Objetivos: Desenvolver e caracterizar nanocápsulas poliméricas contendo erlotinib, bem como avaliar sua atividade antitumoral in vitro em células de adenocarcinoma de pulmão humano. Metodologia: As nanocápsulas contendo erlotinib (0,5 mg.mL-1) foram obtidas pelo método de nanoprecipitação utilizando poli(ε-caprolactona) e óleo de copaíba como parede polimérica e núcleo oleoso, respectivamente. Os parâmetros físico-químicos avaliados foram: diâmetro médio e distribuição de tamanho, índice de polidispersão, potencial zeta, concentração de partículas e pH. Para determinação do teor e eficiência de encapsulação do erlotinib, utilizou-se metodologia validada por CLAE-UV. O estudo de liberação in vitro, utilizando sacos de diálise, foi realizado para obter o perfil de liberação do fármaco a partir das nanocápsulas. As nanocápsulas contendo erlotinib foram avaliadas quanto ao seu potencial de inibir o crescimento, induzir a apoptose, interferir com o ciclo celular e sobrevivência clonogênica de células de adenocarcinoma de pulmão, linhagem A549. Resultados: As nanocápsulas apresentaram diâmetro médio de 171 ± 2 (PDI < 0, 10), potencial zeta de −8,17 ± 2.26 mV, número de partículas por mL de 6,97 ± 0,22 × 1013 e pH de 6,24 ± 0,02. O teor e a eficiência de encapsulação foram próximos de 100%. Com exceção do pH, todos parâmetros mantiveram-se iguais após 30 dias de armazenamento em temperatura ambiente. Observou-se uma liberação controlada do fármaco devido à nanoencapsulação. Os ensaios de citotoxicidade demonstraram que as nanocápsulas contendo erlotinib apresentaram maior atividade antitumoral quando comparado com o fármaco livre. Também foi demonstrado indução de apoptose, pela análise de ciclo celular e marcação por Anexina-V conjugada ao 7-AAD. No ensaio clonogênico, as nanocápsulas contendo erlotinib reduziram 100% o número de colônias formadas. Conclusões: Foram obtidas nanocápsulas com propriedades nanotécnologicas adequadas e capazes de controlar a liberação do erlotinib. Os estudos in vitro na linhagem celular A549 demonstraram aumento no efeito antitumoral e foi demonstrado que o encapsulamento do fármaco é imprescindível para essa melhor atividade. / Purpose: To develop and characterise erlotinib-loaded polymeric nanocapsules and to evaluate its in vitro antitumor activity in human lung adenocarcinoma cells. Methodology: The erlotinib-loaded nanocapsules (0.5 mg.mL-1) were obtained by nanoprecipitation method using poly (ε-caprolactone) and copaiba oil as the polymeric wall and oily core, respectively. The physicochemical parameters evaluated were: mean diameter and size distribution, polydispersity index, zeta potential, particle concentration and pH. An HPLC-UV validated method was used to determine the drug content and encapsulation efficiency. The in vitro release study using dialysis bags was performed to obtain the drug release profile from nanocapsules. The erlotinib-loaded nanocapsules were evaluated regarding their potential to inhibit the growth, induce apoptosis, interfere with the cell cycle and clonogenic survival of lung adenocarcinoma cell (A549). Results: The nanocapsule formulation presented z-average diameter of 171 ± 2 (PDI <0.10), zeta potential value of -8.17 ± 2.26 mV, number of particles per mL of 6.97 ± 0.22 × 1013, and pH value of 6.24 ± 0.02. The drug content and the encapsulation efficiency were nearly 100%. Except for the pH value, all these parameters remained the same after 30 days of storage. A controlled release of the drug was observed due to nanoencapsulation. The cytotoxicity assays demonstrated that the erlotinib-loaded nanocapsules showed higher antitumor activity compared to free drug. Induction of apoptosis was demonstrated by cell cycle analysis and Annexin-V/7AAD staining. In the clonogenic assay, erlotinib-loaded nanocapsules reduced 100% the number of colonies formed. Conclusions: Nanocapsules with appropriate nanotechnological properties and capable of controlling the erlotinib release were obtained. The in vitro studies in the A549 cell line showed an increase in antitumor effect and was demonstrated that the drug encapsulation is essential for this better activity.

Objetivos: Desenvolver e caracterizar nanocápsulas poliméricas contendo erlotinib, bem como avaliar sua atividade antitumoral in vitro em células de adenocarcinoma de pulmão humano. Metodologia: As nanocápsulas contendo erlotinib (0,5 mg.mL-1) foram obtidas pelo método de nanoprecipitação utilizando poli(ε-caprolactona) e óleo de copaíba como parede polimérica e núcleo oleoso, respectivamente. Os parâmetros físico-químicos avaliados foram: diâmetro médio e distribuição de tamanho, índice de polidispersão, potencial zeta, concentração de partículas e pH. Para determinação do teor e eficiência de encapsulação do erlotinib, utilizou-se metodologia validada por CLAE-UV. O estudo de liberação in vitro, utilizando sacos de diálise, foi realizado para obter o perfil de liberação do fármaco a partir das nanocápsulas. As nanocápsulas contendo erlotinib foram avaliadas quanto ao seu potencial de inibir o crescimento, induzir a apoptose, interferir com o ciclo celular e sobrevivência clonogênica de células de adenocarcinoma de pulmão, linhagem A549. Resultados: As nanocápsulas apresentaram diâmetro médio de 171 ± 2 (PDI < 0, 10), potencial zeta de −8,17 ± 2.26 mV, número de partículas por mL de 6,97 ± 0,22 × 1013 e pH de 6,24 ± 0,02. O teor e a eficiência de encapsulação foram próximos de 100%. Com exceção do pH, todos parâmetros mantiveram-se iguais após 30 dias de armazenamento em temperatura ambiente. Observou-se uma liberação controlada do fármaco devido à nanoencapsulação. Os ensaios de citotoxicidade demonstraram que as nanocápsulas contendo erlotinib apresentaram maior atividade antitumoral quando comparado com o fármaco livre. Também foi demonstrado indução de apoptose, pela análise de ciclo celular e marcação por Anexina-V conjugada ao 7-AAD. No ensaio clonogênico, as nanocápsulas contendo erlotinib reduziram 100% o número de colônias formadas. Conclusões: Foram obtidas nanocápsulas com propriedades nanotécnologicas adequadas e capazes de controlar a liberação do erlotinib. Os estudos in vitro na linhagem celular A549 demonstraram aumento no efeito antitumoral e foi demonstrado que o encapsulamento do fármaco é imprescindível para essa melhor atividade. / Purpose: To develop and characterise erlotinib-loaded polymeric nanocapsules and to evaluate its in vitro antitumor activity in human lung adenocarcinoma cells. Methodology: The erlotinib-loaded nanocapsules (0.5 mg.mL-1) were obtained by nanoprecipitation method using poly (ε-caprolactone) and copaiba oil as the polymeric wall and oily core, respectively. The physicochemical parameters evaluated were: mean diameter and size distribution, polydispersity index, zeta potential, particle concentration and pH. An HPLC-UV validated method was used to determine the drug content and encapsulation efficiency. The in vitro release study using dialysis bags was performed to obtain the drug release profile from nanocapsules. The erlotinib-loaded nanocapsules were evaluated regarding their potential to inhibit the growth, induce apoptosis, interfere with the cell cycle and clonogenic survival of lung adenocarcinoma cell (A549). Results: The nanocapsule formulation presented z-average diameter of 171 ± 2 (PDI <0.10), zeta potential value of -8.17 ± 2.26 mV, number of particles per mL of 6.97 ± 0.22 × 1013, and pH value of 6.24 ± 0.02. The drug content and the encapsulation efficiency were nearly 100%. Except for the pH value, all these parameters remained the same after 30 days of storage. A controlled release of the drug was observed due to nanoencapsulation. The cytotoxicity assays demonstrated that the erlotinib-loaded nanocapsules showed higher antitumor activity compared to free drug. Induction of apoptosis was demonstrated by cell cycle analysis and Annexin-V/7AAD staining. In the clonogenic assay, erlotinib-loaded nanocapsules reduced 100% the number of colonies formed. Conclusions: Nanocapsules with appropriate nanotechnological properties and capable of controlling the erlotinib release were obtained. The in vitro studies in the A549 cell line showed an increase in antitumor effect and was demonstrated that the drug encapsulation is essential for this better activity.

Objetivos: Desenvolver e caracterizar nanocápsulas poliméricas contendo erlotinib, bem como avaliar sua atividade antitumoral in vitro em células de adenocarcinoma de pulmão humano. Metodologia: As nanocápsulas contendo erlotinib (0,5 mg.mL-1) foram obtidas pelo método de nanoprecipitação utilizando poli(ε-caprolactona) e óleo de copaíba como parede polimérica e núcleo oleoso, respectivamente. Os parâmetros físico-químicos avaliados foram: diâmetro médio e distribuição de tamanho, índice de polidispersão, potencial zeta, concentração de partículas e pH. Para determinação do teor e eficiência de encapsulação do erlotinib, utilizou-se metodologia validada por CLAE-UV. O estudo de liberação in vitro, utilizando sacos de diálise, foi realizado para obter o perfil de liberação do fármaco a partir das nanocápsulas. As nanocápsulas contendo erlotinib foram avaliadas quanto ao seu potencial de inibir o crescimento, induzir a apoptose, interferir com o ciclo celular e sobrevivência clonogênica de células de adenocarcinoma de pulmão, linhagem A549. Resultados: As nanocápsulas apresentaram diâmetro médio de 171 ± 2 (PDI < 0, 10), potencial zeta de −8,17 ± 2.26 mV, número de partículas por mL de 6,97 ± 0,22 × 1013 e pH de 6,24 ± 0,02. O teor e a eficiência de encapsulação foram próximos de 100%. Com exceção do pH, todos parâmetros mantiveram-se iguais após 30 dias de armazenamento em temperatura ambiente. Observou-se uma liberação controlada do fármaco devido à nanoencapsulação. Os ensaios de citotoxicidade demonstraram que as nanocápsulas contendo erlotinib apresentaram maior atividade antitumoral quando comparado com o fármaco livre. Também foi demonstrado indução de apoptose, pela análise de ciclo celular e marcação por Anexina-V conjugada ao 7-AAD. No ensaio clonogênico, as nanocápsulas contendo erlotinib reduziram 100% o número de colônias formadas. Conclusões: Foram obtidas nanocápsulas com propriedades nanotécnologicas adequadas e capazes de controlar a liberação do erlotinib. Os estudos in vitro na linhagem celular A549 demonstraram aumento no efeito antitumoral e foi demonstrado que o encapsulamento do fármaco é imprescindível para essa melhor atividade. / Purpose: To develop and characterise erlotinib-loaded polymeric nanocapsules and to evaluate its in vitro antitumor activity in human lung adenocarcinoma cells. Methodology: The erlotinib-loaded nanocapsules (0.5 mg.mL-1) were obtained by nanoprecipitation method using poly (ε-caprolactone) and copaiba oil as the polymeric wall and oily core, respectively. The physicochemical parameters evaluated were: mean diameter and size distribution, polydispersity index, zeta potential, particle concentration and pH. An HPLC-UV validated method was used to determine the drug content and encapsulation efficiency. The in vitro release study using dialysis bags was performed to obtain the drug release profile from nanocapsules. The erlotinib-loaded nanocapsules were evaluated regarding their potential to inhibit the growth, induce apoptosis, interfere with the cell cycle and clonogenic survival of lung adenocarcinoma cell (A549). Results: The nanocapsule formulation presented z-average diameter of 171 ± 2 (PDI <0.10), zeta potential value of -8.17 ± 2.26 mV, number of particles per mL of 6.97 ± 0.22 × 1013, and pH value of 6.24 ± 0.02. The drug content and the encapsulation efficiency were nearly 100%. Except for the pH value, all these parameters remained the same after 30 days of storage. A controlled release of the drug was observed due to nanoencapsulation. The cytotoxicity assays demonstrated that the erlotinib-loaded nanocapsules showed higher antitumor activity compared to free drug. Induction of apoptosis was demonstrated by cell cycle analysis and Annexin-V/7AAD staining. In the clonogenic assay, erlotinib-loaded nanocapsules reduced 100% the number of colonies formed. Conclusions: Nanocapsules with appropriate nanotechnological properties and capable of controlling the erlotinib release were obtained. The in vitro studies in the A549 cell line showed an increase in antitumor effect and was demonstrated that the drug encapsulation is essential for this better activity.

Introdução: A partir da descoberta da reação de Biginelli, diidropirimidinonas/tionas funcionalizadas têm se destacado como protótipos no desenvolvimento de fármacos, considerando diferentes alvos. O primeiro representante deste grupo de moléculas, com ação inibitória sobre a divisão celular, foi o monastrol, o qual é caracterizado como um inibidor alostérico da cinesina mitótica 5 (Eg5). Este mecanismo de ação representa um alvo promissor para a terapia antineoplásica, considerando que a Eg5 é uma proteína motora envolvida no movimento dos microtúbulos durante a divisão celular. Recentes investigações mostraram que a inserção de um anel aromático no N-1 do núcleo diidrotiopirimidínico seria capaz de otimizar a interação do ligante com a Eg5. Objetivos: Nesse sentido, a presente pesquisa teve por objetivo obter diidropirimidin-2-tionas N-1 aril substituídas, e avaliar seu potencial antiproliferativo em células de glioma. Métodos: Foi sintetizada uma quimioteca de 26 diidropirimidin-2-tionas N-aril substituídas, através da reação de Biginelli promovida por cloreto de trimetilsilano, utilizando uma série de ariltioureias previamente obtidas. A partir da análise do docking destes compostos com a Eg5, foram selecionados 4 deles para avaliação da atividade citotóxica em linhagem celular de glioma, utilizando o ensaio MTS. Resultados: Os derivados do monastrol substituídos em N-1 com 4NO2-Ar (LaSOM 301) e 4OMe-Ar (LaSOM 309) foram mais ativos que o monastrol na linhagem celular investigada. Enquanto o monastrol apresentou valor de IC50 superior à 100 μM, os compostos LaSOM 301 e LaSOM 309 apresentaram valores de IC50 de respectivamente 54,69 ± 4,92 μM e 57,74 ± 2,78 μM. Adicionalmente, o composto LaSOM 308, embora isento da hidroxila em meta, presente no monastrol, e N-1 substituído com 4OMe-Ar apresentou valor de IC50 inferior ao monastrol (78,26 ± 4,18 μM). Conclusões: As condições reacionais utilizadas, permitiram a funcionalização do N-1 de diidropirimidin- 2-tionas com diferentes substituintes. A inserção de um anel aromático substituído no N-1, do núcleo diidrotiopirimidínico consistiu em uma modificação estrutural capaz de gerar compostos com atividade antineoplásica, superior ao monastrol. / Introduction: Since the Biginelli reaction discovery, functionalized dihydropyrimidinones/ thiones have been emerged as prototypes for drug design in different targets. Monastrol was the first representative molecule of this group with inhibitory effect on cell division, which produces kinesin-5 (Eg5) inhibition. This action of mechanism is a promising target for anticancer therapy, whereas the motor protein Eg5 is involved in microtubule movement during the cell division. Recent results showed that the aromatic ring at N-1 position of dihydrothiopyrimidinic core would be able to optimize the interaction of the ligand with the Eg5. Objectives: In this context, this study aimed to obtain dihydropyrimidin-2-thiones N-1 aryl substituted, and to evaluate their antiproliferative activity on glioma cells. Methods: A chemical library of 26 dihydropyrimidin-2-thiones N-1 aryl substituted were synthetized employing the Biginelli reaction promoted by trimethylchlorosilane. Considering the results of docking analysis of these compounds with Eg5, four of them were selected for cytotoxic activity assessment on glioma cells, employing MTS assay. Results: The monastrol derivatives N-1 substituted with 4NO2-Ph (LaSOM 301) and 4OMe-Ph (LaSOM 309) showed higher activity than monastrol, in cell line studied. While monastrol showed IC50 value higher than 100 μM, LaSOM 301 and LaSOM 309 compounds showed IC50 values of 54.69 ± 4.92 μM and 57.74 ± 2.78 μM, respectively. Nevertheless, the LaSOM 309 compound, without hydroxyl group present in monastrol, and with N-1 4OMe-Ph substituted also showed IC50 value lower than monastrol (78.26 ± 4.18 μM). Conclusions: Reactional conditions employed in these research, allowed the N-1 functionalization of dihydropyrimidin-2-thiones, with several substituents. The insertion of a substituted aromatic ring at N-1 position, of dihydrothiopyrimidinic core, was a structural change able to generate compounds with antineoplasic activity, higher than monastrol.

Tese apresentada como requisito parcial para a obtenção do grau de Doutora em Química Analítica no curso de Pós-Graduação em Química, Setor de Ciências Exatas, Universidade Federal do Paraná. Orientador: Prof. Dr. Patricio Peralta- Zamora. Co-Orientadora: Profa. Dra. Iara Messerschmidt / Submitted by Nilson Junior (nilson.junior@unila.edu.br) on 2016-05-25T21:06:02Z No. of bitstreams: 2 GilceliaACordeiro_PPGQ_UFPR_2011.pdf: 2940510 bytes, checksum: 0005e19447a2a15bf1c2ad9fc6001378 (MD5) Recibo Deposito Legal_TESE_Gilcéia Aparecida Cordeiro.pdf: 229315 bytes, checksum: 6555acb6430c7e757d89b1cb6e13b523 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-25T21:06:25Z (GMT). No. of bitstreams: 2 GilceliaACordeiro_PPGQ_UFPR_2011.pdf: 2940510 bytes, checksum: 0005e19447a2a15bf1c2ad9fc6001378 (MD5) Recibo Deposito Legal_TESE_Gilcéia Aparecida Cordeiro.pdf: 229315 bytes, checksum: 6555acb6430c7e757d89b1cb6e13b523 (MD5) Previous issue date: 2011 / Na producao de medicamentos, a associacao de dois ou mais farmacos e uma pratica bastante frequente, uma vez que pode aperfeicoar o tratamento e melhorar a adesao do paciente a terapia prescrita. Nestes casos, a quantificacao de uma especie, na presenca de excipientes e outros farmacos pode ser bastante complexa, o que geralmente leva a utilizacao de tecnicas cromatograficas, econhecidamente demoradas e dispendiosas. Neste trabalho foram desenvolvidas metodologias espectroscopicas multivariadas para quantificacao simultanea de farmacos presentes em duas formulacoes farmaceuticas de relevancia - zidovudina (AZT)/lamivudina (3TC) e captopril (CAP)/hidroc orotiazida (HIDRO) - utilizando-se regressao por minimos quadrados parciais (PLSR), espectroscopia eletronica (UV-Vis) e espectroscopia na regiao do infravermelho com refletancia difusa (DRIFTS). Na espectroscopia eletronica em solucao foi possivel observar uma severa interferencia espectral no sinal dos farmacos, o que, de maneira geral, impede o desenvolvimento de modelos de calibracao convencionais. Por sua vez, o uso de ferramentas de calibracao multivariada (PLSR) permite o desenvolvimento de modelos utilizando-se praticamente toda a regiao espectral monitorada (190-300 nm para AZT/3TC) e um reduzido numero de variaveis latentes (VL). Em geral, os modelos permitem uma adequada analise dos medicamentos contendo associacao, com erros de previsao inferiores a 10%. Adicionalmente, o modelo multivariado pode ser utilizado com sucesso na avaliacao de parametros de dissolucao, proporcionando respostas compativeis com as obtidas por aplicacao de metodos cromatograficos farmacopeicos. Nos estudos envolvendo DRIFTS foram desenvolvidos inumeros modelos multivariados de calibracao, envolvendo diferentes regioes spectrais, diversos tipos de pre-processamento de sinais e numero de VL. Para a associacao AZT/3TC os melhores resultados envolveram as regioes espectrais do infravermelho medio e proximo, separadamente, utilizando MSC como pre-processamento de sinais e 2 VL. Nestas condicoes, baixos erros de previsao foram observados na analise de medicamentos (AZT„l 9%, 3TC<2%). Para a associacao CAP/HIDRO o modelo de melhor desempenho foi desenvolvido com 6 VL, dados autoescalados e regiao espectral do infravermelho medio. Neste caso, a previsao das amostras de medicamentos proporcionou erros de previsao da ordem de 5%, para ambos os farmacos em estudo. Finalmente, e importante salientar que as tecnicas espectroscopicas aqui estudadas apresentam importantes vantagens de ordem pratica, permitindo a laboracao de sistemas automatizados de controle on-line. Trata-se de uma caracteristica importante, reservada para poucas tecnicas instrumentais de analise.

Introdução: A partir da descoberta da reação de Biginelli, diidropirimidinonas/tionas funcionalizadas têm se destacado como protótipos no desenvolvimento de fármacos, considerando diferentes alvos. O primeiro representante deste grupo de moléculas, com ação inibitória sobre a divisão celular, foi o monastrol, o qual é caracterizado como um inibidor alostérico da cinesina mitótica 5 (Eg5). Este mecanismo de ação representa um alvo promissor para a terapia antineoplásica, considerando que a Eg5 é uma proteína motora envolvida no movimento dos microtúbulos durante a divisão celular. Recentes investigações mostraram que a inserção de um anel aromático no N-1 do núcleo diidrotiopirimidínico seria capaz de otimizar a interação do ligante com a Eg5. Objetivos: Nesse sentido, a presente pesquisa teve por objetivo obter diidropirimidin-2-tionas N-1 aril substituídas, e avaliar seu potencial antiproliferativo em células de glioma. Métodos: Foi sintetizada uma quimioteca de 26 diidropirimidin-2-tionas N-aril substituídas, através da reação de Biginelli promovida por cloreto de trimetilsilano, utilizando uma série de ariltioureias previamente obtidas. A partir da análise do docking destes compostos com a Eg5, foram selecionados 4 deles para avaliação da atividade citotóxica em linhagem celular de glioma, utilizando o ensaio MTS. Resultados: Os derivados do monastrol substituídos em N-1 com 4NO2-Ar (LaSOM 301) e 4OMe-Ar (LaSOM 309) foram mais ativos que o monastrol na linhagem celular investigada. Enquanto o monastrol apresentou valor de IC50 superior à 100 μM, os compostos LaSOM 301 e LaSOM 309 apresentaram valores de IC50 de respectivamente 54,69 ± 4,92 μM e 57,74 ± 2,78 μM. Adicionalmente, o composto LaSOM 308, embora isento da hidroxila em meta, presente no monastrol, e N-1 substituído com 4OMe-Ar apresentou valor de IC50 inferior ao monastrol (78,26 ± 4,18 μM). Conclusões: As condições reacionais utilizadas, permitiram a funcionalização do N-1 de diidropirimidin- 2-tionas com diferentes substituintes. A inserção de um anel aromático substituído no N-1, do núcleo diidrotiopirimidínico consistiu em uma modificação estrutural capaz de gerar compostos com atividade antineoplásica, superior ao monastrol. / Introduction: Since the Biginelli reaction discovery, functionalized dihydropyrimidinones/ thiones have been emerged as prototypes for drug design in different targets. Monastrol was the first representative molecule of this group with inhibitory effect on cell division, which produces kinesin-5 (Eg5) inhibition. This action of mechanism is a promising target for anticancer therapy, whereas the motor protein Eg5 is involved in microtubule movement during the cell division. Recent results showed that the aromatic ring at N-1 position of dihydrothiopyrimidinic core would be able to optimize the interaction of the ligand with the Eg5. Objectives: In this context, this study aimed to obtain dihydropyrimidin-2-thiones N-1 aryl substituted, and to evaluate their antiproliferative activity on glioma cells. Methods: A chemical library of 26 dihydropyrimidin-2-thiones N-1 aryl substituted were synthetized employing the Biginelli reaction promoted by trimethylchlorosilane. Considering the results of docking analysis of these compounds with Eg5, four of them were selected for cytotoxic activity assessment on glioma cells, employing MTS assay. Results: The monastrol derivatives N-1 substituted with 4NO2-Ph (LaSOM 301) and 4OMe-Ph (LaSOM 309) showed higher activity than monastrol, in cell line studied. While monastrol showed IC50 value higher than 100 μM, LaSOM 301 and LaSOM 309 compounds showed IC50 values of 54.69 ± 4.92 μM and 57.74 ± 2.78 μM, respectively. Nevertheless, the LaSOM 309 compound, without hydroxyl group present in monastrol, and with N-1 4OMe-Ph substituted also showed IC50 value lower than monastrol (78.26 ± 4.18 μM). Conclusions: Reactional conditions employed in these research, allowed the N-1 functionalization of dihydropyrimidin-2-thiones, with several substituents. The insertion of a substituted aromatic ring at N-1 position, of dihydrothiopyrimidinic core, was a structural change able to generate compounds with antineoplasic activity, higher than monastrol.

Introdução: A partir da descoberta da reação de Biginelli, diidropirimidinonas/tionas funcionalizadas têm se destacado como protótipos no desenvolvimento de fármacos, considerando diferentes alvos. O primeiro representante deste grupo de moléculas, com ação inibitória sobre a divisão celular, foi o monastrol, o qual é caracterizado como um inibidor alostérico da cinesina mitótica 5 (Eg5). Este mecanismo de ação representa um alvo promissor para a terapia antineoplásica, considerando que a Eg5 é uma proteína motora envolvida no movimento dos microtúbulos durante a divisão celular. Recentes investigações mostraram que a inserção de um anel aromático no N-1 do núcleo diidrotiopirimidínico seria capaz de otimizar a interação do ligante com a Eg5. Objetivos: Nesse sentido, a presente pesquisa teve por objetivo obter diidropirimidin-2-tionas N-1 aril substituídas, e avaliar seu potencial antiproliferativo em células de glioma. Métodos: Foi sintetizada uma quimioteca de 26 diidropirimidin-2-tionas N-aril substituídas, através da reação de Biginelli promovida por cloreto de trimetilsilano, utilizando uma série de ariltioureias previamente obtidas. A partir da análise do docking destes compostos com a Eg5, foram selecionados 4 deles para avaliação da atividade citotóxica em linhagem celular de glioma, utilizando o ensaio MTS. Resultados: Os derivados do monastrol substituídos em N-1 com 4NO2-Ar (LaSOM 301) e 4OMe-Ar (LaSOM 309) foram mais ativos que o monastrol na linhagem celular investigada. Enquanto o monastrol apresentou valor de IC50 superior à 100 μM, os compostos LaSOM 301 e LaSOM 309 apresentaram valores de IC50 de respectivamente 54,69 ± 4,92 μM e 57,74 ± 2,78 μM. Adicionalmente, o composto LaSOM 308, embora isento da hidroxila em meta, presente no monastrol, e N-1 substituído com 4OMe-Ar apresentou valor de IC50 inferior ao monastrol (78,26 ± 4,18 μM). Conclusões: As condições reacionais utilizadas, permitiram a funcionalização do N-1 de diidropirimidin- 2-tionas com diferentes substituintes. A inserção de um anel aromático substituído no N-1, do núcleo diidrotiopirimidínico consistiu em uma modificação estrutural capaz de gerar compostos com atividade antineoplásica, superior ao monastrol. / Introduction: Since the Biginelli reaction discovery, functionalized dihydropyrimidinones/ thiones have been emerged as prototypes for drug design in different targets. Monastrol was the first representative molecule of this group with inhibitory effect on cell division, which produces kinesin-5 (Eg5) inhibition. This action of mechanism is a promising target for anticancer therapy, whereas the motor protein Eg5 is involved in microtubule movement during the cell division. Recent results showed that the aromatic ring at N-1 position of dihydrothiopyrimidinic core would be able to optimize the interaction of the ligand with the Eg5. Objectives: In this context, this study aimed to obtain dihydropyrimidin-2-thiones N-1 aryl substituted, and to evaluate their antiproliferative activity on glioma cells. Methods: A chemical library of 26 dihydropyrimidin-2-thiones N-1 aryl substituted were synthetized employing the Biginelli reaction promoted by trimethylchlorosilane. Considering the results of docking analysis of these compounds with Eg5, four of them were selected for cytotoxic activity assessment on glioma cells, employing MTS assay. Results: The monastrol derivatives N-1 substituted with 4NO2-Ph (LaSOM 301) and 4OMe-Ph (LaSOM 309) showed higher activity than monastrol, in cell line studied. While monastrol showed IC50 value higher than 100 μM, LaSOM 301 and LaSOM 309 compounds showed IC50 values of 54.69 ± 4.92 μM and 57.74 ± 2.78 μM, respectively. Nevertheless, the LaSOM 309 compound, without hydroxyl group present in monastrol, and with N-1 4OMe-Ph substituted also showed IC50 value lower than monastrol (78.26 ± 4.18 μM). Conclusions: Reactional conditions employed in these research, allowed the N-1 functionalization of dihydropyrimidin-2-thiones, with several substituents. The insertion of a substituted aromatic ring at N-1 position, of dihydrothiopyrimidinic core, was a structural change able to generate compounds with antineoplasic activity, higher than monastrol.

O objetivo deste trabalho foi analisar uma proposta de Qualificação de Fornecedores passível de aplicação no âmbito dos Laboratórios Oficiais, e de alguma forma contribuir para a produção nacional, agregando qualidade aos insumos adquiridos e por conseqüência aos medicamentos produzidos pela Rede Pública, enriquecendo e qualificando o Parque Industrial Nacional e o Patrimônio Público. A pesquisa foi desenvolvida no Laboratório Oficial da Fundação Ezequiel Dias em Belo Horizonte (FUNED), MG, tendo sido reunidas informações dos Setores de Compras, Almoxarifado de Recebimento de Insumos, Planejamento de Produção, Garantia da Qualidade, Controle de Qualidade e Produção de Medicamentos. A pesquisa foi delineada através da Análise Documental dos registros que remeteram ao histórico de aquisição de insumos no ano de 2007. Foram analisadas AF (Autorizações de Fornecimento), AR (Autorizações de Recebimento), Check List de Recebimento de Insumos, Boletins da Divisão de Controle de Qualidade com registros de Análise Físico-Química de Matérias Primas, Relatórios de Não conformidade de Produto Acabado e de Matéria Prima. Houve revisão e adaptação do Método de Petrus para Qualificação de Fornecedores, especificamente para o Setor Farmacêutico. Os resultados alcançados demonstraram de forma positiva que a utilização da adaptação do Método de Petrus pode auxiliar na qualificação de insumos farmacêuticos, mas também demonstrou algumas dificuldades que remeteram a pesquisa à importância da Pré-Qualificação de Fornecedores na busca da Certificação e da Garantia da Qualidade dos medicamentos produzidos pelos Laboratórios Oficiais. / The aim of this study was to analyse a proposal of qualification of suppliers which could be applied in official laboratories, and somehow contribute for the national production, adding quality to purchased inputs and thus the drugs produced by the Brazilian governmental industry. These would enrich and qualify the national industry and public patrimony. This research was developed at Fundaçao Ezequiel Dias – FUNED’s Official Laboratory, in Belo Horizonte, MG. It was used information by Purchase, Warehouses, Production Planning, Quality Guaranties, Quality Control and Drug’s Production Departments. This study was designed by documentary analysis of records which recalled the historic acquisition in 2007. SA (supply authorizations), RA (receipt authorization), receipt of supply checklist, bulletins from the division of quality control with records of physic-chemical analysis of raw material, reports non-conformity of finished products and of raw materials were analysed. The Petrus’ Method for supplier’s qualification was revised and adapted, specifically for the pharmaceutical sector. The results showed that the use of the adaptation of Petrus’ Method can help qualify the pharmaceutical supplies but it also demonstrated some difficulties which pointed out the importance of pre-qualification of suppliers when aiming for the certification and quality guarantee for the produced drugs by official laboratories

O objetivo deste trabalho foi analisar uma proposta de Qualificação de Fornecedores passível de aplicação no âmbito dos Laboratórios Oficiais, e de alguma forma contribuir para a produção nacional, agregando qualidade aos insumos adquiridos e por conseqüência aos medicamentos produzidos pela Rede Pública, enriquecendo e qualificando o Parque Industrial Nacional e o Patrimônio Público. A pesquisa foi desenvolvida no Laboratório Oficial da Fundação Ezequiel Dias em Belo Horizonte (FUNED), MG, tendo sido reunidas informações dos Setores de Compras, Almoxarifado de Recebimento de Insumos, Planejamento de Produção, Garantia da Qualidade, Controle de Qualidade e Produção de Medicamentos. A pesquisa foi delineada através da Análise Documental dos registros que remeteram ao histórico de aquisição de insumos no ano de 2007. Foram analisadas AF (Autorizações de Fornecimento), AR (Autorizações de Recebimento), Check List de Recebimento de Insumos, Boletins da Divisão de Controle de Qualidade com registros de Análise Físico-Química de Matérias Primas, Relatórios de Não conformidade de Produto Acabado e de Matéria Prima. Houve revisão e adaptação do Método de Petrus para Qualificação de Fornecedores, especificamente para o Setor Farmacêutico. Os resultados alcançados demonstraram de forma positiva que a utilização da adaptação do Método de Petrus pode auxiliar na qualificação de insumos farmacêuticos, mas também demonstrou algumas dificuldades que remeteram a pesquisa à importância da Pré-Qualificação de Fornecedores na busca da Certificação e da Garantia da Qualidade dos medicamentos produzidos pelos Laboratórios Oficiais. / The aim of this study was to analyse a proposal of qualification of suppliers which could be applied in official laboratories, and somehow contribute for the national production, adding quality to purchased inputs and thus the drugs produced by the Brazilian governmental industry. These would enrich and qualify the national industry and public patrimony. This research was developed at Fundaçao Ezequiel Dias – FUNED’s Official Laboratory, in Belo Horizonte, MG. It was used information by Purchase, Warehouses, Production Planning, Quality Guaranties, Quality Control and Drug’s Production Departments. This study was designed by documentary analysis of records which recalled the historic acquisition in 2007. SA (supply authorizations), RA (receipt authorization), receipt of supply checklist, bulletins from the division of quality control with records of physic-chemical analysis of raw material, reports non-conformity of finished products and of raw materials were analysed. The Petrus’ Method for supplier’s qualification was revised and adapted, specifically for the pharmaceutical sector. The results showed that the use of the adaptation of Petrus’ Method can help qualify the pharmaceutical supplies but it also demonstrated some difficulties which pointed out the importance of pre-qualification of suppliers when aiming for the certification and quality guarantee for the produced drugs by official laboratories

O objetivo deste trabalho foi analisar uma proposta de Qualificação de Fornecedores passível de aplicação no âmbito dos Laboratórios Oficiais, e de alguma forma contribuir para a produção nacional, agregando qualidade aos insumos adquiridos e por conseqüência aos medicamentos produzidos pela Rede Pública, enriquecendo e qualificando o Parque Industrial Nacional e o Patrimônio Público. A pesquisa foi desenvolvida no Laboratório Oficial da Fundação Ezequiel Dias em Belo Horizonte (FUNED), MG, tendo sido reunidas informações dos Setores de Compras, Almoxarifado de Recebimento de Insumos, Planejamento de Produção, Garantia da Qualidade, Controle de Qualidade e Produção de Medicamentos. A pesquisa foi delineada através da Análise Documental dos registros que remeteram ao histórico de aquisição de insumos no ano de 2007. Foram analisadas AF (Autorizações de Fornecimento), AR (Autorizações de Recebimento), Check List de Recebimento de Insumos, Boletins da Divisão de Controle de Qualidade com registros de Análise Físico-Química de Matérias Primas, Relatórios de Não conformidade de Produto Acabado e de Matéria Prima. Houve revisão e adaptação do Método de Petrus para Qualificação de Fornecedores, especificamente para o Setor Farmacêutico. Os resultados alcançados demonstraram de forma positiva que a utilização da adaptação do Método de Petrus pode auxiliar na qualificação de insumos farmacêuticos, mas também demonstrou algumas dificuldades que remeteram a pesquisa à importância da Pré-Qualificação de Fornecedores na busca da Certificação e da Garantia da Qualidade dos medicamentos produzidos pelos Laboratórios Oficiais. / The aim of this study was to analyse a proposal of qualification of suppliers which could be applied in official laboratories, and somehow contribute for the national production, adding quality to purchased inputs and thus the drugs produced by the Brazilian governmental industry. These would enrich and qualify the national industry and public patrimony. This research was developed at Fundaçao Ezequiel Dias – FUNED’s Official Laboratory, in Belo Horizonte, MG. It was used information by Purchase, Warehouses, Production Planning, Quality Guaranties, Quality Control and Drug’s Production Departments. This study was designed by documentary analysis of records which recalled the historic acquisition in 2007. SA (supply authorizations), RA (receipt authorization), receipt of supply checklist, bulletins from the division of quality control with records of physic-chemical analysis of raw material, reports non-conformity of finished products and of raw materials were analysed. The Petrus’ Method for supplier’s qualification was revised and adapted, specifically for the pharmaceutical sector. The results showed that the use of the adaptation of Petrus’ Method can help qualify the pharmaceutical supplies but it also demonstrated some difficulties which pointed out the importance of pre-qualification of suppliers when aiming for the certification and quality guarantee for the produced drugs by official laboratories