Made available in DSpace on 2014-07-29T15:16:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Kelly Pacheco de Castro.pdf: 746240 bytes, checksum: b56c21e04b1a4191824bfab81746d0d2 (MD5) Previous issue date: 2008-01-31 / The dimorphic fungus Paracoccidioides brasiliensis is the causative agent of the most frequent systemic mycosis in Latin America. In humans, infection starts by inhalation of fungal propagules, which reach the pulmonary epithelium and differentiate into the yeast parasitic phase. Here we describe the characterization of a proline-rich protein (PRA/Ag2) homologue of P. brasiliensis, a predictable cell wall protein, first identified in Coccidioides immitis. The protein, the cDNA and genomic sequences were analyzed. Southern blot analysis suggested that there is one copy of the gene in P. brasiliensis. The cloned cDNA was expressed in Escherichia coli and the purified rPbPRA/Ag2 was used to obtain polyclonal antibody. The purified recombinant protein was recognized by sera of patients with proven paracoccidioidomycosis and not by sera of healthy individuals. Immunoelectron microscopy and biochemical studies demonstrated the presence of PbPRA/Ag2 in the fungal cell wall, linked through a GPIanchor. The expression of the Pbpra/ag2 gene was analyzed by real time PCR and results demonstrated developmental regulation in phases of P. brasiliensis, with a higher expression in the mycelium saprobic phase. The protein expression analyses corroborate the transcript levels. / O fungo dimórfico Paracoccidioides brasiliensis é o agente causador da micose sistêmica mais prevalente na América Latina. Em humanos, a infecção se dá pela inalação de propágulos do fungo, que ao alcançarem o epitélio pulmonar transformam se na fase leveduriforme, parasitária, do fungo P. brasiliensis. Neste trabalho,descrevemos a caracterização de um homólogo de PRA/Ag2 (Antígeno rico em prolina), uma proteína predita de parede celular, primeiramente identificada em Coccidioides immitis. A proteína, o cDNA e a seqüência genômica foram analisados. Análises através de Southern blot sugerem que há somente uma cópia do gene em P.brasiliensis. O cDNA clonado foi expresso em Escherichia coli e a rPbPRA/Ag2 purificada foi utilizada para obtenção do anticorpo policlonal. A proteína recombinante purificada foi reconhecida pelo soro de pacientes com paracoccidioidomicose comprovada e não foi reconhecida pelo soro de pacientes saudáveis. Microscopia eletrônica e estudos bioquímicos demonstraram a presença do PbPRA/Ag2 na parede celular de P. brasiliensis, ligada através de uma âncora de GPI. A expressão do gene que codifica Pbpra/ag2 foi analisada através de PCR em Tempo Real e os resultados demonstraram regulação da expressão nas fases de P. brasiliensis, com maior nível de expressão na fase miceliana. Análises da expressão protéica corroboram os resultados da RT-PCR em Tempo Real.