Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-04-15T18:38:01Z No. of bitstreams: 1 Tese_DIP_FlaviaFernandaBubulaCouto.pdf: 1019436 bytes, checksum: 5193b8188e8f866ddd717bb135bc3fee (MD5) / Approved for entry into archive by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-04-15T18:38:09Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese_DIP_FlaviaFernandaBubulaCouto.pdf: 1019436 bytes, checksum: 5193b8188e8f866ddd717bb135bc3fee (MD5) / Approved for entry into archive by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-04-15T18:38:18Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese_DIP_FlaviaFernandaBubulaCouto.pdf: 1019436 bytes, checksum: 5193b8188e8f866ddd717bb135bc3fee (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-15T18:38:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese_DIP_FlaviaFernandaBubulaCouto.pdf: 1019436 bytes, checksum: 5193b8188e8f866ddd717bb135bc3fee (MD5) Previous issue date: 2014 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisa René Rachou. Belo Horizonte, MG, Brasil / Atualmente, a droga utilizada no tratamento da esquistossomose é o praziquantel (PZQ). Alguns casos de isolados de S. mansoni resistentes ao PZQ no campo e em laboratório já foram relatados. Estes relatos refletem uma parcela ínfima do problema real, devido às dificuldades para a comprovação dessa resistência em condições de laboratório. Recentemente, nosso grupo conseguiu induzir resistência, em laboratório, a uma cepa de S. mansoni, utilizando sucessivos tratamentos com PZQ em B. glabrata infectadas com o S. mansoni (cepa LE-PZQ). Diante disso, este trabalho teve como objetivo geral avaliar a resistência/ suscetibilidade da cepa LEPZQ ao longo de seu desenvolvimento no hospedeiro vertebrado bem como avaliar a ação do PZQ em cercárias sensíveis e resistentes ao PZQ a fim obter um teste rápido para detecção de resistência e, por fim, estudar o envolvimento das proteínas SMDR2, SmMRP1 e SmMVP na resistência do S. mansoni ao PZQ. Para isso, camundongos infectados com a cepa LE-PZQ ou com a cepa suscetível (LE) foram tratados com PZQ após 2, 6, 16, 23 e 45 dias de infecção. Os resultados mostraram maior recuperação de vermes da cepa resistente tratadas com PZQ após 16 e 23 dias de infecção em comparação com a cepa LE. Outro objetivo do nosso estudo foi avaliar a perda da cauda de cercárias LE e LE-PZQ após 1 e 2 horas de contato com o PZQ em diferentes concentrações. Cercárias LE-PZQ apresentaram uma perda da cauda estatisticamente menor após exposição nas diferentes concentrações de PZQ por 1 ou 2 horas. Artigos sobre resistência à multidrogas (MDR) têm sido importantes para estudo de resistência em diversos organismos. Por isso, investigamos os níveis de RNA de SMDR2 e SMRP1 por qRT-PCR. SMDR2 mostrou níveis maiores em fêmeas quando comparados com machos e vermes em pares na cepa LE. Na cepa LE-PZQ, vermes fêmeas apresentaram níveis maiores quando comparados apenas com vermes machos. Quando comparadas as duas cepas, a resistente apresentou níveis estatisticamente maiores em machos, fêmeas e vermes em pares. SmMRP1 demonstrou expressão significativamente maior em machos e machos e fêmeas nas duas cepas quando comparados com fêmeas. Na comparação entre a cepa sensível e a resistente, a LE-PZQ apresentou maiores níveis de expressão em machos e vermes em pares. Investigamos também os níveis de RNA e proteínas de SmMVP. Foi possível observar que SmMVP está diferencialmente expressa entre machos, fêmeas e vermes em pares quando comparados entre si em cada cepa e quando compara-se cepa sensível e resistente. / Currently, the drug of choice in schistosomiasis treatment is Praziquantel (PZQ). Some cases of S. mansoni resistant strains to PZQ in field and laboratory have been already reported. These cases reports reflect a small parcel of the real problem due to the difficulty to prove this resistance in laboratory conditions. Recently, our group induced resistance in a S. mansoni strain using successive PZQ treatments in B. glabrata infected, under laboratory conditions (LE-PZQ strain). Thus, this work aimed to evaluate the resistance/ susceptibility of the LE-PZQ strain during its development in the vertebrate host as well as to evaluate the PZQ action in susceptible and resistant cercarie in order to obtain a rapid test to detect resistance, and lastly to study the involvement of SMDR, SmMRP1 and SmMVP proteins in the S. mansoni resistance to PZQ. For that, mice were infected with LE-PZQ strain or susceptible strain (LE) and treated with PZQ after 2, 6, 16, 23 and 45 days of infection. The results showed a bigger worm recovery when it was treated after 16 and 23 days of the infection when compared with susceptible strain. We also aimed to evaluate tail loss of LE and LE-PZQ cercarie after exposure to PZQ for 1 or 2 hours in different concentrations. LE-PZQ cercarie showed a statistically smaller tail loss after PZQ exposure in all concentrations for 1 or 2 hours. Works about multidrug resistance (MDR) have been important to studies of resistance in several organisms. Therefore, we investigated levels of RNA for SMDR2, SmMRP1 and SmMVP using RT-PCR. Females showed high levels of expression when compared to males and paired worms in the LE strain. In the LE-PZQ strain, female worms showed high levels of expression only when compared to male worms. When compared both strains, the resistant showed high levels of expression in males, females and paired worms. SmMRP1 showed upregulated in males and paired worms in both strains when compared to females. In the susceptible and resistant strain comparison, LE-PZQ strain showed high levels of expression in male and paired worms. We investigated also RNA and proteins levels for SmMVP. It was possible to observe that SmMVP was found differentially expressed in adult males and females from the susceptible strain.

Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2016-06-29T14:33:53Z No. of bitstreams: 1 Dissertacao_BCM_VitorMiranda_CPqRR2016.pdf: 25783006 bytes, checksum: 6dba14fa941ca70fa7ddaa50145c6789 (MD5) / Approved for entry into archive by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2016-06-29T14:54:44Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertacao_BCM_VitorMiranda_CPqRR2016.pdf: 25783006 bytes, checksum: 6dba14fa941ca70fa7ddaa50145c6789 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-29T14:54:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao_BCM_VitorMiranda_CPqRR2016.pdf: 25783006 bytes, checksum: 6dba14fa941ca70fa7ddaa50145c6789 (MD5) Previous issue date: 2016 / Made available in DSpace on 2016-07-29T17:20:08Z (GMT). No. of bitstreams: 3 Dissertacao_BCM_VitorMiranda_CPqRR2016.pdf.txt: 5144 bytes, checksum: af452bc1e75e1e62019b2414b4f384d9 (MD5) Dissertacao_BCM_VitorMiranda_CPqRR2016.pdf: 25783006 bytes, checksum: 6dba14fa941ca70fa7ddaa50145c6789 (MD5) license.txt: 2991 bytes, checksum: 5a560609d32a3863062d77ff32785d58 (MD5) Previous issue date: 2016 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas René Rachou. Belo Horizonte, MG, Brasil / A inflamação constitui um mecanismo de defesa local, porém, a falta de controle dessa reação pode causar severos danos aos tecidos. As células-tronco mesenquimais (CTMs) podem se diferenciar em múltiplos tipos celulares in vitro e in vivo, contribuindo, por exemplo, para o reparo de tecidos. Além disso, vários estudos demonstraram que as CTMs interagem com células da imunidade inata e adaptativa, levando a modulação negativa de várias funções efetoras, contribuindo assim, para a redução da inflamação. Entretanto, o efeito dessas células sobre a resposta inflamatória associada com doenças infecciosas e parasitárias, como a esquistossomose, ainda é pouco conhecido. Portanto o objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito das CTMs derivadas do tecido adiposo (CTM-TA) na reação granulomatosa decorrente da esquistossomose mansoni experimental. Para isto, as CTM-TA foram caracterizadas fenotípica e funcionalmente, por meio da citometria de fluxo, bem como pela indução da diferenciação osteogênica e adipogênica. Posteriormente, as CTM-TA foram injetadas por via intravenosa em camundongos C57BL/6 infectados por Schistosoma mansoni, tratados ou não com praziquantel (PZQ). Após 15, 30 e 60 dias do tratamento, foram feitas análises histológicas do baço e fígado dos camundongos, bem como do perfil leucocitário e dosagem da enzima alanina aminotransferase (ALT) sérica. Os resultados mostraram que a recuperação do grupo de camundongos infectados e tratados com as CTM-TA associadas ao PZQ foi superior ao do grupo tratado apenas com PZQ. Observamos também melhorias na estrutura histológica do fígado, na arquitetura do espaço portal, redução do infiltrado inflamatório portal, na simplificação da constituição celular dos granulomas, fase do granuloma avançada e fibrosa com cicatrização parcial das lesões, melhoria da atividade inflamatória periportal e do parênquima. Além disso, observamos diminuição significativa dos níveis séricos da enzima ALT, e do tamanho dos granulomas, no tratamento associado. Em conclusão, os resultados mostraram que as CTM-TA controlaram a resposta inflamatória decorrente da infecção pelo S. mansoni , principalmente quando associadas ao praziquantel. / Inflammation is a local defense mechanism, but, the lack of control of this reaction can cause severe tissue damage. Mesenchymal stem cells (MSCs) can differentiate into multiple cell types in vitro and in vivo, contributing, for example, for tissue repair. Furthermore, several studies have demonstrated that MSCs can interact with cells of the innate and adaptive immune system leading to a down-modulation of various effector functions, thus collaborating to reduce inflammation. However, the effect of these cells on the inflammatory response associated with infectious and parasitic diseases, such as schistosomiasis, has not been widely studied. So, the objective of this study was to evaluate the effect of MSCs derived from adipose tissue (MSC-AT) in granulomatous reaction due to the experimental schistosomiasis. Initially, MSC-AT were characterized phenotypically and functionally by flow cytometry, as well as for their osteogenic and adipogenic differentiation. Thereafter, MSC-AT was injected intravenously into C57BL / 6 mice infected with Schistosoma mansoni, treated or not with praziquantel (PZQ). After 15, 30 and 60 days of treatment, histologic analysis of the spleen and liver of the mice were taken and the number of blood leukocytes and dosage of the enzyme alanine aminotransferase (ALT) levels. The results showed that recovery from the group of infected mice and treated with MSC-AT associated PZQ was superior to group treated with PZQ. We also observed improvements in the histological structure of the liver, the architecture of the portal space, reduction of inflammatory infiltrate portal, simplifying cell formation of granulomas, advanced granuloma phase and fibrous partial healing of injuries, improvement of periportal inflammatory activity and parenchymal. In addition, we observed a significant reduction in serum levels of ALT enzyme, and granuloma size, the associated treatment. In conclusion, our results showed that MSC-AT control the inflammation associated with S. mansoni infection, particularly when associated with praziquantel.

Submitted by Alessandra Portugal (alessandradf@ioc.fiocruz.br) on 2013-09-17T15:45:54Z No. of bitstreams: 1 Tese Biologia Parasitaria Michele Costa da Silva.pdf: 12475456 bytes, checksum: 609ce8de504a83a73a1066ce6c810c6c (MD5) / Made available in DSpace on 2013-09-17T15:45:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese Biologia Parasitaria Michele Costa da Silva.pdf: 12475456 bytes, checksum: 609ce8de504a83a73a1066ce6c810c6c (MD5) Previous issue date: 2011 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / O munícipio de Sumidouro é localizado na região serrana do estado do Rio de Janeiro, onde a infecção por Schistosoma mansoni tem sido descrita em humanos e em roedores silvestres. A população humana vem sendo submetida a sucessivos programas de controle desde a década de 1950. Vários estudos indicam que o rato d’água (Nectomys squamipes) é um reservatório natural de S. mansoni, a sua presença em localidades endêmicas, pode prejudicar os programas de controle da esquistossomose. Em condições de laboratório, vermes adultos de S. mansoni apresentam plasticidade fenotípica induzida por modificações no microambiente do parasita, principalmente durante a primeira passagem em condições de laboratório. Em nosso estudo, avaliamos o efeito do praziquantel (PZQ) no isolado R, isolado de N. squamipes naturalmente infectados, provenientes de Sumidouro, utilizando parâmetros parasitológicos e morfológicos. Os parâmetros parasitológicos (ovos eliminados nas fezes, a redução de vermes adultos e o oograma) foram utilizados para avaliar os efeitos do PZQ no isolado R de S. mansoni. Utilizamos também, um isolado de laboratório (isolado BH) como controle. Camundongos infectados com 50 cercárias foram tratados por via oral com PZQ nas seguintes dosagens: 62,5mg/kg (grupo 1), 125mg/kg (grupo 2), 250mg/kg (grupo 3) e 500mg/kg (grupo 4). Cada dose foi dividida em 3 dias (49, 50 e 51 dias pós-infecção). Os dados foram analisados usando o teste estatístico ANOVA. Nos experimentos com o isolado R, não foram observados ovos nas fezes com as doses 250mg/kg e 500mg/kg (p<0,05), enquanto a excreção em BH chegou à zero com todas as doses. A redução da carga parasitária foi significativamente maior (p<0,05) nas duas concentrações maiores testadas de PZQ, independente do isolado. Com 62,5mg/kg, a porcentagem de ovos imaturos variou de 17% (isolado R) à 38% (isolado BH). Na dosagem de 125mg/kg, a porcentagem de ovos imaturos variou de 20% (isolado R) à 16% (isolado BH). Com 250mg/kg, a contagem de ovos imaturos caiu significativamente à 1% (isolado R) e à 4% (isolado BH). Com 500mg/kg, não foram encontrados ovos imaturos no isolado R, enquanto que em BH o valor era de 8%. Nenhuma dosagem afetou, significativamente (p>0,05), a porcentagem de ovos maduros, independente do isolado. Todos os grupos tratados apresentaram um grande aumento na quantidade de ovos mortos, com diferenças significativas (p<0,001) de 62% e 64% nos grupos 3 e 4, respectivamente (isolado R). A porcentagem de ovos mortos subiu de 34% (grupo 1) para 58% (grupo 3) no isolado BH. Embora o grupo 4 tenha mostrado um pequeno aumento na porcentagem de ovos mortos (46%), foi significativamente maior (p<0,001) comparado com os 8% do controle. Os helmintos machos do isolado R (grupos 3 e 4) apresentaram diminuição dos tubérculos. Dos espécimes fêmeas analisados do isolado R, 44% (grupo 3) não apresentaram ovo. O isolado BH, também apresentou diminuição de tubérculos nos helmintos machos (grupos 3 e 4). Os lobos testiculares dos vermes dos grupos tratados apresentaram área e comprimento menor em relação aos helmintos recuperados de camundongos não tratados. Os nossos dados demonstram que o isolado silvestre testado é susceptível ao PZQ. / Sumidouro municipality is a mountain region of the Rio de Janeiro state, where natural schistosomiasis mansoni has been described in both human and water rat population. The human population has been submitted to successive control programs since around 1955. A number of studies suggest that water rat (Nectomys squamipes) is one natural reservoir of Schistosoma mansoni, which may implicate as a confounding factor for control programs of schistosomiasis. Under laboratory conditions, S. mansoni adult worms present phenotypic plasticity induced by modifications in the parasite's microenvironment, mainly during the first passage under laboratory conditions. In our study the effects of praziquantel (PZQ) were evaluated on the isolate (R) first isolated from naturally-infected N. squamipes from Sumidouro by parasitological and morphological parameters. The therapeutic effects of PZQ against a S. mansoni isolate derived from N. squamipes (isolate R) and a susceptible isolate (BH) were analyzed in Swiss mice by fecal egg counting, adult worm load and oogram pattern. Infected mice were orally administrated with 62.5mg/kg; 125mg/kg 250mg/kg and 500mg/kg, each dose divided over 3 days (49, 50 and 51 days after infection). The data were analyzed using one-way analysis of variance (ANOVA). In regard to isolate R, no fecal eggs were observed with 250mg/kg and 500mg/kg (p < 0.05), whereas BH excretion reached zero with all doses. Mean worm burden reduction was significantly (p < 0.05) higher at the two highest concentrations tested of PZQ, regardless of isolate. At 62.5mg/kg, the percentage of immature eggs varied from 17% (isolate R) to 38% (BH isolate). At 125mg/kg, the percentage of immature eggs varied from 20% (isolate R) to 16% (isolate BH). At 250mg/kg, immature eggs dropped significantly to 1% (isolate R) and 4% (isolate BH). At 500mg/kg, no immature eggs were found in isolate R, whereas in BH was 8%. No dosage significantly (p > 0.05) affected the percentage of mature eggs, regardless of isolate. There was a large increase in the percentages of dead eggs in all treated groups with significant (p < 0.001) increases of 62% and 64% in groups 3 and 4, respectively (isolate R). The percentage of dead eggs rose from 34% (group 1) to 58% (group 3) in isolate BH. Although group 4 showed lowest increase in the percentage of dead eggs (46%), it was significantly higher (p < 0.001) compared to the 8% in the control. Male worms from isolate R (groups 3 and 4) showed decrease of the tubercles. In female worms from isolate R, 44% (group 3) showed no egg. The isolate BH also showed decrease of the tubercles in male worms (groups 3 and 4). In general, morphometric values of reproductive system (testicular lobes) specimens grown in treated mice were lower than those of control mice. Our findings indicate that the wild isolate from N. squamipes is susceptible to PZQ.