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Estudos dos produtos da oxidação não enzimática do ácido docosahexaenoico como possíveis biomarcadores para doenças neurodegenerativas / Study of Docosahexaenoic acid non-enzymatic oxidation products as biomarkers for neurodegenerative diseasesDerogis, Priscilla Bento Matos Cruz 05 September 2014 (has links)
Os n-3 e n-6 são duas famílias de ácidos graxos poli-insaturados. Os ácidos graxos de cadeia longa como o ácido araquidônico (AA) e docosahexaenoico (DHA) apresentam importantes funções no desenvolvimento e funcionamento do cérebro. Os produtos de oxidação dos ácidos graxos poli-insaturados estão presentes ou aumentados ao longo do desenvolvimento de doenças neurodegenerativas. A caracterização de tais produtos é crítica para o estudo que busca entender o seu papel fisiopatológico no desenvolvimento de tais doenças. No presente trabalho, buscou-se o desenvolvimento de uma ferramenta analítica sensível e específica para a detecção e quantificação dos hidroperóxidos e hidróxidos do AA (HpETE e HETE), do seu precursor, o ácido linoleico (HpODE e HODE) e do DHA (HpDoHE e HDoHE). Estes hidroperóxidos foram sintetizados por fotooxidação e os hidróxidos correspondentes foram obtidos através da redução com o NaBH4. Os isômeros isolados foram caracterizados por LC-MS/MS. Os íons produto específicos de cada isômero foram escolhidos para a construção do método de monitoramento de reação selecionada (selected reaction monitoring - SRM) para a realização da análise quantitativa dos analitos de interesse. Cabe salientar que os dados obtidos poderão ser utilizados em bibliotecas de análise lipidômica e oxi-lipidômica pois serão essenciais para a identificação e quantificação dos analítos de interesse do presente estudo em diversas doenças. Utilizando o método padronizado, buscamos investigar o papel dos hidroperóxidos e hidróxidos do DHA, LA e AA em um modelo animal para a esclerose lateral amiotrófica (ELA), uma doença neurodegenerativa que acomete neurônios motores. Foi observado um aumento nos níveis de 13-HpODE, 9-HpODE e 12-HETE no córtex motor dos animais avaliados. Adicionalmente, foram observadas alterações nas taxas lipólica e lipogênica no tecido adiposo para os animais ELA em relação aos respectivos controles. Em conjunto, os dados apresentados no presente trabalho corroboram com os trabalhos da literatura que associam alteração dos níveis dos produtos de oxidação dos ácidos graxos poli-insaturados em doenças neurodegenerativas e o metabolismo energético alterado em ELA. Futuramente é necessária uma investigação mais ampla dos níveis dos hidroperóxidos e hidróxidos lipídicos em diferentes tecidos e do metabolismo lipídico, e os conhecimentos gerados poderão ser uma importante fonte de novas opções terapêuticas para os pacientes portadores de ELA. / The n-3 and n-6 are two olyunsaturated fatty acids families. The long chain fatty acids such as arachidonic (AA) and docosahexaenoic acid (DHA) have important roles in the development and function of the brain. Polyunsaturated fatty acids (PUFAs) oxidation products are present or increased during the progression of neurodegenerative diseases. The characterization of DHA oxidation products is critical to understand their roles in the development of such diseases. In the present study, we sought to develop a sensitive and specific analytical tool for the detection and quantification of AA hydroperoxides and hydroxides (HPETE and HETE), its precursor linoleic acid (HPODE and HODE) and DHA (HpDoHE and HDoHE). These hydroperoxides were synthesized by photooxidation and the corresponding hydroxides were obtained by reduction with NaBH4. The isolated isomers were characterized by LC-MS/MS, and unique and specific fragment ions were chosen to construct a selected reaction monitoring (SRM) method for the targeted quantitative analysis. It should be emphasized that the data obtained - in the form of lipidomics and oxy-lipidomics libraries - may be used to assist in several diseases. Using the standardized method, we investigated the role of hydroperoxides and hydroxides of DHA, LA and AA in an animal model of amyotrophic lateral sclerosis (ALS), a neurodegenerative disease that affects motor neurons. Increased levels of 13-HPODE, 9-HPODE and 12-HETE were observed in the animals motor cortex. Additionally, results show changes in lipogenic and lipolytic rates in adipose tissue for ALS animals when compared to their respective controls. Altogether, the data presented herein corroborate with the literature by linking altered levels of PUFAs oxidation products in neurodegenerative diseases with altered energetic metabolism in ALS. In the future, a more extensive investigation of the hydroperoxide and hydroxide level in different tissues as well as the lipid metabolism must be done, which could lead to new therapeutic options for ALS patients
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Estudos dos produtos da oxidação não enzimática do ácido docosahexaenoico como possíveis biomarcadores para doenças neurodegenerativas / Study of Docosahexaenoic acid non-enzymatic oxidation products as biomarkers for neurodegenerative diseasesPriscilla Bento Matos Cruz Derogis 05 September 2014 (has links)
Os n-3 e n-6 são duas famílias de ácidos graxos poli-insaturados. Os ácidos graxos de cadeia longa como o ácido araquidônico (AA) e docosahexaenoico (DHA) apresentam importantes funções no desenvolvimento e funcionamento do cérebro. Os produtos de oxidação dos ácidos graxos poli-insaturados estão presentes ou aumentados ao longo do desenvolvimento de doenças neurodegenerativas. A caracterização de tais produtos é crítica para o estudo que busca entender o seu papel fisiopatológico no desenvolvimento de tais doenças. No presente trabalho, buscou-se o desenvolvimento de uma ferramenta analítica sensível e específica para a detecção e quantificação dos hidroperóxidos e hidróxidos do AA (HpETE e HETE), do seu precursor, o ácido linoleico (HpODE e HODE) e do DHA (HpDoHE e HDoHE). Estes hidroperóxidos foram sintetizados por fotooxidação e os hidróxidos correspondentes foram obtidos através da redução com o NaBH4. Os isômeros isolados foram caracterizados por LC-MS/MS. Os íons produto específicos de cada isômero foram escolhidos para a construção do método de monitoramento de reação selecionada (selected reaction monitoring - SRM) para a realização da análise quantitativa dos analitos de interesse. Cabe salientar que os dados obtidos poderão ser utilizados em bibliotecas de análise lipidômica e oxi-lipidômica pois serão essenciais para a identificação e quantificação dos analítos de interesse do presente estudo em diversas doenças. Utilizando o método padronizado, buscamos investigar o papel dos hidroperóxidos e hidróxidos do DHA, LA e AA em um modelo animal para a esclerose lateral amiotrófica (ELA), uma doença neurodegenerativa que acomete neurônios motores. Foi observado um aumento nos níveis de 13-HpODE, 9-HpODE e 12-HETE no córtex motor dos animais avaliados. Adicionalmente, foram observadas alterações nas taxas lipólica e lipogênica no tecido adiposo para os animais ELA em relação aos respectivos controles. Em conjunto, os dados apresentados no presente trabalho corroboram com os trabalhos da literatura que associam alteração dos níveis dos produtos de oxidação dos ácidos graxos poli-insaturados em doenças neurodegenerativas e o metabolismo energético alterado em ELA. Futuramente é necessária uma investigação mais ampla dos níveis dos hidroperóxidos e hidróxidos lipídicos em diferentes tecidos e do metabolismo lipídico, e os conhecimentos gerados poderão ser uma importante fonte de novas opções terapêuticas para os pacientes portadores de ELA. / The n-3 and n-6 are two olyunsaturated fatty acids families. The long chain fatty acids such as arachidonic (AA) and docosahexaenoic acid (DHA) have important roles in the development and function of the brain. Polyunsaturated fatty acids (PUFAs) oxidation products are present or increased during the progression of neurodegenerative diseases. The characterization of DHA oxidation products is critical to understand their roles in the development of such diseases. In the present study, we sought to develop a sensitive and specific analytical tool for the detection and quantification of AA hydroperoxides and hydroxides (HPETE and HETE), its precursor linoleic acid (HPODE and HODE) and DHA (HpDoHE and HDoHE). These hydroperoxides were synthesized by photooxidation and the corresponding hydroxides were obtained by reduction with NaBH4. The isolated isomers were characterized by LC-MS/MS, and unique and specific fragment ions were chosen to construct a selected reaction monitoring (SRM) method for the targeted quantitative analysis. It should be emphasized that the data obtained - in the form of lipidomics and oxy-lipidomics libraries - may be used to assist in several diseases. Using the standardized method, we investigated the role of hydroperoxides and hydroxides of DHA, LA and AA in an animal model of amyotrophic lateral sclerosis (ALS), a neurodegenerative disease that affects motor neurons. Increased levels of 13-HPODE, 9-HPODE and 12-HETE were observed in the animals motor cortex. Additionally, results show changes in lipogenic and lipolytic rates in adipose tissue for ALS animals when compared to their respective controls. Altogether, the data presented herein corroborate with the literature by linking altered levels of PUFAs oxidation products in neurodegenerative diseases with altered energetic metabolism in ALS. In the future, a more extensive investigation of the hydroperoxide and hydroxide level in different tissues as well as the lipid metabolism must be done, which could lead to new therapeutic options for ALS patients
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AVALIAÇÃO DO ESTRESSE OXIDATIVO ATRAVÉS DA DETERMINAÇÃO DE PRODUTOS DA OXIDAÇÃO AVANÇADA DE PROTEÍNAS (AOPP) EM PACIENTES COM ANEMIA MICROCÍTICA E HIPOCRÔMICA / EVALUATION OF OXIDATIVE STRESS BY DETERMINATION OF ADVANCED OXIDATION PROTEIN PRODUCTS (AOPP) IN PATIENTS WITH ANEMIA MICROCYTIC AND HYPOCROMICDanieli, Karina 31 August 2011 (has links)
The etiology of anemia is characterized by abnormal hemoglobin synthesis. Iron
deficiency is characterized by microcytic and hipochromic red cells and low serum
ferritin, being the most prevalent nutritional deficiency worldwide, responsible for iron
deficiency anemia (FA). Anemia of chronic disease (ACD) is considered a clinical
syndrome associated with chronic inflammation, infectious disease, neoplastic or
traumatic, being the second most frequent cause of anemia. The severity of anemia
correlates with the degree of pathology. Both have functional iron deficiency. The
objective of this study was to evaluate hematological and inflammatory, as well as the
presence of oxidative stress in patients with anemia. The blood analyzer was done by
the CBC, automated hematology analyzer processed, Sysmex® (Automated
Hematology Analyzer). The quantitative determination of ferritin is serum was done in
IMMULITE analyzer. Levels of CRP and AOPP were performed in serum by automated
Cobas MIRA® (Roche Diagnostics). Statistical analysis was performed using
GraphPad Prism 5. We analyzed 70 patients with microcytic and hypochromic anemia.
Of these, 29 (41.43%) were diagnosed as iron deficiency anemia and 41 (58.57%) with
anemia of chronic disease. As a control group, we used samples from 44 patients with
hematological parameters, serum ferritin, CRP and AOPP normal. The values of MCV,
MCH and MCHC significantly lower in iron deficiency anemia. Ferritin levels showed
that it can be considered both a measure of iron store as an inflammatory marker. In
ACD there is increased production of inflammatory cytokines, which, in turn, increases
the concentration of C-reactive protein (CRP). The results indicate that AOPP in both
groups with anemia showed increased levels of this marker, which indicates the
presence of oxidative stress, probably caused by increased production of free radicals
and decreases in enzyme activities of the antioxidant defense system of erythrocytes. / A etiologia das anemias caracteriza-se pela síntese anormal de hemoglobina. A
deficiência de ferro é caracterizada por eritrócitos microcíticos e hipocrômicos e por
ferritina sérica baixa, sendo a carência nutricional mais prevalente em todo o mundo,
responsável pela Anemia Ferropriva (AF). A Anemia de Doença Crônica (ADC) é
considerada uma síndrome clínica, associada à inflamação crônica, doença infecciosa,
traumática ou neoplásica, sendo a segunda causa mais freqüente de anemia. Ambas
apresentam deficiência funcional de ferro. O objetivo deste trabalho foi avaliar
parâmetros hematológicos e inflamatórios, bem como a presença de estresse
oxidativo em pacientes com anemia. A análise hematológica foi feita através do
hemograma, processado em analisador hematológico automatizado, Sysmex®
(Automated Hematology Analyzer). O doseamento quantitativo da ferritina no soro foi
feito em analisador IMMULITE. A dosagem de Proteína C-Reativa (PCR) e de
Produtos da Oxidação Avançada de Proteínas (AOPP) foram realizadas no soro
através do sistema automatizado Cobas MIRA® (Roche Diagnostics). A análise
estatística foi realizada através do programa GraphPad Prism 5. Foram analisados 70
pacientes portadores de anemia microcítica e hipocrômica. Destes, 29 (41,43%) foram
diagnosticados como anemia ferropriva e 41 (58,57%) com anemia de doença crônica.
Como grupo controle, foram utilizadas amostras de 44 indivíduos com parâmetros
hematológicos, níveis de ferritina, PCR e AOPP dentro da normalidade. Os valores de
VCM, HCM e CHCM foram significativamente menores na anemia ferropriva. Os níveis
de ferritina revelaram que ela pode ser considerada tanto uma medida das reservas de
ferro quanto um marcador inflamatório. Na ADC há aumento da produção de citocinas
inflamatórias, que, por sua vez, aumenta também a concentração de PCR. Os
resultados do AOPP indicam que ambos os grupos com anemia apresentaram níveis
aumentados deste marcador, o que indica a presença de estresse oxidativo,
provavelmente causado por aumento na produção de radicais livres e declínio das
atividades das enzimas do sistema de defesa antioxidante dos eritrócitos.
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