utilizadas, reduções significativas na porcentagem e velocidade de germinação foram registradas a partir de -0,4MPa. Independente do potencial osmótico da solução, o uso de soluções de PEG 6000 produziu maiores reduções nos valores de porcentagem e velocidade de germinação do que com o uso de manitol. Com relação às sementes submetidas ao estresse salino, as reduções nos valores de porcentagem e velocidade de germinação das sementes foram gradativas, quando comparadas ao obtido com o uso de soluções de PEG 6000 e manitol. Foi registrada uma redução significativa dos valores de porcentagem a partir de -0,4MPa, para ambos os sais. Com relação à velocidade de germinação, reduções significativas foram observadas a partir de -0,6MPa e -0,8MPa para o KCl e NaCl, respectivamente. O limite máximo de tolerância à seca e à salinidade está situado entre -1,0MPa e -1,2MPa.