A Periodontite Agressiva (PA), que atualmente pertence ao grupo das Periodontites estágios 3 e 4, distingue-se dos demais tipos de doença periodontal por seu início precoce, agregação familiar dos casos e por afetar pacientes sistemicamente saudáveis. Além disso, pode ser subclassificada em duas formas, localizada (PAL) e generalizada (PAG), em função de sua extensão. Muitas vezes, os depósitos de biofilme bacteriano são desproporcionais à quantidade de destruição óssea e perda de inserção que o paciente apresenta, independente da subclassificação. O microrganismo mais relacionado à etiopatogênese da doença é o Aggregatibacter actinomycetemcomitans (A. actinomycetemcomitans), incluindo os seus principais sorotipos a, b e c, amplamente estudados. Associado a estas condições, A. actinomycetemcomitans apresenta alguns fatores de virulência como uma leucotoxina, principalmente ligada ao sorotipo b - clone JP2 (que é altamente leucotóxico) e proteínas de membrana externa (OMPs), especialmente Omp29. A resposta de imunoglobulina G (IgG) sérica contra este patógeno foi anteriormente associada à ambas as formas de PA, porém, são escassos os estudos que avaliaram longitudinalmente a resposta sérica frente a variáveis como estas. Dessa maneira, o objetivo desse estudo foi avaliar a resposta sérica, de 27 pacientes com PA e 10 pacientes periodontalmente saudáveis, contra Omp29 e sorotipos de A. actinomycetemcomitans, através de um ensaio ELISA, correlacionando com o número de cópias de JP2 (obtidos por qPCR em tempo real) e parâmetros clínicos, a partir de dados anteriormente coletados por nosso grupo. Todos os dados foram obtidos antes do início do tratamento e um ano após seu término. O tratamento consistiu de orientações de higiene bucal, tratamento mecânico e antibioticoterapia. Os dados resultantes do estudo mostraram que em ambas as formas de PA houve uma redução significativa na profundidade clínica de sondagem (PCS)(p<0,001), nível clínico de inserção (NCI)(p<0,001) e na resposta sérica contra Omp29 e sorotipo c de A. actinomycetemcomitans(p>0,005). Após 1 ano, os valores de densidade óptica (D.O.) normalizados para Omp29 e sorotipos de A. actinomycetemcomitans, bem como o número de cópias do clone JP2 tornaram-se similares aos níveis encontrados nos controles. A redução no número de cópias do clone JP2 foi correlacionada com redução da PCS em PAL(r=0.80,p=0.0042) e valores de D.O. normalizados de Omp29 em PAG(r=0.66,p=0.005). O estudo concluiu que o tratamento periodontal foi eficaz em alterar a resposta sérica contra Omp29 e sorotipos de A. actinomycetemcomitans, além de reduzir o número de cópias do clone JP2 e melhorar os parâmetros clínicos. / Aggressive Periodontitis (AP), which currently belongs to the group of Periodontites stages 3 and 4, is distinguished from other types of periodontal disease due to its early onset, familial aggregation of cases and to affect systemically healthy patients. In addition, it can be sub classified into two forms, localized (PAL) and generalized (PAG), depending on its extent. Often, bacterial biofilm deposits are disproportionate to the amount of bone destruction and loss of insertion that the patient presents, regardless of sub classification. The most important microorganism related to the etiopathogenesis of the disease is Aggregatibacter actinomycetemcomitans (A. actinomycetemcomitans), including its main serotypes a, b and c, widely studied. Associated with these conditions, A. actinomycetemcomitans presents some virulence factors such as leukotoxin, mainly linked to serotype b - clone JP2 (which is highly leukotoxic) and outer membrane proteins (Omp\'s), especially Omp29. Serum immunoglobulin G (IgG) response against this pathogen was previously associated with both forms of BP; however, there are few studies that longitudinally evaluated the serum response to variables such as these. Thus, the objective of this study was to evaluate the serum response of 27 patients with AP and 10 periodontally healthy patients against Omp29 and A. actinomycetemcomitans serotypes by an ELISA, correlating with the number of copies of JP2 (obtained by qPCR in real time) and clinical parameters, from data previously collected by our group. All data were obtained prior to initiation of treatment and one year after its completion. The treatment consisted of oral hygiene guidelines, mechanical treatment and antibiotic therapy. Data from the study showed that in both forms of BP there was a significant reduction in clinical depth of sampling (PCS) (p<0,001),, clinical level of insertion (NCI)(p<0,001) and serum response against Omp29 and serotype c of A. actinomycetemcomitans(p>0,005). After 1 year, normalized optical density (O.D.) values for Omp29 and A. actinomycetemcomitans serotypes, as well as the number of copies of clone JP2 became similar to the levels found in the controls. The reduction in copy number of clone JP2 was correlated with reduction of PCS in PAL(r=0.80,p=0.0042) and O.D. normalized from Omp29 to PAG(r=0.66,p=0.005). The study concluded that periodontal treatment was effective in altering the serum response against Omp29 and A. actinomycetemcomitans serotypes, in addition to reducing the number of copies of clone JP2 and improving clinical parameters.

OMP29 é uma das principais proteínas de membrana externa de Aggregatibacter actinomycetemcomitans (Aa) e está associada à invasão de célula epitelial gengival (CEG). Os objetivos deste estudo foram: analisar filogeneticamente omp29 e omp29 parálogo (omp29par), em cepas de Aa; determinar a interação de OMP29 com proteínas de matriz extracelular e o efeito da sua interação com CEG, pela avaliação da expressão gênica e produção de mediadores inflamatórios. Variações filogenéticas foram observadas para omp29 e omp29par, bem como para os seus promotores e estas relacionam-se com os sorotipos. A proteína recombinante OMP29his interagiu com fibronectina plasmática e celular (p<0,05), mas não com os domínios F30 e 45 ou com colágenos tipo I, III, IV e V, fibrinogênio, laminina e plasminogênio. A interação das mutantes de Aa deficientes em omp29 e/ou omp29par (obtidas pelo sistema LoxP/Cre) e OMP29his com CEG OBA-09 demonstrou que OMP29 regula positivamente il-18 e negativamente il-6r e il-8 (p<0,05). Os dados sugerem que OMP29 está envolvida na evasão do sistema imune. / OMP29 is one of the major outer membrane proteins of Aggregatibacter actinomycetemcomitans (Aa) and is associated with invasion into gingival epithelial cells (GEC). This study aimed to evaluate phylogenetically omp29 and omp29 paralogue (omp29par) in Aa strains; determine the interaction of OMP29 with extracellular matrix proteins and its effect on GEC by gene expression analysis and production of inflammatory mediators. Phylogenetic variations were observed for omp29 and omp29par as well as their promoters, and they were related to the serotypes. The recombinant protein OMP29his interacted with plasma and cellular fibronectin (p <0.05), but not to F30 and F45 domains, neither to collagens I, III, IV and V, fibrinogen, laminin and plasminogen. The interaction of Aa mutants defective in omp29 and/or omp29par (obtained by LoxP system/Cre) and OMP29his with CEG OBA-09 indicated that OMP29 regulates positively il-18 and negatively il-6r and il-8 (p <0.05). Data suggested that OMP29 is involved in bacterial evasion of the immune system.

OMP29 é uma das principais proteínas de membrana externa de Aggregatibacter actinomycetemcomitans (Aa) e está associada à invasão de célula epitelial gengival (CEG). Os objetivos deste estudo foram: analisar filogeneticamente omp29 e omp29 parálogo (omp29par), em cepas de Aa; determinar a interação de OMP29 com proteínas de matriz extracelular e o efeito da sua interação com CEG, pela avaliação da expressão gênica e produção de mediadores inflamatórios. Variações filogenéticas foram observadas para omp29 e omp29par, bem como para os seus promotores e estas relacionam-se com os sorotipos. A proteína recombinante OMP29his interagiu com fibronectina plasmática e celular (p<0,05), mas não com os domínios F30 e 45 ou com colágenos tipo I, III, IV e V, fibrinogênio, laminina e plasminogênio. A interação das mutantes de Aa deficientes em omp29 e/ou omp29par (obtidas pelo sistema LoxP/Cre) e OMP29his com CEG OBA-09 demonstrou que OMP29 regula positivamente il-18 e negativamente il-6r e il-8 (p<0,05). Os dados sugerem que OMP29 está envolvida na evasão do sistema imune. / OMP29 is one of the major outer membrane proteins of Aggregatibacter actinomycetemcomitans (Aa) and is associated with invasion into gingival epithelial cells (GEC). This study aimed to evaluate phylogenetically omp29 and omp29 paralogue (omp29par) in Aa strains; determine the interaction of OMP29 with extracellular matrix proteins and its effect on GEC by gene expression analysis and production of inflammatory mediators. Phylogenetic variations were observed for omp29 and omp29par as well as their promoters, and they were related to the serotypes. The recombinant protein OMP29his interacted with plasma and cellular fibronectin (p <0.05), but not to F30 and F45 domains, neither to collagens I, III, IV and V, fibrinogen, laminin and plasminogen. The interaction of Aa mutants defective in omp29 and/or omp29par (obtained by LoxP system/Cre) and OMP29his with CEG OBA-09 indicated that OMP29 regulates positively il-18 and negatively il-6r and il-8 (p <0.05). Data suggested that OMP29 is involved in bacterial evasion of the immune system.

Aggregatibacter actinomycetemcomitans está associado à etiologia da periodontite agressiva localizada. A colonização de tecidos do hospedeiro é necessária para patogênese e a adesão é fundamental. A proteína autotransportada Aae faz a adesão da bactéria a células epiteliais gengivais. Proteínas autotransportadas de diferentes espécies apresentam múltiplas funções e podem ser antígenos vacinais na prevenção de infecções. Para entender o papel de Aae na ligação ao hospedeiro e efeito de anticorpos contra Aae, o polimorfismo de aae na região que codifica o domínio de ligação a células epiteliais foi determinado e relacionado à adesão a células epiteliais KB . Aae recombinante foi obtida, e a capacidade de ligação a proteínas da matriz extracelular e soro foi determinada em ensaios com a recombinante e com uma amostra deficiente na expressão de Aae obtida (ensaios comparativos com amostra selvagem). Títulos de IgG contra Aae em pacientes com periodontite agressiva e saudáveis foram determinados e relacionados à resposta humoral contra sorotipos de A. actinomycetemcomitans. Por fim, o efeito de anticorpos contra Aae e/ou seu domínio efetor, produzidos em modelo animal, foi determinado na inibição da adesão mediada por Aae e opsonização por fagócitos. / Aggregatibacter actinomycetemcomitans is related with etiology of localized aggressive periodontitis. Colonization of host tissues is necessary to pathogenesis and adhesion is essential. The autotransporter protein Aae mediates the adhesion of bacteria to gingival epithelial cells. Autotransporter proteins from different species have multiple functions and could be vaccine antigens to prevent infections. To understand the role of Aae in host interaction and the effect of antibodies against Aae, polymorphism of aae in codifying effector domain region of ligation to epithelial cells was determined and related with adhesion to these cells. Recombinant Aae was obtained and the ability of interaction with Extracellular matrix and serum proteins was determined through assays using the recombinant and an obtained defective sample in Aae expression (comparative assays with wild type). IgG titters against Aae were determined in patients with aggressive periodontitis and healthy and related to humoral response against A. actinomycetemcomitans serotypes. At last, the effect of antibodies against Aae and/or its effector domain, obtained in animal model, was determined in inhibition of adhesion to epithelial cells and macrophages oopsonization.