Se realizó la caracterización morfológica, fisiológica y molecular de tres cepas de Beauveria brongniartii: CIPCa18(85), CIPCu1(44) y CIPH1(1), además de evaluar su actividad entomopatógena en Phthorimaea operculella y Symmetrischema tangolias. La cepa CIPCu1(44) presentó conidias redondas, pequeñas y la formación de sinemas, diferenciándose de las cepas CIPCa18(85) y CIPH1(1) que presentaron conidias elipsoidales. El análisis molecular mediante la técnica RAPD permitió determinar que esta cepa estaba genéticamente más relacionada con la cepa de Beauveria bassiana CIPLM1 (50.4% de similaridad). Al evaluar la actividad entomopatógena de las tres cepas en larvas de primer estadío de P. operculella y S. tangolias, se encontró que utilizando 1 x 109 conidias/ml el porcentaje de mortalidad fue hasta del 100%. Se determinó que para P. operculella la CL50 de las cepas CIPCa18(85), CIPCu1(44) y CIPH1(1) fue 2.71 x 105, 5.53 x 105 y 5.19 x 105 conidias/ml y la CL90 fue 6.81 x 106, 1.22 x 107 y 5.97 x 106 conidias/ml, mientras que para S. tangolias la CL50 para las cepas CIPCa18(85), CIPCu1(44) y CIPH1(1) fue 1.16 x 106, 9.37 x 106 y 4.52 x 106 conidias/ml y la CL90 fue 6.01 x 107, 1.46 x 109 y 2.17 x 108 conidias/ml respectivamente. En ensayos posteriores se determinó que la cepas de B. brongniartii necesitaron mayor tiempo (9-10 días) para que las CL50 pudieran causar el 50% de mortalidad a las larvas de primer estadío de S. tangolias mientras que sólo necesitaron 3 a 5 días para causar el 50% de mortalidad en P. operculella. Posteriormente se evaluó cada CL50 y CL90 en huevos, larvas de último estadío y pupas de P. operculella y S. tangolias, encontrándose que todos los estados de desarrollo fueron susceptibles con diferente grado de infección. En todas estas evaluaciones, la cepa CIPCa18(85) presentó la mejor actividad entomopatógena para el control de P. operculella y S. tangolias. / --- The objective of this research was to carry out morphological, phisiological and molecular characterization of three isolates of Beauveria brongniartii: CIPCa18(85), CIPCu1(44) y CIPH1(1). In addition, entomogenous activity was tested in Phthorimaea operculella y Symmetrischema tangolias. Isolate CIPCu1(44) showed shorter and spherical conidia while isolates CIPCa18(85) y CIPH1(1) showed tipical elipsoidal conidia. RAPD technique showed a relation between isolates CIPCu1(44) and CIPLM1 (B. bassiana) with 50.4% of similarity. Patogegenicity test showed that isolates were effective to first instar larves, the use of 1 x 109 conidia/ml caused until 100% mortality for both insects. CL50 for isolates CIPCa18(85), CIPCu1(44) and CIPH1(1) obtained in P. operculella larves were 2.71 x 105, 5.53 x 105 and 5.19 x 105 conidias/ml and CL90 for each isolate were 6.81 x 106, 1.22 x 107 and 5.97 x 106 conidias/ml respectively. CL50 for isolates CIPCa18(85), CIPCu1(44) and CIPH1(1) obtained in S. tangolias were 1.16 x 106, 9.37 x 106 and 4.52 x 106 conidias/ml and CL90 for each isolate were 6.01 x 107, 1.46 x 109 and 2.17 x 108 conidias/ml respectively. In other essays, isolates of B. brongniartii needed more time to kill 50% of S. tangolias larves (9 to 10 days) while isolates of B. brongniartii needed only 3 to 5 days to kill 50% of P. operculella. With CL90, isolates needed about 3 days for both insects. Finally, each CL50 y CL90 of three isolates were tested in eggs, last instar larves and pupae, results showed that all develop stages were susceptible to B. brongniartii. Isolate CIPCa18(85) showed the best entomogenous activity to make control of P. operculella y S. tangolias because it came of the same insect order, we suggest more studies with this isolate in greenhouse.

Se realizó la caracterización morfológica, fisiológica y molecular de tres cepas de Beauveria brongniartii: CIPCa18(85), CIPCu1(44) y CIPH1(1), además de evaluar su actividad entomopatógena en Phthorimaea operculella y Symmetrischema tangolias. La cepa CIPCu1(44) presentó conidias redondas, pequeñas y la formación de sinemas, diferenciándose de las cepas CIPCa18(85) y CIPH1(1) que presentaron conidias elipsoidales. El análisis molecular mediante la técnica RAPD permitió determinar que esta cepa estaba genéticamente más relacionada con la cepa de Beauveria bassiana CIPLM1 (50.4% de similaridad). Al evaluar la actividad entomopatógena de las tres cepas en larvas de primer estadío de P. operculella y S. tangolias, se encontró que utilizando 1 x 109 conidias/ml el porcentaje de mortalidad fue hasta del 100%. Se determinó que para P. operculella la CL50 de las cepas CIPCa18(85), CIPCu1(44) y CIPH1(1) fue 2.71 x 105, 5.53 x 105 y 5.19 x 105 conidias/ml y la CL90 fue 6.81 x 106, 1.22 x 107 y 5.97 x 106 conidias/ml, mientras que para S. tangolias la CL50 para las cepas CIPCa18(85), CIPCu1(44) y CIPH1(1) fue 1.16 x 106, 9.37 x 106 y 4.52 x 106 conidias/ml y la CL90 fue 6.01 x 107, 1.46 x 109 y 2.17 x 108 conidias/ml respectivamente. En ensayos posteriores se determinó que la cepas de B. brongniartii necesitaron mayor tiempo (9-10 días) para que las CL50 pudieran causar el 50% de mortalidad a las larvas de primer estadío de S. tangolias mientras que sólo necesitaron 3 a 5 días para causar el 50% de mortalidad en P. operculella. Posteriormente se evaluó cada CL50 y CL90 en huevos, larvas de último estadío y pupas de P. operculella y S. tangolias, encontrándose que todos los estados de desarrollo fueron susceptibles con diferente grado de infección. En todas estas evaluaciones, la cepa CIPCa18(85) presentó la mejor actividad entomopatógena para el control de P. operculella y S. tangolias. / The objective of this research was to carry out morphological, phisiological and molecular characterization of three isolates of Beauveria brongniartii: CIPCa18(85), CIPCu1(44) y CIPH1(1). In addition, entomogenous activity was tested in Phthorimaea operculella y Symmetrischema tangolias. Isolate CIPCu1(44) showed shorter and spherical conidia while isolates CIPCa18(85) y CIPH1(1) showed tipical elipsoidal conidia. RAPD technique showed a relation between isolates CIPCu1(44) and CIPLM1 (B. bassiana) with 50.4% of similarity. Patogegenicity test showed that isolates were effective to first instar larves, the use of 1 x 109 conidia/ml caused until 100% mortality for both insects. CL50 for isolates CIPCa18(85), CIPCu1(44) and CIPH1(1) obtained in P. operculella larves were 2.71 x 105, 5.53 x 105 and 5.19 x 105 conidias/ml and CL90 for each isolate were 6.81 x 106, 1.22 x 107 and 5.97 x 106 conidias/ml respectively. CL50 for isolates CIPCa18(85), CIPCu1(44) and CIPH1(1) obtained in S. tangolias were 1.16 x 106, 9.37 x 106 and 4.52 x 106 conidias/ml and CL90 for each isolate were 6.01 x 107, 1.46 x 109 and 2.17 x 108 conidias/ml respectively. In other essays, isolates of B. brongniartii needed more time to kill 50% of S. tangolias larves (9 to 10 days) while isolates of B. brongniartii needed only 3 to 5 days to kill 50% of P. operculella. With CL90, isolates needed about 3 days for both insects. Finally, each CL50 y CL90 of three isolates were tested in eggs, last instar larves and pupae, results showed that all develop stages were susceptible to B. brongniartii. Isolate CIPCa18(85) showed the best entomogenous activity to make control of P. operculella y S. tangolias because it came of the same insect order, we suggest more studies with this isolate in greenhouse.

Tesis para optar al grado de Magister en Ciencias Agropecuarias / Proeulia auraria, una especie nativa de Chile, causa daños en vides, arándanos, manzanos y perales, entre otros, y tiene estatus cuarentenario. El desarrollo de controles alternativos de esta plaga es de gran importancia en el manejo agrícola sustentable del país. La identificación de la feromona sexual de P. auraria, en el 2014, permitirá evaluar nuevos controles alternativos, pero antes se debe disponer de una línea base conductual. Para ello se caracterizó el comportamiento sexual de P. auraria y su grado de estereotipia. En laboratorio, se determinó el horario en que ocurre la conducta de llamado (05:00 y 07:00 h, n = 55 secuencias). Para evaluar las respuestas de los machos se hicieron ensayos en laboratorio y campo y se obtuvieron secuencias de vuelo de 22 individuos. Para el cortejo, se obtuvieron 8 parejas de individuos, con 5 cortejos exitosos. Estas secuencias se analizaron ya sea con la prueba de Chi-cuadrado o con la prueba Exacta de Fischer, lo que indicó que cada paso conductual depende del paso inmediatamente anterior y que las transiciones entre secuencias de pasos fueron estereotipadas. Este estudio ayudará al desarrollo de nuevas técnicas de control para esta plaga, basadas en la modificación de su conducta sexual. / Proeulia auraria, a native species from Chile, causes damage to vineyards, blueberries, apple trees, pear trees, among others, and has quarantine status. The development of alternative controls for this pest is very important to the sustainable agricultural management of the country. The identification of the sexual pheromone of P. auraria, in 2014, will allow to evaluate new alternative controls, but before there must be a based behavioral line. For that, it was characterized the sexual behavior of P. auraria and its stereotype grade. In laboratory assays, the time in which calling behavior occurs was characterized (05:00 – 07:00 h) from a total of 55 sequences. To evaluate male responses, field and laboratory assays were performed and the flight sequences from 22 males were obtained. For courtship, eight pairs of individuals who courted were obtained, of which 5 were successful. These sequences were analyzed with Chi-square or Fisher’s Exact tests, indicating that each behavioural step depends on the immediately preceding step and that transitions among step sequences were stereotyped. This study will support the development of new control techniques for this pest, based on modifying their sexual behavior.

Tesis para optar al Título Profesional de Ingeniero Agrónomo y Grado de Magíster en Ciencias Agropecuarias, Mención Sanidad Vegetal / Los nemátodos entomopatógenos (NEP) son considerados como una solución efectiva en el control de plagas del suelo, ya que son capaces de desplazarse en este hábitat para encontrar y parasitar al insecto hospedero. En este estudio se determinó la capacidad infectiva de Steinernema sp. aislamiento Licán Ray, en suelos de textura arenosa, franca y arcillosa, bajo condiciones de laboratorio. Primero se determinó la concentración adecuada en la arena experimental, por lo que se aplicaron concentraciones de 10, 50 y 100 JI cm-2. Posteriormente se midió el desplazamiento de los NEP, tanto vertical como horizontal, en arenas experimentales de 30/50/70 y 10/20/30/40 cm, respectivamente, utilizando como hospedero larvas de Galleria mellonella (L.). En los tres ensayos se midió la mortalidad al día 3, 6 y 9 después de la aplicación de los NEP. Todas las concentraciones de NEP provocaron 100% de mortalidad en todos los suelos, excepto en suelo arcilloso, donde se observó menor eficacia al utilizar la menor concentración. La velocidad de infección fue mayor cuando se aplicaron 50 y 100 JI cm-2 en las tres texturas. La capacidad de los NEP de desplazarse verticalmente e infectar al hospedero a 30 cm fue de 100% en todos los suelos, tardando más horas en infectar larvas en suelo arenoso. A 50 y 70 cm la mortalidad disminuyó, manteniendo el suelo franco la mayor eficacia. Al desplazarse horizontalmente, se observó diferencias a partir de los 30 cm en todos los suelos, siendo el NEP más eficiente en suelo franco y menos eficiente en suelo arenoso. Los resultados del presente estudio sugieren que Steinernema sp. tiene la capacidad de desplazarse tanto vertical como horizontalmente, pero su eficiencia en atacar al hospedero depende de la textura del suelo en que se encuentren. / Entomopathogenic nematodes (EPN) are considered an effective solution for the control of soil pests due to their capacity of moving in this habitat to find and parasitize the insect host. This study evaluated the infectivity of Steinernema sp. strain Licán Ray in sandy, loam and clay textured soils, under laboratory conditions. Firstly, concentrations of 10, 50 and 100 JI cm-2 were evaluated to establish the appropriate concentration of EPN in the experimental sand. Second, the displacement capacity of the EPN both vertically and horizontally was evaluated in experimental arenas at 30/50/70 and 10/20/30/40 cm, respectively, using Galleria mellonella (L.) larvae as host. In all three trials host mortality was evaluated at day 3, 6 and 9 after application of EPN. The results show that all EPN concentrations used caused 100% mortality in all soils, except for clay soil, where the efficacy decreased with the lowest concentration. The velocity of infection was highest with 50 to 100 cm-2 JI in all soil textures. The EPN capacity of vertically displacement and infection of the host at 30 cm was 100% in all textured soils, taking longer to infect larvae in sandy soil. At 50 and 70 cm mortality decreased, showing the loam soil the highest efficacy. When moving horizontally, differences were observed from 30 cm up in all textured soils, being EPN most efficient in loam and least efficient in sandy soil. These results suggest that Steinernema sp. has the capacity to displace in the soil, both horizontally and vertically, but their efficiency in attacking the host depends on the texture of the soil.

Memoria para optar al título profesional de Ingeniero Agrónomo Mención Sanidad Vegetal / La importancia económica que los tortrícidos han tenido en nuestra agricultura en los últimos 30 años, ha ido aumentando de manera significativa, particularmente desde el punto de vista cuarentenario en el sector de exportaciones hortofrutícolas. En consecuencia, es necesario un mayor conocimiento de las especies endémicas de Chile. Es esencial lograr una identificación taxonómica certera de sus estados inmaduros, de las principales especies que atacan frutales y otros cultivos. En el presente trabajo, se presenta la descripción taxonómica del último estado larvario y de pupas de dos especies de tortrícidos de Chile: Proeulia auraria (Clarke) y Proeulia chrysopteris (Butler). Se realizaron estudios en base a crianzas de larvas en condiciones de laboratorio, de las cuales se realizaron preparaciones microscópicas y su identificación a nivel de adultos. Además se entrega una actualización, que incluyen nuevos registros de hospederos y una clave de identificación larvaria ilustrada, en atención a que las detecciones en sitios de inspección cuarentenaria, deben realizarse sobre una base científica adecuada. La terminología utilizada para los detalles morfológicos de la larva (quetotaxia), está basado esencialmente en el aporte de Hinton (1946) y Stehr (1987). El formato para las figuras de la cabeza y larva, está basado en los trabajos de MacKay (1959, 1962) y Vargas (2006). Respecto a la descripción de las estructuras morfológicas de la pupa, se adopta la propuesta de Gilligan et al. (2008). De los adultos obtenidos de las crianzas, se realizaron estudios de genitalia comparada, con el objetivo de identificar y confirmar a la especie en estudio. Para tal efecto, se utilizaron los siguientes trabajos taxonómicos del género, Obraztsov (1964) y Razowski (1995, 1999). Para la clave ilustrada de identificación, se propone una en orden y nivel dicotómica para larvas de último estado, la cual considera aquellos aspectos morfológicos, de mayor importancia desde el punto de vista biológico. / The economic importance that the tortricid moths have reached in the last 30 years, particularly in the quarantine restrictions set within the fruit export areas, requires a better biological specific information of the major native species involved in common quarantine detections, specially to have a better knowledge of the morphological characters separating larval stages. In the present work, the taxonomic description of the last instar larvae and pupae of two of the commonest fruit tree leafrollers Proeulia auraria (Clarke) y Proeulia chrysopteris (Butler) are presented. Studies were made on specific laboratory rearings; the last (fifth) larval instar was characterized according to anatomical features, particularly from their setal distribution in selected larval segments and cephalic areas. Other major specific details, such as feeding behaviour and local distribution are accompanying each treated entity. Terminology used in the description of larval data, chaetotaxy and others, are essentially based in basic literature (Hinton, 1946; MacKay, 1959; MacKay, 1962; Stehr, 1987; Vargas, 2006). As far as the pupae, morphological information has been adopted from Gilligan et al. (2008). Confirmation on specific adults entities was drawn from comparative genitalia studies this was also compared in major taxonomic studies (Obraztsov, 1964; Razowski, 1995; Razowski, 1999). To facilitate species comparative identification, a dicotomic key is provided for last larval instars of the species studied. Insofar pupal structures is concerned, those pertaining of both sexes of P. auraria and P. chrysopteris are also dealt with.

En las zonas productoras de papa (Solanum tuberosum Linneo) del Perú, una especie de polilla de la papa (PTM): Symmetrischema tangolias Gyen (Lepidoptera: Gelechiidae) viene desplazando en predominancia a Phthorimaea operculella Zeller (Lepidoptera: Gelechiidae). El objetivo de esta investigación fue desarrollar una fórmula bioinsecticida eficaz contra ambas plagas, basado en PoGV, Btk o la combinación de ambos. El tratamiento de tubérculos de papa (cv. “Peruanita”) con fórmulas de patógenos fue por inmersión o impregnación; e inoculadas con larvas neonatales de ambas especies. Los bioensayos se desarrollaron a: 25°C (P. operculella), 20°C (S. tangolias) y condiciones naturales en almacenes de papa. Las fórmulas en talco mejoraron la eficacia de los patógenos, alcanzando niveles CL50 con menores concentraciones de PoGV (16 veces) y Btk (5-6 veces) al compararse con sus respectivas aplicaciones acuosas (1,55×107 gránulos/mL; IC95%: 1,26×107-2,14×107 y 1321 mg/L; IC95%: 1084-1555) obtenidas contra P. operculella; asi mismo fueron 2-4 veces menores respecto a aplicaciones acuosas de Btk (3095 mg/L; IC95% 1711 - 3575) en S. tangolias. La interacción PoGV-Btk contra P. operculella fue mixta, tendiendo al antagonismo ante concentraciones altas de ambos patógenos y sinérgicos a bajas concentraciones. Dos fórmulas: Btk y Btk+PoGV, desarrollados y aplicados en almacenes de papa, permitieron incrementos poblacionales, 90 días después, solo en S. tangolias (3,0 y 2,7%) (larvas-pupas/100 tubérculos); luego de disminuirlos a niveles de 1,7% (30 días). No resulta conveniente utilizar fórmulas combinadas de Btk+PoGV por no conseguirse sinergísmos importantes; recomendándose el producto Btk en talco, por su efectividad contra ambas especies de PTM. / In the areas of potato productions (Solanum tuberosum Linneo) from Peru, a species of potato tuber moth (PTM): Symmetrischema tangolias Gyen (Lepidoptera: Gelechiidae) it comes displacing in predominance to Phthorimaea operculella Zeller (Lepidoptera: Gelechiidae). The objective of this investigation was to develop an effective bioinsecticide formule against both pests, based on PoGV, Btk or the combination of both. The treatment of the potato tubers (cv. “Peruanita”) was realized by immersion when was used one solution formulated or by covers when the powder formulation was, over, which was, inoculated the neonatal larvae. The laboratory bioassays were developed at control condition 25°C (P. operculella), 20°C (S. tangolias) and at room condition for the potato storage. Due the effects of some inert material over the mortality, the talcum formulation of both pathogens tested showed better efficacy than aqueous solution formulated. Reaching the CL50 level using less concentration of PoGV (16 times) and Btk (5 to 6 times) in comparison with the respective aqueous applications (1,55×107 granules/mL; IC95%: 1,26×107- 2,14×107 and 1321 mg/L; IC95%: 1084-1555) against P. operculella. The difference was 2 to 4 time minor in S. tangolias concerning aqueous applications of Btk (3095 mg/L; IC95% 1711-3575). The PoGV-Btk interaction against P. operculella results mixed, reaching to the antagonism in front of high concentrations of both pathogens and synergistic to low concentrations. Two formulations: Btk and Btk+PoGV was developed and applied in potato storage, permitting increments populations 90 days later, only in S. tangolias (3,0 2,7%) (larvae and pupae/100 tubers), then of diminishing them to levels of 1,7% (30 days). With this results is not recommended the use formulations combined of Btk+PoGV by not getting important synergism; recommending the use of the talcum Btk product, for their high affectivity against both species of potato tuber moth.

En las zonas productoras de papa (Solanum tuberosum Linneo) del Perú, una especie de polilla de la papa (PTM): Symmetrischema tangolias Gyen (Lepidoptera: Gelechiidae) viene desplazando en predominancia a Phthorimaea operculella Zeller (Lepidoptera: Gelechiidae). El objetivo de esta investigación fue desarrollar una fórmula bioinsecticida eficaz contra ambas plagas, basado en PoGV, Btk o la combinación de ambos. El tratamiento de tubérculos de papa (cv. “Peruanita”) con fórmulas de patógenos fue por inmersión o impregnación; e inoculadas con larvas neonatales de ambas especies. Los bioensayos se desarrollaron a: 25°C (P. operculella), 20°C (S. tangolias) y condiciones naturales en almacenes de papa. Las fórmulas en talco mejoraron la eficacia de los patógenos, alcanzando niveles CL50 con menores concentraciones de PoGV (16 veces) y Btk (5-6 veces) al compararse con sus respectivas aplicaciones acuosas (1,55×107 gránulos/mL; IC95%: 1,26×107-2,14×107 y 1321 mg/L; IC95%: 1084-1555) obtenidas contra P. operculella; asi mismo fueron 2-4 veces menores respecto a aplicaciones acuosas de Btk (3095 mg/L; IC95% 1711 - 3575) en S. tangolias. La interacción PoGV-Btk contra P. operculella fue mixta, tendiendo al antagonismo ante concentraciones altas de ambos patógenos y sinérgicos a bajas concentraciones. Dos fórmulas: Btk y Btk+PoGV, desarrollados y aplicados en almacenes de papa, permitieron incrementos poblacionales, 90 días después, solo en S. tangolias (3,0 y 2,7%) (larvas-pupas/100 tubérculos); luego de disminuirlos a niveles de 1,7% (30 días). No resulta conveniente utilizar fórmulas combinadas de Btk+PoGV por no conseguirse sinergísmos importantes; recomendándose el producto Btk en talco, por su efectividad contra ambas especies de PTM. / In the areas of potato productions (Solanum tuberosum Linneo) from Peru, a species of potato tuber moth (PTM): Symmetrischema tangolias Gyen (Lepidoptera: Gelechiidae) it comes displacing in predominance to Phthorimaea operculella Zeller (Lepidoptera: Gelechiidae). The objective of this investigation was to develop an effective bioinsecticide formule against both pests, based on PoGV, Btk or the combination of both. The treatment of the potato tubers (cv. “Peruanita”) was realized by immersion when was used one solution formulated or by covers when the powder formulation was, over, which was, inoculated the neonatal larvae. The laboratory bioassays were developed at control condition 25°C (P. operculella), 20°C (S. tangolias) and at room condition for the potato storage. Due the effects of some inert material over the mortality, the talcum formulation of both pathogens tested showed better efficacy than aqueous solution formulated. Reaching the CL50 level using less concentration of PoGV (16 times) and Btk (5 to 6 times) in comparison with the respective aqueous applications (1,55×107 granules/mL; IC95%: 1,26×107- 2,14×107 and 1321 mg/L; IC95%: 1084-1555) against P. operculella. The difference was 2 to 4 time minor in S. tangolias concerning aqueous applications of Btk (3095 mg/L; IC95% 1711-3575). The PoGV-Btk interaction against P. operculella results mixed, reaching to the antagonism in front of high concentrations of both pathogens and synergistic to low concentrations. Two formulations: Btk and Btk+PoGV was developed and applied in potato storage, permitting increments populations 90 days later, only in S. tangolias (3,0 2,7%) (larvae and pupae/100 tubers), then of diminishing them to levels of 1,7% (30 days). With this results is not recommended the use formulations combined of Btk+PoGV by not getting important synergism; recommending the use of the talcum Btk product, for their high affectivity against both species of potato tuber moth. / Tesis

Memoria para optar al Título Profesional de Ingeniero Agrónomo Mención Sanidad Vegetal / Durante 3 temporadas (2011, 2012 y 2013), se estudió en el Laboratorio de Entomología Frutal Profesor Luciano Campos Street, Facultad de Ciencias Agronómicas, Universidad de Chile; el desarrollo y comportamiento de Lobesia botrana a distintas temperaturas, para determinar su umbral de y los requerimientos térmicos necesarios para su ciclo de vida. El estudio se realizó para cada uno de los estados de desarrollo de esta polilla (huevo-larva, larva-pupa, pupa-adulto). Las temperaturas evaluadas fueron 15ºC, 17ºC, 20ºC, 23ºC y 25ºC respectivamente.