Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde, 2015. / Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2016-02-15T12:20:13Z No. of bitstreams: 1 2015_PatriciaMarquesRodrigues.pdf: 10230066 bytes, checksum: 31622d20cc9eadea8b9dc79c08e4b2ce (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2016-02-19T16:26:32Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_PatriciaMarquesRodrigues.pdf: 10230066 bytes, checksum: 31622d20cc9eadea8b9dc79c08e4b2ce (MD5) / Made available in DSpace on 2016-02-19T16:26:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_PatriciaMarquesRodrigues.pdf: 10230066 bytes, checksum: 31622d20cc9eadea8b9dc79c08e4b2ce (MD5) / Pouteria ramiflora (Mart.) Radlk., espécie comumente encontrada no Cerrado é popularmente conhecida como, “curriola” (“curiola”), “brasa-viva”, “figo-do-cerrado” entre outros. Essa planta produz frutos comestíveis e é usada na medicina popular contra hiperlipidemias e para tratar vermes, disenteria, dor e inflamação. Extratos dessa espécie apresentam atividades alelopática, anti-inflamatória, antinociceptiva, antimicrobiana, antioxidante, citotóxica, mutagênica, neuroprotetora, sendo útil no controle glicêmico e de peso. Pouteria ramiflora apresenta ainda inibição das enzimas α-amilase e α-glicosidase motivo pelo qual foi escolhida para ser estudada visando a descoberta de novos inibidores da α-amilase. A inibição dessa enzima está relacionada ao controle glicêmico em pacientes com diabetes mellitus tipo 2, uma desordem metabólica que implica em várias complicações secundárias e atinge pessoas no mundo todo. Neste trabalho foi realizado o estudo químico e o biomonitoramento da atividade inibitória da enzima α-amilase por extratos de folhas de Pouteria ramiflora. A α-amilase foi exposta aos extratos brutos, aquoso, hexânico e etanólico e a atividade da enzima foi avaliada na presença e na ausência do possível inibidor pelo método colorimétrico descrito por Bernfeld (1955), com modificações. O extrato mais ativo foi definido com a obtenção do valor de CI50 em comparação ao padrão acarbose. Esse extrato foi fracionado com o objetivo de isolar o composto ativo. Os compostos foram isolados e identificados por técnicas cromatográficas e espectrométricas como CCD, CC, CLAE-DAD, IV, CG-EM e RMN de 1H e 13C e identificados. O extrato aquoso (CI50 = 9,51 μg/mL) e a fração aquosa (CI50 = 9,71 μg/mL) desse extrato foram os mais ativos contra a enzima avaliada com valores de IC50 próximos ao padrão acaborse (CI50 = 4,2 μg/mL). Os triterpenos epifriedelanol, friedelina e taraxerol foram identificados e/ou isolados a partir do extrato hexânico e o flavonoide miricitrina, marcador do gênero, foi isolado e identificado a partir do extrato aquoso de P. ramiflora. Até onde vai o nosso conhecimento, este é o primeiro relato da identificação de epi-friedelanol, friedelina, taraxerol e do isolamento miricitrina em P. ramiflora. A presença desses compostos pode justificar, pelo menos em parte, a atividade observada nos extratos desta planta. ______________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Pouteria ramiflora (Mart.) Radlk., a species commonly found in Cerrado and populary known as curriola (curiola), brasa-viva, figo-do-cerrado among others. This plant produces edible fruits and is used in folk medicine as hyperlipaedemic and to treat worms, dysentery, pain and inflammation. Extracts of this species exhibit allelopathic, antiinflammatory, antinociceptive, antimicrobial, antioxidant, cytotoxic, mutagenic, neuroprotective activities and also is useful in glycemic and weight control. Because Pouteria ramiflora extracts present α-amylase and α-glucosidase inhibition, this species was chosen in this study toward the potential discovery of new α-amylase inhibitors. Inhibition of this enzyme is related to glycemic control in patients with diabetes mellitus type 2, a metabolic disorder that involves multiple secondary complications and affects people worldwide. In this work we performed the chemical and biomonitoring studies of the in vitro inhibition activity of extracts from Pouteria ramiflora against α-amylase enzyme. The aqueous, hexane and ethanol crude extracts were evaluated against α-amilase; and the enzyme activity was tested in the presence and absence of possible inhibitors by the colorimetric method described by Bernfeld (1955) with modifications. The IC50 was obtained and the most active extract was defined and compared to acarbose standard. This extract was fractionated with the purpose of isolating the active compound. The compounds were isolated and identified for chromatographic and spectrometric techniques such as TLC, CC, HPLC-DAD, IR, GC-MS and 1H NMR and 13C NMR and identified. Aqueous extracts ((IC50 = 9,51 μg/mL) and its aqueous fraction (IC50 = 9,51 μg/mL) were the most active against the α-amilase with the IC50 value similar to the standard acarbose (IC50 = 4,2 μg/mL). The triterpenes epi-friedelanol, friedelin and taraxerol were identified from the hexane extract and the myricitrin flavonoid, chemical marker of the genus Pouteria, was isolated and identified from the P. ramiflora aqueous extract. As far as know, this is the first report of the identification of epi-friedelanol, friedelin, taraxerol and the isolation of myricitrin from P. ramiflora. The presence of these compounds may help to clarify at least in part the reported biological activity for this species.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, 2014. / Submitted by Ana Cristina Barbosa da Silva (annabds@hotmail.com) on 2014-11-05T19:34:28Z No. of bitstreams: 1 2014_SarahCaixêtaCardoso.pdf: 1606140 bytes, checksum: 8b76d403152c961113043d6b912e3933 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2014-11-06T18:36:14Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_SarahCaixêtaCardoso.pdf: 1606140 bytes, checksum: 8b76d403152c961113043d6b912e3933 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-11-06T18:36:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_SarahCaixêtaCardoso.pdf: 1606140 bytes, checksum: 8b76d403152c961113043d6b912e3933 (MD5) / O câncer de próstata é o tumor mais comum diagnosticado em homens. As opções terapêuticas incluem a prostatectomia, radioterapia e até mesmo a vigilância ativa, em estágio inicias. Para doença em estágio avançado é indicada terapia local definitiva combinada com radioterapia adjuvante e/ou terapia hormonal de privação androgênica, porém sua eficácia é limitada. Assim os produtos naturais têm um papel importante como fonte na busca de novos agentes antitumorais. A biodiversidade brasileira, destacando o bioma Cerrado por sua enorme variedade de espécies, vem se tornando alvo importante na busca de novas biomoléculas com potencial terapêutico. O presente estudo tem como objetivo investigar a existência de atividade citotóxica de extratos de plantas e extratos de fluido de cultivo de fungos em linhagens de células de adenocarcinoma de próstata humano. Sob cultivo de duas linhagens de adenocarcinoma de próstata humano LNCaP clone FGC (sensível a androgênios), e PC3 (resistente a androgênios), e de uma linhagem controle de queratinócitos humanos normais (HaCat), foram investigados 31 extratos obtidos de plantas e 11 extratos de fluido de cultivo de fungos. O ensaio de viabilidade celular foi utilizado para avaliar a citotoxicidade e a curva dose-resposta. Foi analisado o perfil de morte celular e alterações no ciclo celular por meio de citometria de fluxo, utilizando kit comercial de anexina V e iodeto de propídeo. Foi realizada microscopia eletrônica de transmissão (MET) com o intuito de confirmar morfologicamente o perfil de morte celular. A fim de identificar compostos presentes nos extratos utilizou-se cromatografia em camada delgada. Entre os 31 extratos analisados, 12 extratos de plantas e 3 extratos de fluido de cultivo de fungos apresentaram atividade citotóxica maior que 50% em linhagem de adenocarcinoma de próstata andrógeno sensível (LNCaP). Sete extratos de plantas e 2 de fluido de cultivo de fungos apresentaram resposta dose dependente e índice de seletividade maior para a célula LNCaP. Estes apresentaram tendência a apoptose inicial e tardia e 4 extratos apresentaram parada do ciclo celular na fase G0/G1 estatisticamente significativa. Na análise global do efeito citotóxico em LNCaP, considerando também os índices de seletividade, destacaram-se os extratos de: Pouteria ramiflora caule etanólico (E), Pouteria torta fruto E, Bauhinia rufa folha E, Sapindus saponaria fruto E e Alamanda blanchetii folha E. Na linhagem PC3, 10 extratos de plantas apresentaram inicialmente resposta citotóxica maior que 50%, porém apenas 3 apresentaram resposta dose dependente. Destacaram-se extratos de B. rufa e P. caimito, com repressão significativa do ciclo celular e indução expressiva de apoptose tardia. Foi possível obter imagens de MET apenas de células LNCaP tratadas com A. blanchetii fruto E e de células PC3 tratadas com A. blanchetti folha hexânico (H), que confirmaram os achados pela citometria. Os compostos acetato de lupeíla, friedelenol e acetato de α amirina foram identificados nos extratos Pouteria ramiflora caule E e Pouteria torta fruto E. Todos os extratos com atividade citotóxica identificados foram etanólicos ou hexânicos. Os extratos citotóxicos identificados possuem potencial como fonte natural de compostos ativos e estudos futuros são necessários para caracterização de sua atividade farmacológica. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Prostate cancer is the most common cancer diagnosed in men. Therapeutic options include prostatectomy, radiation therapy and active surveillance for initial stage tumors. For advanced disease, definitive local therapy combined with adjuvant radiotherapy and / or androgen deprivation hormone therapy are indicated, but their effectiveness is limited, with high mortality. Due to limited therapeutic options, natural products have an important role as a source for discovery of new antineoplastic agents. Brazilian biodiversity, particularly the Cerrado biome and its huge variety of species, is becoming an increasingly important target for the search of new biomolecules with therapeutic potential. The present study aimed to investigate the existence of anti-proliferative activity of plant and fungi extracts in cell lineages of human prostate adenocarcinoma. Under cultivation of two human prostate adenocarcinoma cell lineages, LNCaP clone FGC (androgen-sensitive) and PC3 (androgen-resistant), and a control cell lineage of human keratinocytes (HaCaT), 31 extracts of plants and 11 extracts of culture fluid of fungi were investigated. Cell viability assay was used to assess the cytotoxicity and to determine the dose-response curves. Cell death profile and changes in cell cycle were analyzed by flow cytometry, using propidium iodide and annexin V commercial kits. Transmission electron microscopy was performed to confirm the morphological profile of cell death. Thin layer chromatography was used to identify compounds in selected extracts, which presented significant time- and dose-dependent activity. Among 31 analyzed extracts, 12 extracts of plants and three extracts of culture fluid of fungi showed cytotoxicity greater than 50% in LNCaP cell lineage. Seven plant extracts and 2 extracts of culture fluid of fungi were shown to have a dose-dependent cytotoxic effect, with higher selectivity for cancer cell lineage LNCaP. These extracts showed a tendency to induce early and late cellular apoptosis and 4 extracts exerted a statistically significant inhibitory effect on cell cycle. Upon global analysis of the cytotoxic effect on LNCaP, including the selectivity index, the following extracts showed the most featured effects: Pouteria ramiflora stem ethanolic (E), Pouteria torta fruit E, Bauhinia rufa sheet E, Sapindus saponaria fruit E and Alamanda blanchetii leaf E. In the androgen-resistant PC3 cell lineage, plant extracts showed a cytotoxic effect initially greater than 50%, but for only 3 extracts 10 this effect was dose-dependent. The most prominent effects were observed for extracts from B. rufa and P. caimito, which induced significant cell cycle arrest and late apoptosis. It was possible to obtain images of LNCaP cells treated only with A. blanchetii E, and PC3 cells treated with A. blanchetti sheet H, which confirmed the findings by flow cytometry. The compounds lupeyl acetate, friedelenol and α amyrin acetate were identified in extracts Pouteria ramiflora stem and Pouteria torta fruit E. All cytotoxic extracts identified were E or H. The cytotoxic plant extracts identified herein represent a potential natural source of active compounds. Future studies are needed to characterize their pharmacological activity.