Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-11-20T16:44:55Z No. of bitstreams: 1 Tunes.pdf: 27891545 bytes, checksum: 4feb76814de1de7da1d4a476de6f2134 (MD5) / Approved for entry into archive by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-11-20T16:45:17Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tunes.pdf: 27891545 bytes, checksum: 4feb76814de1de7da1d4a476de6f2134 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-11-20T16:45:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tunes.pdf: 27891545 bytes, checksum: 4feb76814de1de7da1d4a476de6f2134 (MD5) Previous issue date: 2015 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisa Rene Rachou. Belo Horizonte, MG, Brasil / No Brasil, a doença de Chagas e as leishmanioses têm importante impacto na saúde pública. Os fármacos usados no tratamento dessas enfermidades apresentam limitações que tornam necessária a busca por novas alternativas terapêuticas. Nesse sentido, no presente estudo foram selecionados sete produtos naturais bioativos (PNB) e um derivado de produto natural (dPNB) e suas atividades tripanocida e leishmanicida foram determinadas e/ou confirmadas. A eleuterine, a tiofenonaftoquinona (TNQ) e a aurentiacina foram descritas como leishmanicidas pela primeira vez, sendo suas atividades antiamastigota de 99, 99 e 98 %, respectivamente. O lapachol, a chalcona 1 e a chalcona 2 tiveram o efeito leishmanicida confirmado com atividade de 85, 99 e 99 %, respectivavente. Nenhuma substância foi considerada ativa no modelo de T. cruzi utilizado. Devido às quantidades de substâncias disponíveis, apenas o lapachol e a TNQ tiveram seus mecanismos de ação leishmanicida estudados. As concentrações inibitórias de 50% (CI50) da TNQ foram inferiores àquelas do lapachol em promastigotas (2 e 25 μM), amastigotas recuperadas de lesão (22 e 224 μM) e amastigotas intracelulares (7,4 e 84 μM). A razão entre a CI50 em amastigotas intracelulares e macrófagos foi utilizada para o cálculo do índice de seletividade, sendo este 3,8 para o lapachol e 7,7 para a TNQ. Os PNB e dPNB leishmanicida foram avaliados quanto à atividade inibitória da enzima tripanotiona redutase (TR), sendo que nenhum foi capaz de inibir a enzima. Os efeitos induzidos por TNQ e lapachol sobre a atividade mitocondrial de promastigotas foram avaliados por citometria de fluxo e respirometria. O tratamento com lapachol induziu perda do potencial de membrana mitocondrial e reduziu o consumo de oxigênio pelos parasitos. Por sua vez, a TNQ não alterou esses parâmetros. Análises de microscopia eletrônica de transmissão mostraram que o tratamento com lapachol ou TNQ induziu danos no complexo de Golgi e na bolsa flagelar, formação de vesículas e perfil de autofagia. O lapachol, mas não a TNQ, também induziu alterações ultraestruturais nas mitocôndrias das promastigotas. Em conjunto, os resultados permitem propor que a mitocôndria seja um importante alvo celular para o lapachol. Uma vez que a TNQ não causou alterações na mitocôndria dos parasitos, mas induziu danos em outras organelas, pode-se propor que seu mecanismo de ação esteja relacionado à indução de estresse oxidativo. Este trabalho reforça a importância dos PNB na descoberta de novas substâncias bioativas, as quais podem ser objeto de estudos de mecanismos de ação, a fim de se expandir o conhecimento disponível para o processo de desenvolvimento de novos fármacos usados para o tratamento de endemias que afligem milhões de pessoas como as leishmanioses e a doença de Chagas. / In Brazil, Chagas disease and leishmaniasis cause great impact on public health. The drugs currently used to treat these diseases have limitations that make necessary the search for new therapeutic alternatives. In this context, seven bioactive natural products (BNP) and one derivative (BNPd) were selected for investigations. Their trypanocidal and leishmanicidal activities were detected or confirmed. Eleutherine, naphthothiophenquinone (TNQ) and aurentiacin had their leishmanicidal activity described for the first time in this study, reducing almost 100% of the parasites growth. Lapachol, chalcone 1 and chalcone 2 had their leishmanicidal activity confirmed. None were active on T. cruzi intracellular amastigote and trypomastigote model. Because of the available amounts of compounds, only lapachol and TNQ had their leishmanicidal mechanism of action studied. The inhibitory concentrations of 50% of the parasite growth (IC50) induced by TNQ were inferior of that of lapachol in promastigotes (2 μM and 25 μM), lesion derived amastigotes (22 μM and 224 μM) and intracellular amastigotes (7.4 μM and 84 μM). The ratio between the IC50 on macrophages and intracellular amastigotes was used to calculate the selectivity index, lapachol’s was 3.8 and TNQ’s was 7.7. The leishmanicidal BNP and BNPd were evaluated as to their ability to inhibit trypanothione reductase (TR) and none of the compounds were able to inhibit the enzyme. The effects induced by the compounds on promastigotes mitochondrial activity were assessed using flow citometry and respirometry. Treatment using lapachol induced loss of mitochondrial membrane potential and reduced oxygen consumption by the parasites. On the other hand, TNQ did not alter those parameters. Transmission electron microscopy showed that lapachol and TNQ induced damage to the Golgi complex, flagellar pocket, formation of vesicles and autophagy profile. Lapachol, but not TNQ, induced ultrastrucutral alterations on promastigotes mitochondria. These results suggest that mitochondria are an important target for lapachol. As TNQ did not alter the parasites mitochondrial function or structure, but induced important ultrastructural alterations in other organelles, we can assume that its mechanism of action could be related to induction of oxidative stress. The present work reinforces the importance of BNP in the discovery of new active compounds that can be used for mechanism of action studies, contributing to the knowledge required for drug development to treat diseases that afflict millions of people worldwide such as leishmaniasis and Chagas diseases

Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2016-04-12T19:03:42Z No. of bitstreams: 1 Dissertacao_BCM_EmersondeCastroBarbosa.pdf: 6431092 bytes, checksum: 15243f7b5580193cfc7b7ad5b935a77a (MD5) / Approved for entry into archive by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2016-04-12T19:06:13Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertacao_BCM_EmersondeCastroBarbosa.pdf: 6431092 bytes, checksum: 15243f7b5580193cfc7b7ad5b935a77a (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-12T19:06:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao_BCM_EmersondeCastroBarbosa.pdf: 6431092 bytes, checksum: 15243f7b5580193cfc7b7ad5b935a77a (MD5) Previous issue date: 2015 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas René Rachou. Belo Horizonte, MG, Brasil / Produtos naturais são potenciais fontes alternativas para o desenvolvimento de antivirais para o tratamento da dengue, assim como de outras doenças causadas por vírus da família Flaviviridae ou mesmo para um amplo espectro de viroses. Neste estudo foi feita a triagem da atividade in vitro contra o Dengue virus 2 (DENV-2) de 3101 extratos, provenientes de plantas e de fungos da Coleção de Amostras para Bioensaios da Fiocruz. Para tal, células BHK-21 foram infectadas com DENV-2 e tratadas simultaneamente com 25 μg/mL de extrato sendo o resultado analisado por dois métodos: observação do grau de inibição do efeito citopático (ECP) por microscopia óptica e análise da viabilidade celular pelo ensaio colorimétrico do MTT. Dentre os 3101 extratos testados, 115 extratos apresentaram atividade antiviral contra DENV-2 e foram selecionados para a determinação da respectiva concentração efetiva 50 (CE 50). Cinquenta e cinco destes extratos foram obtidos de plantas pertencentes a 20 famílias distintas: Amaryllidaceae (3), Annonaceae (1), Asteraceae (5), Begoniaceae (1), Clusiaceae (1), Combretaceae (1), Erythroxylaceae (1), Fabaceae 4), Lythraceae (2), Malpighiaceae (8), Malvaceae (1), Melastomataceae (2), Melochia (1), Myrtaceae (3), Rubiaceae (8), Sapindaceae (9), Ochnaceae(1), Primulaceae (1), Vitaceae (1), Vochysiaceae (1). Os demais extratos (60) foram obtidos de culturas de fungos endofíticos coletados no Brasil, no continente Antártico e no Deserto do Atacama, ainda não identificados. Até o momento, os extratos vegetais mais promissores foram obtidos de plantas da família Amaryllidaceae (IS = 32,15) e da família Fabaceae (IS = 20,47) e (IS = 24,47). Vinte extratos fúngicos apresentaram valores de CE 50 que variaram entre 3,1 a 12,5 μg/mL e sem citotoxicidade aparente até a concentração de 100 μg/mL. Nossos resultados mostram que tais plantas e fungos são fontes promissoras de substâncias com ação antiviral contra DENV. / Natural products are potential alternat ive sources for the development of antiviral drugs for dengue treatment of, as well as for other diseases caused by viruses of the Flaviviridae family or even caused by a br oad spectrum of viruses. In this study, were performed an in vitro screening for activity against Dengue virus (DENV-2) of 3101 extracts fr om plants and fungi belonging to Fiocruz Minas extract sample collection. To this end, BHK-21 cells infected with DENV-2 were simultaneously treated with 25 μg/mL of extract and t he results analyzed by two methods: observing the degree of inhibiti on of DENV cytopathic effect (CPE) by optical microscopy and also by analysis of cell viability MTT colorimetric assay. Among the 3101 extracts tested, 115 extrac ts showed antiviral activity against DENV-2 and were selected for determination of its half maximal effective concentration (EC 50 ). Fifty-five of these extracts ar e taken from plants belonging to 20 different families: Amaryllidaceae (3), Annonaceae (1), Asteraceae (5), Begoniaceae (1), Clusiaceae (1), Combretaceae (1), Erythroxylaceae (1), Fabaceae (4), Lythraceae (2), Malpighiaceae (8), Malvaceae (1), Melastomataceae (2), Melochia (1), Myrtaceae (3), Rubiaceae (8), Sapindaceae (9), Ochnaceae (1), Primulaceae (1) Vitaceae (1), Vochysiaceae (1). The other extracts (60) were obtained from endophytic fungal cu ltures collected in Brazil, from Antarctic and the Atacama Desert soils, not identified yet. To date, the most promis ing plant extracts were obtained from plants of the Amaryllidaceae family (IS = 32.15) and Fabaceae (IS = 20.47) and (IS = 24.47). Twent y fungal extracts showed EC 50 values ranging from 3.1 to 12.5 mg/mL without any apparent cyt otoxicity up to the concentration of 100 μg/mL. Our results show that these pl ants and fungi are prom ising sources of substances with antiviral action against Dengue virus.

TOGASHI, R. H. Atividade biológica das lectinas de sementes de erythrina fusca e velutina, de algas marinhas hypnea musciformes, bryothamnion seaforthii e triquetrum e do produto natural diterpeno casbano, em culturas de pseudomonas aeruginosa. 2010. 82 F. Dissertação (Mestrado em Biotecnologia) - Campus de Sobral, Universidade Federal do Ceará, Sobral, 2010. / Submitted by Djeanne Costa (djeannecosta@gmail.com) on 2016-06-07T15:29:49Z No. of bitstreams: 1 2010_dis_rhtogashi.pdf: 31631991 bytes, checksum: f1ded1dee8bb4f2cc72557b303d61a93 (MD5) / Approved for entry into archive by Djeanne Costa (djeannecosta@gmail.com) on 2016-06-08T12:09:37Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2010_dis_rhtogashi.pdf: 31631991 bytes, checksum: f1ded1dee8bb4f2cc72557b303d61a93 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-08T12:09:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2010_dis_rhtogashi.pdf: 31631991 bytes, checksum: f1ded1dee8bb4f2cc72557b303d61a93 (MD5) Previous issue date: 2010 / In this study the biological activity of seeds lectins from Erythrina velutina and fusca, marine algae Hypnea musciformis, Bryothamnion seaforthii and triquetrum and the diterpene casbane, a natural product isolated from Croton nepetaefolius was evaluated upon Pseudomonas aeruginosa ATCC 10145. We compared the in vitro effect of lectins and diterpene casbane on colonies of P. aeruginosa in microtiter plates. Investigated the action of lectins from marine algae H. musciforme of seeds of Erythrina velutina, and diterpeno casbano in the process of formation of P. aeruginosa biofilm on polystyrene plates, and identified among lectins: E. velutina, H. musciforme and diterpene casbane, the one with greater potential for application in controlling the growth of colonies of P. aeruginosa. The lectins tested were able to inhibit growth and biofilm formation of P. aeruginosa in the studied conditions. Moreover, diterpene casbane at a concentration of 500 mg/mL in 18 hours, was able to inhibit the growth of P. aeruginosa in 40%, compared to positive control. This inhibition was observed until a concentration of 125 mg/mL. However, the inhibition of biofilm formation of P. aeruginosa there was no observed at the concentrations used in this study / Neste trabalho avaliamos a atividade biológica de lectinas de sementes de Erythrina fusca e velutina, de algas marinhas Hypnea musciformes, Bryothamnion seaforthii e triquetrum e do diterpeno casbano, um produto natural isolado de Croton nepetaefolius, sobre Pseudomonas aeruginosa ATCC 10145. Foi comparada a ação in vitro das 5 lectinas e do diterpeno casbano, sobre colônias de P. aeruginosa, em placas de poliestireno. Investigada a ação das lectinas de alga marinha H.musciforme, de sementes de Erythrina velutina, e do diterpeno casbano, no processo de formação do biofilme bacteriano de P.aeruginosa, em placas de poliestireno; e identificado entre as lectinas de E.velutina, H.musciforme e diterpeno casbano, aquele com maior potencial de aplicação no controle do crescimento de colônias de P. aeruginosa. As lectinas testadas não foram capazes de inibir o crescimento e a formação de biofilme de Pseudomonas aeruginosa nas condições experimentadas. Por outro lado, diterpeno casbano, na concentração de 500 μg/mL em 18 horas, foi capaz de inibir o crescimento de P. aeruginosa em 40%, comparado ao controle positivo. Esta inibição foi observada até uma concentração de 125 μg/mL. Entretanto, não foi observada inibição da formação do biofilme da P. aeruginosa nas concentrações utilizadas neste estudo