Submitted by JÚLIO HEBER SILVA (julioheber@yahoo.com.br) on 2017-02-09T19:11:09Z No. of bitstreams: 2 Tese - Renata Silva do Prado - 2014.pdf: 3442501 bytes, checksum: b2afce5d2fc3ecb9aad886103a6345fa (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2017-02-13T09:53:54Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Tese - Renata Silva do Prado - 2014.pdf: 3442501 bytes, checksum: b2afce5d2fc3ecb9aad886103a6345fa (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-13T09:53:54Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Tese - Renata Silva do Prado - 2014.pdf: 3442501 bytes, checksum: b2afce5d2fc3ecb9aad886103a6345fa (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2014-03-14 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Dimorphic fungi of the genus Paracoccidioides spp. are etiologic agent of paracoccidioidomycosis (PCM), a human systemic mycosis with high incidence in Brazil. Due to the toxicity of existing drugs, the long treatment and resistant isolates, the search for new therapies has become relevant. In this study, we verified the activity argentilactone, extracted the essential oil of Hyptis ovalifolia and its derivatives against Paracoccidioides. The results showed a dose- dependent inhibition of argentilactone fungus in yeast cells, as well as during dimorphism. Inhibition of cell growth was higher than in the presence of acetate than glucose. Argentilactone also been shown to inhibit the native enzyme isocitrate lyase Paracoccidioides (PbICL) and recombinant (PbICLr). The greatest inhibition was observed in the presence of acetate, a condition in which the enzyme is demonstrably more active than glucose. In silico analysis showed that argentilactone binds to the catalytic site of PbICL. The micro-assays for PbICLr and malate synthase (PbMLSr) were standardized, allowing the search for inhibiting compounds on a large scale. A global analysis of Paracoccidioides proteomic profile in response to argentilactone allowed visualization of metabolic adaptation of the fungus to the compound. Important metabolic pathways were suppressed explaining the strong action of the compound on fungal growth and viability. In this study, alternative metabolic pathways adopted by the fungus were elucidated resulting in a better understanding of the mode of action of the compound. It was also evaluated the cytotoxicity and DNA damage caused by argentilactone in human cells, MRC5 and A549, concluding that it occurs in a dose-dependent manner. Thus, it is concluded that argentilactone is a candidate prototype antifungal for the treatment of PCM. / Os fungos dimórficos do gênero Paracoccidioides spp. são agentes etiológicos da paracoccidioidomicose (PCM), uma micose humana, sistêmica de alta incidência no Brasil. Devido à toxicidade das drogas existentes, o longo tempo de tratamento e o aparecimento de isolados resistentes, a busca por novas terapias tem adquirido relevância. Neste estudo, verificou-se a atividade de argentilactona, extraída do óleo essencial de Hyptis. ovalifolia, bem como seus derivados, contra Paracoccidioides. Os resultados mostraram uma inibição dose-dependente de argentilactona em células leveduriformes do fungo, bem como durante o dimorfismo. A inibição de crescimento celular foi maior em presença de acetato do que glicose. Também foi demonstrado que argentilactona inibe a enzima isocitrato liase de Paracoccidioides nativa (PbICL) e recombinante (PbICLr). A maior inibição de PbICL foi observada na presença de acetato, condição em que a enzima é comprovadamente mais ativa, do que em glicose. Análises in silico, que compreenderam dinâmica e docking molecular a partir da construção de modelo de homologia e análise das interações intermoleculares e de energia de solvatação, mostraram que argentilactona se liga ao sítio catalítico de PbICL. Os micro-ensaios para PbICLr e malato sintase (PbMLSr) foram padronizados, o que permitirá a busca por compostos inibidores em larga escala. A caracterização global do perfil proteômico de Paracoccidioides em resposta à argentilactona permitiu a visualização da adaptação metabólica do fungo ao composto. Vias metabólicas importantes foram reprimidas explicando a forte ação do composto sobre o crescimento do fungo e viabilidade. Neste estudo, as vias metabólicas alternativas adotadas pelo fungo foram elucidadas resultando em uma melhor compreensão do modo de ação do composto em estudo. Foi avaliada, também, a citotoxicidade e o dano ao DNA causado por argentilactona em células humanas, MRC5 e A549, concluindo-se que o mesmo ocorre de maneira dose-dependente. Assim, conclui-se que argentilactona é um candidato a antifúngico para tratamento da PCM.