Tesis Magister en Ciencias Odontológicas con Mención en Periodontologia / Introducción: Estudios epidemiológicos han establecido una asociación entre la periodontitis apical asintomática (PAA) y enfermedades cardiovasculares, particularmente aterogénesis, sin embargo no existe evidencia mecanística que sustente dicha asociación. El objetivo de este estudio fue determinar los niveles de marcadores de inflamación sistémica, endotoxinas y anticuerpos IgG anti-P. endodontalis en suero de voluntarios sanos, y pacientes con PAA con y sin infección endodóntica por P. endodontalis, en línea base y post terapia endodóntica. Materiales y métodos: Se incluyeron 23 pacientes con PAA y 25 voluntarios sin PAA, todos sistémicamente sanos, entre 18-40 años de edad que acudieron a la clínica odontológica de la Facultad de Odontología, Universidad de Chile. Se excluyeron individuos con medicación sistémica, periodontitis crónica (marginal). Se determinaron los niveles de MPO, IL-6, CRP, ICAM-1, VCAM-1s, y Selectina-Es como marcadores de inflamación sistémica mediante ensayo multiplex, niveles de endotoxinas por ensayo LAL y anticuerpos IgG anti-P. endodontalis por ensayo de ELISA. Se determinó la presencia de P. endodontalis mediante PCR y cultivo bacteriano. Se determinó significancia estadística si p<0,05. Resultados: Se encontró una tendencia hacia niveles mayores de marcadores de inflamación sistémica entre PAA e individuos sanos (p>0,05), particularmente para Selectina-Es (p=0,06), mientras que hsCPR alcanzó niveles de riesgo CV medio (1,5mg/L). Los pacientes con PAA infectados con P. endodontalis mostraron un aumento significativo en la presión diastólica (p=0,004) y niveles séricos de VCAM-1s (p=0,02), mientras que IL-6 demostró tendencia al aumento (p=0,06), comparados con los no infectados. La endotoxemia fue significativamente mayor en pacientes con PAA no infectados versus infectados (p=0,02). Se encontró una reducción significativa de los niveles séricos de VCAM-1s tras una semana (p=0,0008) y un mes (p=0,026) post tratamiento respecto de los niveles basales. Asimismo se observó una reducción significativa de los niveles séricos de anticuerpos IgG anti-P. endodontalis una semana post tratamiento en comparación con los niveles basales (p=0,02). Conclusiones: Pacientes con PAA presentaron riesgo CV medio en relación con los controles que presentaron riesgo CV bajo, determinados por los niveles séricos de hsCRP. Pacientes con PAA infectados con P. endodontalis mostraron un aumento significativo en la presión diastólica y en los niveles séricos de VCAM-1s. El tratamiento endodóntico redujo los niveles séricos de VCAM-1s y los niveles séricos de anticuerpos IgG anti-P. endodontalis en pacientes con PAA. El tratamiento endodóntico conservador contribuiría a reducir la inflamación sistémica y el potencial riesgo de disfunción endotelial asociado en pacientes con PAA. / Adscrito Proyecto FONDECYT 1120138 y 1160741

Trabajo de Investigación Requisito para optar al Título de Cirujano Dentista / Autor no autoriza el acceso a texto completo de su tesis en el Portal de Tesis Electrónicas / Introducción: Porphyromonas endodontalis es una especie de bacilos anaerobios, Gram-negativo, que ha sido fuertemente asociada a infecciones endodónticas, pudiendo ser encontrada en casos de necrosis pulpar, participando en la infección del sistema de canales radiculares (SCR) y en la periodontitis apical. Los estudios que describen la presencia de P. endodontalis en pacientes con Periodontitis Apical Asintomática (PAA) presentan grandes discrepancias respecto de la microbiota encontrada. El objetivo de este estudio es determinar la presencia de P. endodontalis en dientes con diagnóstico de PAA en un grupo de pacientes chilenos. Materiales y Métodos: La muestra del estudio se conformó por 53 pacientes con dientes unirradiculares sin tratamiento endodóntico previo, que presentaran el diagnóstico de PAA. Se tomaron muestras siguiendo el método de Shimauchi en condiciones de asepsia y con el diente aislado en forma absoluta. Las muestras fueron depositadas en viales con medio reducido de transporte (RTF) y llevadas al laboratorio para su procesamiento. Mediante la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) se detectó la presencia de P. endodontalis. Los datos fueron sometidos a un análisis descriptivo. La edad fue analizada con valores promedio y desviación estándar. Resultados: P. endodontalis fue detectada en un 41,5% (22 pacientes) de las muestras microbiológicas obtenidas de dientes diagnosticados con PAA. Conclusión: La detección realizada para P. endodontalis confirma que esta especie forma parte de la microbiota habitual en pacientes con PAA, con un 41,5% en la población estudiada.

Trabajo de Investigación Requisito para optar al Título de Cirujano Dentista / Introducción: La periodontitis apical asintomática (PAA) corresponde a una patología de etiología polimicrobiana que resulta en la destrucción del periodonto apical debido a una reacción inflamatoria crónica. Existe evidencia creciente de que infecciones crónicas en la cavidad oral pueden producir diseminación de productos bacterianos e inflamatorios a la circulación general y activación del sistema inmune con posible inducción de efectos sistémicos adversos. El potencial efecto sistémico asociado a PAA y en especial, a la infección endodóntica por Porphyromonas endodontalis y Porphyromonas gingivalis aún no ha sido investigado. El objetivo de este estudio fue determinar la respuesta inmune humoral y endotoxemia en pacientes con PAA en infección endodóntica con Porphyromonas endodontalis y Porphyromonas gingivalis versus pacientes controles sanos. Material y métodos: Se incluyeron 17 pacientes con diagnóstico de PAA de entre 18 a 34 años de edad, sin enfermedades o factores de riesgo de ECV y 24 controles sanos. Se tomaron muestras de suero a todos los pacientes del estudio y muestras de canales radiculares a los individuos con PAA. Se realizó identificación de aislados de P. endodontalis y P. gingivalis mediante cultivos bacterianos específicos, PCR y secuenciación. Se midió concentración de endotoxinas en suero mediante ensayo comercial Limulus Amebocyte Lysate y niveles de anticuerpos IgG e IgA contra las bacterias anteriormente mencionadas por ensayo ELISA multiserotipo. Los datos fueron analizados mediante el software stata v12. Se determinó significancia estadística con un p<0.05. Resultados: En pacientes con PAA se detectó P. gingivalis en el 11.76% y P. endodontalis en el 29.4% de las muestras. Se observó un aumento de niveles de LPS en suero de pacientes con PAA respecto a controles, pero esta diferencia no fue estadísticamente significativa. Se encontraron diferencias significativas en niveles de endotoxinas (p=0.002) y anticuerpos IgG (p=0.0047) en pacientes con PAA en los que se detectó P. endodontalis versus los que no presentaban la bacteria. Conclusiones: Las especies bacterianas P. endodontalis y P. gingivalis fueron identificadas en canales radiculares de individuos afectados por PAA. En pacientes con PAA existe una tendencia a presentar niveles séricos mayores de endotoxinas y anticuerpos IgG e IgA anti P. endodontalis y P. gingivalis versus individuos sanos, pero sin diferencias estadísticamente significativas. Existen niveles significativamente mayores de anticuerpos IgG anti P. endodontalis en pacientes con PAA con infección endodóntica por este patógeno versus pacientes con PAA en los que no se identificó la bacteria.

Trabajo de Investigación Requisito para optar al Título de Cirujano Dentista / La Periodontitis Apical Asintomática (PAA) corresponde a una patología periapical de origen infeccioso que se caracteriza por la respuesta negativa a los tests de sensibilidad pulpar del diente afectado y por presentar, al examen radiográfico, un área radiolúcida peri y/o pararadicular. Histológicamente se puede clasificar como quiste radicular inflamatorio (QRI) o granuloma periapical (GP). Las comunidades microbianas asociadas a la PAA se caracterizan por infectar el sistema de canales radiculares (SCR) de los dientes y son muy variables en su composición, existiendo diferencias entre diferentes poblaciones geográficas, así como también dentro de una misma población. Porphyromonas gingivalis y Porphyromonas endodontalis, son especies bacterianas que se han visto asociadas a este tipo de infección, por medio de la interacción de sus factores de virulencia con las células del hospedero. Dentro de estos factores de virulencia está el lipopolisacárido (LPS), constituyente de la membrana externa de la pared celular más abundante de la superficie de ambas especies bacterianas y que podría explicar los efectos deletéreos en la destrucción del ligamento periodontal y del hueso, influyendo así en el aumento del tamaño de las lesiones apicales de origen endodóntico (ALEO). En este trabajo, realizamos una caracterización del perfil estructural del LPS de Porphyromonas gingivalis y Porphyromonas endodontalis y analizamos la variabilidad de éste entre los aislados obtenidos. Con este objetivo, inicialmente analizamos macromorfológicamente los cultivos en medio líquido y sólido de aislados clínicos de P. gingivalis y P. endodontalis, obtenidos de exudado periapical proveniente de dientes con diagnóstico de Periodontitis Apical Asintomática y luego caracterizamos el perfil electroforético del LPS en geles de SDS-poliacrilamida teñido con Nitrato de Plata de ambas especies bacterianas y las comparamos con sus respectivas cepas de referencia. Nuestros resultados mostraron una baja cantidad de canales radiculares infectados con P. gingivalis y P. endodontalis. Las características macromorfológicas de dichos microorganismos resultaron bastante similares a las de las cepas de referencia, sin embargo, se observaron diferencias entre ambas. En cuanto al perfil electroforético del LPS de ambas especies, pese a tener pocos aislados clínicos positivos para ambas, si hubo diferencias en el perfil electroforético de sus LPS, siendo más marcadas en las colonias de P. endodontalis. En síntesis, nuestros resultados indican que P. gingivalis y P. endodontalis están presentes en canales radiculares de dientes diagnosticados con PAA y que existen diferencias en las especies bacterianas estudiadas, tanto en sus características macromorfológicas, como en las características de sus LPS. / OD59MMIC2015 / OD59MPER2015

Trabajo de Investigación Requisito para optar al Título de Cirujano Dentista / Introducción: Diversos agentes antimicrobianos son utilizados en el tratamiento de las patologías periapicales, entre las cuales destaca la periodontitis apical (PA). Una de las formas comunes de la PA es la periodontitis apical asintomática (PAA), que corresponde a una infección endodóntica de origen polimicrobiano mixto que se caracteriza por una respuesta negativa a los tests de sensibilidad pulpar y presentar radiográficamente un área radiolúcida periapical en el o los dientes afectados. Algunos de los microorganismos involucrados en su desarrollo pertenecen a la especie bacteriana P. endodontalis. Ésta es una bacteria anaerobia estricta, Gram -negativo, que posee al lipopolisacárido (LPS) dentro de sus principales factores de virulencia. El LPS está compuesto por Lípido A unido a un core, y una cantidad variable de moléculas de antígeno (Ag) O, unidas a este último constituyente. Recientemente, se describieron distintos perfiles de LPS en aislados clínicos de P. endodontalis, sin embargo se desconoce la potencial relevancia clínica de éstos. Si bien en otras especies se relacionan con la susceptibilidad de las bacterias a algunos agentes antimicrobianos, hasta la fecha no existen estudios para P. endodontalis ni sus distintos perfiles de LPS. Objetivos: En el presente trabajo de investigación se analizó la susceptibilidad de aislados clínicos de P. endodontalis, que presentan diferentes perfiles de LPS, a diferentes antimicrobianos utilizados en el tratamiento de la periodontitis apical. Material y métodos: Se realizaron antibiogramas con diferentes aislados clínicos de P. endodontalis, tomados de exudados de conductos radiculares de dientes con diagnóstico de Periodontitis apical asintomática (PAA), de individuos que asistieron a la Clínica Odontológica de la Facultad de Odontología de la Universidad de Chile. Además, se realizaron ensayos de microdilución con los mismos aislados clínicos. En estos dos tipos de ensayos fueron utilizados 4 antimicrobianos comúnmente usados en el tratamiento de infecciones endodónticas, éstos fueron clorhexidina, hipoclorito de sodio (NaOCl), polimixina B (PMB), y amoxicilina. Se compararon estos resultados con el perfil electroforético de LPS de dichas bacterias, obtenido de un estudio previamente realizado en el Laboratorio de Microbiología Bucal de la Facultad de Odontología de la Universidad de Chile. Resultados: Se observaron diferencias estadísticamente significativas en las respuestas de los aislados clínicos de P. endodontalis (ATCC™ 35406®, 1ecol1, 3ecol2, 3ecol5, 3ecol6, 4ecol1, 4ecol4 y 4ecol7) frente a los distintos antimicrobianos utilizados. Amoxicilina fue el antimicrobiano con mayor actividad de inhibición del crecimiento bacteriano, mientras que el hipoclorito de sodio fue el agente con menor actividad antimicrobiana. Las respuestas ante los diferentes antimicrobianos en algunos casos se relacionaron con la estructura del LPS bacteriano: Aquellos aislados que presentaron un LPS más completo, con lípido A unido a core y varias cadenas AgO de bajo peso molecular, ATCC™ 35406® y 1ecol1, fueron más susceptibles a clorhexidina y amoxicilina. Por otro lado, las cepas que presentaron lípido A y core unido a pocas moléculas de AgO, es decir 3ecol2, 3ecol5 y 3ecol6, fueron más susceptibles a polimixina B. Finalmente, las cepas con una menor cantidad de LPS, con muy pocas cadenas de AgO de alto peso molecular, 4ecol1, 4ecol4 y 4ecol7, fueron más susceptibles sólo a amoxicilina. Conclusiones: Distintos aislados clínicos de P. endodontalis y perfiles de LPS presentaron respuestas diferentes ante los agentes antimicrobianos estudiados. / Adscrito a Proyecto FONDECYT No. 1120138

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:45Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-03-26Bitstream added on 2014-06-13T20:36:12Z : No. of bitstreams: 1 bedran_tbl_me_arafo.pdf: 840586 bytes, checksum: be6bd6ce48bcc11cac07694e0d0ef66c (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A correta distinção dos micro-organismos envolvidos na patogênese da doença periodontal torna-se importante para o entendimento da sua progressão, auxiliando no adequado planejamento do tratamento periodontal. Assim métodos moleculares tornam-se ferramentas de grande valia no diagnóstico microbiológico. A técnica do PCR convencional é um método já estabelecido na literatura, porém não permite uma quantificação exata das amostras avaliadas. Com isso o PCR em tempo real surgiu para complementar o PCR convencional. O objetivo do presente estudo foi realizar a análise comparativa de ambas as técnicas na detecção de Porphyromonas gingivalis, Tannerella forsythia e Porhyromonas endodontalis. Foram selecionados 20 pacientes sistemicamente saudáveis, com doença periodontal crônica generalizada. Após o exame clínico periodontal completo, 30 amostras de sítios doentes não adjacentes (PS ≥ 5 e 7 mm com sangramento a sondagem) e 30 amostras de sítios sadios não adjacentes (PS ≤ 3 mm e ausência de sangramento a sondagem) foram coletados antes e 60 dias após a terapia periodontal básica de raspagem, alisamento radicular e instrução de higiene oral. O PCR convencional, PCR em tempo real e primers específicos para cada técnica foram utilizados para análise microbiológica. Para a análise comparativa entre as técnicas o PCR em tempo real foi dividido em 3 scores de acordo com a quantidade de DNA e o PCR convencional em 2 scores, presente e ausente. As análise estatísticas foram realizadas utilizados o software GraphPad. Os resultadosmostraram que o PCR em tempo real possui maior sensibilidade e especificidade na detecção dos micro-organismos P. endodontalis, P. gingivalis e T. forsythia, os quais foram detectados em maiores proporções nos sítios doentes quando comparados aos sítios... / The correct distinguishment of microorganisms involved in the periodontal disease pathogen, it is important in the understanding of its progression and adequate treatment planning, in this way, different microbiologic diagnostic molecular methods became key instruments. The conventional PCR technique is a well established method, however does not permit a precise quantification of the evaluated samples, being complemented by the real time PCR. The aim of the present study was to realize a comparative analysis of both techniques in the detection of Porphyromonas gingivalis, Tannerella forsythia e Porhyromonas endodontalis. 20 systemically healthy patients, with established generalized cronic periodontal disease were selected. After a complete clinical periodontal exam, 30 non adjacent affected sites samples (Depth Probing ≥ 5 e 7 mm with positive bleeding) and 30 non adjacent healthy sites samples (depth probing ≤ 3 mm with negative bleeding) were collected initially and 60 days after a basic periodontal therapy, root scaling and oral hygiene instructions. Conventional PCR, real time PCR and specific primers for it technique were used for microbiological analysis. To permit a comparative analysis between both PCR methods studied, the real time PCR was divided in 3 different scores, in accordance to DNA quantity and the conventional PCR in 2 scores, present or absent. The GraphPad software was used to make the statistical analysis. The results demonstrated that the real time PCR are more sensitive and specific in the detection of P. endodontalis, P. gingivalis and T. forsythia, detecting them in a higher proportion in the affected sites when compared to the healthy sites. After the basic periodontal therapy, there was a significant reduction of the bacteria analyzed. That way, can be suggested that presence of... (Complete abstract, click electronic access below)

Resumo: A correta distinção dos micro-organismos envolvidos na patogênese da doença periodontal torna-se importante para o entendimento da sua progressão, auxiliando no adequado planejamento do tratamento periodontal. Assim métodos moleculares tornam-se ferramentas de grande valia no diagnóstico microbiológico. A técnica do PCR convencional é um método já estabelecido na literatura, porém não permite uma quantificação exata das amostras avaliadas. Com isso o PCR em tempo real surgiu para complementar o PCR convencional. O objetivo do presente estudo foi realizar a análise comparativa de ambas as técnicas na detecção de Porphyromonas gingivalis, Tannerella forsythia e Porhyromonas endodontalis. Foram selecionados 20 pacientes sistemicamente saudáveis, com doença periodontal crônica generalizada. Após o exame clínico periodontal completo, 30 amostras de sítios doentes não adjacentes (PS ≥ 5 e 7 mm com sangramento a sondagem) e 30 amostras de sítios sadios não adjacentes (PS ≤ 3 mm e ausência de sangramento a sondagem) foram coletados antes e 60 dias após a terapia periodontal básica de raspagem, alisamento radicular e instrução de higiene oral. O PCR convencional, PCR em tempo real e primers específicos para cada técnica foram utilizados para análise microbiológica. Para a análise comparativa entre as técnicas o PCR em tempo real foi dividido em 3 scores de acordo com a quantidade de DNA e o PCR convencional em 2 scores, presente e ausente. As análise estatísticas foram realizadas utilizados o software GraphPad. Os resultadosmostraram que o PCR em tempo real possui maior sensibilidade e especificidade na detecção dos micro-organismos P. endodontalis, P. gingivalis e T. forsythia, os quais foram detectados em maiores proporções nos sítios doentes quando comparados aos sítios... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The correct distinguishment of microorganisms involved in the periodontal disease pathogen, it is important in the understanding of its progression and adequate treatment planning, in this way, different microbiologic diagnostic molecular methods became key instruments. The conventional PCR technique is a well established method, however does not permit a precise quantification of the evaluated samples, being complemented by the real time PCR. The aim of the present study was to realize a comparative analysis of both techniques in the detection of Porphyromonas gingivalis, Tannerella forsythia e Porhyromonas endodontalis. 20 systemically healthy patients, with established generalized cronic periodontal disease were selected. After a complete clinical periodontal exam, 30 non adjacent affected sites samples (Depth Probing ≥ 5 e 7 mm with positive bleeding) and 30 non adjacent healthy sites samples (depth probing ≤ 3 mm with negative bleeding) were collected initially and 60 days after a basic periodontal therapy, root scaling and oral hygiene instructions. Conventional PCR, real time PCR and specific primers for it technique were used for microbiological analysis. To permit a comparative analysis between both PCR methods studied, the real time PCR was divided in 3 different scores, in accordance to DNA quantity and the conventional PCR in 2 scores, present or absent. The GraphPad software was used to make the statistical analysis. The results demonstrated that the real time PCR are more sensitive and specific in the detection of P. endodontalis, P. gingivalis and T. forsythia, detecting them in a higher proportion in the affected sites when compared to the healthy sites. After the basic periodontal therapy, there was a significant reduction of the bacteria analyzed. That way, can be suggested that presence of... (Complete abstract, click electronic access below) / Orientador: Denise Madalena Palomari Spolidorio / Coorientador: Rosemary Adriana Chiérici Marcantonio / Banca: Poliana Duarte / Banca: Joni Augusto Cirelli / Mestre