O aumento da incidência da doença huanglonbing (HLB) nos pomares brasileiros tem contribuído significativamente para o aumento do custo de produção de laranja no Brasil, devido à suscetibilidade de todas as variedades cultivadas. O HLB é associado às bactérias Candidatus Liberibacter asiaticus, Candidatus Liberibacter africanus e Candidatus Liberibacter americanus, transmitidas pelos psilídeos Diaphorina citri e Trioza erytreae. No Brasil, o inseto vetor responsável pela rápida disseminação da doença é o psilídeo Diaphorina citri. Os principais métodos de controle do HLB são a eliminação de plantas sintomáticas, uso de mudas sadias e controle do vetor. O uso de plantas geneticamente modificadas pode ser uma alternativa ao uso excessivo de inseticidas para controle do inseto vetor. Sendo assim, pode-se adotar uma nova tecnologia que se baseia no uso de RNAs de interferência (RNAi) para o silenciamento de genes específicos do inseto vetor. Dessa forma, o objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito do silenciamento dos genes calreticulina (DcCRT), lacase (DcLAC) e Snf7 (DcSNF7) de Diaphorina citri por RNA de interferência via alimentação em folhas destacadas de Murraya paniculata que absorveram solução contendo dsRNA de silenciamento. A princípio, foi avaliada a expressão dos genes candidatos em diferentes estádios fenológicos dos insetos. Em seguida, foram realizados bioensaios de sobrevivência e silenciamento, com as doses 0, 5, 25 e 50µg de dsRNA. A sobrevivência dos insetos foi avaliada ao longo de 144 horas, enquanto que os insetos utilizados na análise de expressão gênica foram coletados 12, 24, 48, 72 e 96h após o início da alimentação. Para os genes DcCRT, relacionado à quelatização de íons cálcio, e DcLAC, relacionado à gelificação oxidativa do estilete, ambos envolvidos no processo alimentar do inseto, também foi observado o efeito das doses de dsRNA na quantidade de alimento ingerido, 120h após o início da alimentação. Além disso, também foi realizado bioensaio com dsRNA Cy3-labbled, para verificar a distribuição do dsRNA absorvido. A expressão dos genes candidatos, de modo geral, se manteve uniforme ao longo dos estádios de desenvolvimento dos insetos, exceto para o gene DcLAC que apresentou maior expressão em adultos recém emergidos do que nos demais estádios avaliados. Nos bioensaios com dsRNA de silenciamento, observou-se fenótipo letal apenas com o silenciamento do gene DcSnf7, 144 horas após o início da alimentação. Durante o período avaliado, foi constatada redução na expressão gênica apenas de DcCRT, após 12h de alimentação e DcLAC após 96h de alimentação com seus respectivos dsRNA de silenciamento. Além disso, a dose de 5µg de dsRNA foi suficiente para causar tal efeito de silenciamento gênico. No bioensaio para quantificação da alimentação, observou- se redução na excreção de aminoácidos nos insetos alimentados com 5µg de dsRNA, em ambos os genes candidatos (DcCRT e DcLAC) 120h após o início da alimentação. Adicionalmente, a análise de distribuição de dsRNA pela folha mostrou que há absorção do dsRNA pela folha destacada, permitindo a alimentação pelo inseto. Dessa forma, conclui-se que os genes estudados apresentam potencial para o controle do psilídeo Diaphorina citri, via silenciamento gênico por RNAi. / The increase in the incidence of huanglonbing disease (HLB) in Brazilian orchards has contributed to increase of orange production costs in Brazil, due to the susceptibility of all cultivated variety of orange. HLB is associated with the Candidatus Liberibacter asiaticus, Candidatus Liberibacter africanus and Candidatus Liberibacter americanus bacteria, transmitted by the psyllids Diaphorina citri and Trioza erytreae. In Brazil, the insect vector responsible for the rapid spread of the disease is Diaphorina citri. The most important methods of HLB control are the elimination of symptomatic plants, the use of healthy nursery trees, and vector control. The use of genetically modified plants may be an alternative to the excessive use of insecticides to control the insect vector. Therefore, a new technology based on using RNAs of interference (RNAi), for silencing specific genes of the insect vector can be used. Thus, the aim of this work was to evaluate the effect of silencing calreticulin (DcCRT), laccase (DcLAC) and Snf7 (DcSNF7) genes in Diaphorina citri by interference RNA through feeding in leaves of Murraya paniculata that absorbed a solution containing dsRNA of silencing. At first, the expression of the candidate genes in different phenological stages of the insects was evaluated. Survival and silencing bioassays were then performed at doses of 0, 5, 25 and 50 µg of dsRNA. Insect survival was evaluated over 144 hours, while the insects used in gene expression analysis were collected 12, 24, 48, 72 and 96 hours after feeding. For the DcCRT genes, associated to the calcium ion chelation, and DcLAC, related to the oxidative gelling of the stylet, both involved in the insect feed process, the effect of the doses of dsRNA on the amount of food ingested, 120h after the beginning of feeding was observed. In addition, a bioassay with Cy3-labbled dsRNA was also performed to verify the distribution of absorbed dsRNA. The expression of the candidate genes generally remained uniform throughout the stages of insect development, except for the DcLAC gene that showed greater expression in newly emerged adults than in the other evaluated stages. In the bioassays with dsRNA for gene silencing, a lethal phenotype was observed only with the silencing of the DcSnf7 gene, 144 hours after the beginning of feeding. During the evaluated period, there was a reduction in the gene expression only of DcCRT, after 12h of feed and DcLAC after 96h of feeding with their respective silencing dsRNA. Additionally, the dose of 5µg of dsRNA was enough to cause this gene silencing effect. In the bioassay for feeding quantification, a reduction in amino acid excretion was observed in insects fed with 5 µg of dsRNA, in both candidate genes (DcCRT and DcLAC) 120 h after the beginning of feeding. In addition, the analysis of dsRNA distribution by the leaf showed that there is absorption of the dsRNA by the detached leaf, allowing feeding by the insect. Thus, we conclude that the genes studied have potential for the control of the psyllid Diaphorina citri, through gene silencing mediated by RNAi.

Atualmente, o controle da doença Huanglongbing (HLB) ou greening é baseado, principalmente, no controle químico do inseto vetor Diaphorina citri, realizado por meio de aplicações intensivas de produtos químicos, o que vem causando surtos de pragas secundárias, ressurgência de pragas, seleção de população resistente e eliminação dos inimigos naturais. Com esse trabalho, objetivou-se avaliar a possibilidade da utilização da planta de curry (Murraya koenigii) como planta-isca para o manejo do psilídeo D. citri. Para isso, foram realizados os seguintes testes: i) teste de transmissão de \'Candidatus Liberibacter asiaticus\' para determinar se a planta de curry não é hospedeira da bactéria; ii) teste de comportamento de escolha, para verificar a preferência hospedeira de D. citri em plantas de curry em relação a citros; iii) teste de comportamento alimentar do psilídeo por meio da técnica de Electrical Penetration Graphs (EPG) em plantas de curry, visando entender a alimentação do inseto nessa planta; iv) seleção de inseticidas sistêmicos para uso em plantas de curry, determinando o período residual e eficiência; e v) teste com plantio-isca em um talhão de citros, no qual foram instaladas plantas de curry em frente as plantas de citros e o psilídeo foi monitorado com o uso de armadilhas adesivas amarelas. Como resultado, observouse que a planta de curry não é hospedeira da bactéria \'Ca. L. asiaticus\' por meio da inoculação pelo psilídeo D. citri, e, em teste de livre escolha e de olfatômetro, é mais atrativa para o psilídeo do que a planta de citros, em condições laboratoriais. O comportamento alimentar do psilídeo em plantas de curry é diferente do que em citros e murta, sendo que o consumo da seiva do xilema em plantas de curry é maior. Além disso, inseticidas aplicados via \'drench\', como thiamethoxam e imidacloprid, nessa planta, são eficientes contra D. citri, pois controlam o psilídeo adulto por mais de 70 dias após a aplicação e, no campo, a captura de espécimes nas parcelas com a planta de curry foi maior, podendo concluir, portanto, que a planta de curry M. koenigii apresenta potencial para ser utilizada como plantio isca para manejo do psilídeo D. citri e, consequentemente, da doença HLB. / Currently, the control of the disease Huanglongbing (HLB) or greening is based mainly on the chemical control of the insect vector Diaphorina citri, through intensive applications of insecticides, which has been causing secondary pest outbreaks, pest resurgence, selection of population resistant and elimination of natural enemies. The goal of this work was to evaluate the possibility of using the curry leaf (Murraya koenigii) as a trap crop for the management of the D. citri. For this, the following tests have been performed: i) Transmission test of \'Candidatus Liberibacter asiaticus\' to determine if the curry leaf is not a host for the bacterium; ii) test of choice behavior, to verify the host preference of D. citri to curry leaves in relation to citrus plants; iii) test of probing behavior in curry leaf using the Electrical Penetration Graphs (EPG) technique, in order to understand the feeding of the insect on this plant; iv) selection of systemic insecticides for use in curry leaf, determining the residual period and efficiency; and v) test with trap crop in a citrus orchard, in which curry plants were installed in front of the citrus plants and the psyllid was monitored with the yellow stick traps. As a result, it has been observed that the curry leaf is not a host to \'Ca. L. asiaticus\' by the D. citri inoculation and, in a free choice and olfactometer test, is more attractive to the psyllid than the citrus plant under laboratory conditions. The probing behavior of the psyllid in curry leaf is different from citrus and orange jasmine, being the ingestion of xylem sap in curry leaf higher. In addition, the insecticides applied by \'drench\' such as thiamethoxam and imidacloprid in these plants are efficient against D. citri for more than 70 days after application and, in the field, the capture of psyllids in the plots with the curry leaf was higher and could therefore conclude that, the curry leaf M. koenigii is a potencial plant to be used as a trap crop for the management of D. citri and consequently, the disease HLB.

Atualmente, o controle da doença Huanglongbing (HLB) ou greening é baseado, principalmente, no controle químico do inseto vetor Diaphorina citri, realizado por meio de aplicações intensivas de produtos químicos, o que vem causando surtos de pragas secundárias, ressurgência de pragas, seleção de população resistente e eliminação dos inimigos naturais. Com esse trabalho, objetivou-se avaliar a possibilidade da utilização da planta de curry (Murraya koenigii) como planta-isca para o manejo do psilídeo D. citri. Para isso, foram realizados os seguintes testes: i) teste de transmissão de \'Candidatus Liberibacter asiaticus\' para determinar se a planta de curry não é hospedeira da bactéria; ii) teste de comportamento de escolha, para verificar a preferência hospedeira de D. citri em plantas de curry em relação a citros; iii) teste de comportamento alimentar do psilídeo por meio da técnica de Electrical Penetration Graphs (EPG) em plantas de curry, visando entender a alimentação do inseto nessa planta; iv) seleção de inseticidas sistêmicos para uso em plantas de curry, determinando o período residual e eficiência; e v) teste com plantio-isca em um talhão de citros, no qual foram instaladas plantas de curry em frente as plantas de citros e o psilídeo foi monitorado com o uso de armadilhas adesivas amarelas. Como resultado, observouse que a planta de curry não é hospedeira da bactéria \'Ca. L. asiaticus\' por meio da inoculação pelo psilídeo D. citri, e, em teste de livre escolha e de olfatômetro, é mais atrativa para o psilídeo do que a planta de citros, em condições laboratoriais. O comportamento alimentar do psilídeo em plantas de curry é diferente do que em citros e murta, sendo que o consumo da seiva do xilema em plantas de curry é maior. Além disso, inseticidas aplicados via \'drench\', como thiamethoxam e imidacloprid, nessa planta, são eficientes contra D. citri, pois controlam o psilídeo adulto por mais de 70 dias após a aplicação e, no campo, a captura de espécimes nas parcelas com a planta de curry foi maior, podendo concluir, portanto, que a planta de curry M. koenigii apresenta potencial para ser utilizada como plantio isca para manejo do psilídeo D. citri e, consequentemente, da doença HLB. / Currently, the control of the disease Huanglongbing (HLB) or greening is based mainly on the chemical control of the insect vector Diaphorina citri, through intensive applications of insecticides, which has been causing secondary pest outbreaks, pest resurgence, selection of population resistant and elimination of natural enemies. The goal of this work was to evaluate the possibility of using the curry leaf (Murraya koenigii) as a trap crop for the management of the D. citri. For this, the following tests have been performed: i) Transmission test of \'Candidatus Liberibacter asiaticus\' to determine if the curry leaf is not a host for the bacterium; ii) test of choice behavior, to verify the host preference of D. citri to curry leaves in relation to citrus plants; iii) test of probing behavior in curry leaf using the Electrical Penetration Graphs (EPG) technique, in order to understand the feeding of the insect on this plant; iv) selection of systemic insecticides for use in curry leaf, determining the residual period and efficiency; and v) test with trap crop in a citrus orchard, in which curry plants were installed in front of the citrus plants and the psyllid was monitored with the yellow stick traps. As a result, it has been observed that the curry leaf is not a host to \'Ca. L. asiaticus\' by the D. citri inoculation and, in a free choice and olfactometer test, is more attractive to the psyllid than the citrus plant under laboratory conditions. The probing behavior of the psyllid in curry leaf is different from citrus and orange jasmine, being the ingestion of xylem sap in curry leaf higher. In addition, the insecticides applied by \'drench\' such as thiamethoxam and imidacloprid in these plants are efficient against D. citri for more than 70 days after application and, in the field, the capture of psyllids in the plots with the curry leaf was higher and could therefore conclude that, the curry leaf M. koenigii is a potencial plant to be used as a trap crop for the management of D. citri and consequently, the disease HLB.

O Huanglongbing (HLB) é a doença dos citros mais importante em todo mundo, por afetar todas as variedades cítricas cultivadas e ser de difícil controle. No Brasil, onde afeta as principais regiões produtoras de citros, a doença vem se espalhando e causando enormes prejuízos à atividade. O manejo do HLB depende da utilização de ações integradas, dentre elas o controle do inseto vetor, o psilídeo-asiátco-dos-citros, Diaphorina citri Kuwayama (Hemiptera: Liviidae). Para controlar de forma eficiente esse inseto vetor é necessário que se conheça, por meio de amostragens eficazes, suas características de dinâmica tanto temporal quanto espacial, identificando regiões mais propensas à infestações e épocas do ano em que o inseto se desenvolve melhor. Por isso, o presente estudo teve como objetivos: a) avaliar a dinâmica temporal do psilídeo D. citri em pomares do Estado de São Paulo, examinando o efeito de diferentes regiões, épocas do ano e idade dos plantios; b) verificar a existência de diferenças no número de insetos amostrados em diferentes alturas da planta cítrica, comparando diferentes métodos de amostragem; e c) investigar o padrão de distribuição espacial do inseto em pomares de diferentes idades. Para isso foram realizados levantamentos ao longo de dois anos em seis localidades, representativas de três regiões do parque citrícola paulista, com pomares de diferentes idades, sendo amostradas todas as fases de vida de D. citri e brotações cítricas. Para a avaliação da amostragem de psilídeos em diferentes alturas, foram estudados dois pomares com plantas de diferentes idades, com avaliação da densidade de psilídeos e brotos cítricos em vários estratos da planta, comparando-se dois tipos de amostragem de insetos adultos. Para o estudo da distribuição espacial de D. citri foram feitos levantamentos em pomares de dois municípios da região citrícola central, analisando-se os dados com geoestatística. Foram constatados efeitos de região, idade dos plantios e épocas do ano sobre a população de D. citri. As maiores populações do inseto estão presentes na região central, onde o inseto ocorre com maior frequência ao longo do ano, seguida da região noroeste e sul. Mais ninfas ocorreram em pomares mais jovens, mas a população de adultos não necessariamente ocorre em maiores números nestes locais. A primavera foi a estação do ano na qual ocorreram as maiores populações de insetos, mas elevações populacionais podem ocorrer em qualquer época desde que haja brotações presentes e que o clima seja favorável. A altura de amostragem influenciou o número de adultos de D. citri detectados no pomar mais velho e de todas as fases de vida do inseto no pomar mais novo, bem como o número de brotações cítricas. Amostras mais precisas foram geradas pela amostragem com armadilhas adesivas do que visualmente, sendo recomendada a amostragem de D. citri com armadilhas em pontos mais elevados da planta para melhor precisão. D. citri apresentou distribuição agregada e forte dependência espacial na maioria das datas de amostragem e em pomares de diferentes idades. Focos foram identificados nos pomares, com área de 1.257 m², em média. / Huanglongbing (HLB) is the most important citrus disease in the world, affecting all cultivated citrus varieties, and it is very difficult to control. In Brazil, HLB is spreading in the major citrus producing areas and causing huge losses to the citriculture. Disease management depends on integration of different methods, including control of the insect vector, the Asian citrus psyllid, Diaphorina citri Kuwayama (Hemiptera: Liviidae). In order to effectively monitor and control this vector, it is necessary to understand his population dynamics in citrus orchards, identifying regions and seasons where the insect develops higher populations. This study was designed to investigate the temporal and spatial dynamics of D. citri in citrus orchards of Sao Paulo State, examining the effect of different regions, seasons and plant age. Surveys of psyllid populations and citrus shoots were carried out over two years in six locations, representing three growing regions of São Paulo State, in citrus orchards of different ages, where all life stages of D. citri and citrus shoots were sampled. The spatial distribution of D. citri was analyzed by geostatistics in orchards of two municipalities of the central region of São Paulo State. The efficacy of sampling methods (yellow sticky cards vs. visual inspections) and sampling height on the tree canopy for estimating psyllid populations and number of citrus shoots was investigated as well; this particular study was conducted in two orchards of different ages, in the central region. Significant effects of region, orchard age and seasons of the year on the population of D. citri were observed. The highest insect populations are present in the central region, where the insect occurs more frequently throughout the year, followed by the northwestern and southern regions of São Paulo State. More nymphs occurred in younger orchards, but the adult population does not necessarily occur in higher numbers in the younger orchards. Spring was the season of highest populations of D. citri, but population increases can occur at any time if there are shoots present and the weather is favorable. The sampling height influenced the number of D. citri adults trapped by yellow sticky cards in the older orchard, and the numbers of psyllid eggs, nymphs and adults, as well as of citrus shoots, visualized on the younger orchard. More accurate sampling data were generated by using yellow sticky traps compared with visual inspections. Yellow sticky traps should be placed closer to the top of the citrus tree for better accuracy. D. citri showed aggregated pattern and strong spatial dependence in most sampling dates and in orchards of different ages. Foci were identified in the orchards, with a mean area of aggregation of 1,257 m².

Huanglongbing é considerado como o principal obstáculo da indústria produtora de sucos de laranja do mundo. No Brasil, a doença está associada predominantemente às bactérias \'Candidatus Liberibacter americanus\' (Lam) e \'Ca. L. asiaticus\' (Las), as quais são transmitidas pelo psilídeo Diaphorina citri Kuwayama (Hemiptera: Liviidae). Levantamentos mostram um aumento expressivo na incidência de plantas doentes nos pomares brasileiros e esse incremento se deve, em grande parte, à disseminação pelo inseto vetor. Informações na literatura da influência de fatores ambientais e da condição da planta na mobilidade de D. citri são escassos ou inexistentes, assim como o efeito de Lam em parâmetros biológicos e comportamentais do inseto. O conhecimento desses fatores pode auxiliar no entendimento da epidemiologia da doença e no desenvolvimento de táticas de controle mais eficientes. Diante disso, os objetivos do presente estudo foram (1) determinar o efeito de fatores ambientais no processo de decolagem de D. citri; (2) verificar o efeito da condição da planta no processo de decolagem do inseto; e (3) estudar a possível influência de Lam e Las na biologia, voo e preferência ao pouso de D. citri. No estudo em que foi determinado o efeito de fatores ambientais, adultos sadios de D. citri foram avaliados quanto à periodicidade diária de voo e ao limiar de temperatura para decolagem. Além disso, verificou-se o efeito de diferentes regimes de fotoperíodo e temperatura e temperaturas constantes na fase inicial de voo a partir da coleta de indivíduos que decolavam de seedlings de laranjeira doce [Citrus sinensis (L.) Osbeck] e entravam em tubos de 50 mL acoplados na tampa de gaiolas de garrafa plástica. Usando a mesma metodologia, verificou-se o efeito da condição da planta como estresse hídrico, adubação, brotações e densidade de insetos. Para estudar o efeito das bactérias em parâmetros biológicos e comportamentais, avaliaram-se a duração, viabilidade, longevidade de adultos, razão sexual, período de pré-oviposição, fecundidade e decolagem de adultos que se desenvolveram em plantas infectadas por Lam, Las e plantas sadias. Com os dados de biologia calculou-se uma tabela de vida de fertilidade. Além disso, verificou-se a preferência ao pouso de adultos sadios de D. citri em plantas infectadas por Lam, Las e sadias (controle). Os resultados mostraram que uma pequena parcela da população tende a decolar de plantas cítricas e esse comportamento é mais frequente no período da tarde (14:00 e 16:00 h). Insetos que se desenvolveram em regime de temperatura baixa (18 °C) e curto período de luz (10h) apresentaram menor propensão ao voo. Em contraste, após o desenvolvimento em temperatura constante de 27° C, os insetos apresentaram uma maior tendência de decolagem das plantas. Coincidentemente, estimou-se a temperatura limiar de voo de D. citri em 27,1° C. Ao serem submetidos a plantas com estresse hídrico, adultos foram menos propensos ao voo quando comparados com insetos confinados em plantas com 70 e 100 % de capacidade de campo. Ninfas desenvolvidas em plantas com baixa qualidade nutricional geraram adultos mais propensos ao voo. O mesmo foi observado após o desenvolvimento em plantas com alta densidade populacional de ninfas. Após o desenvolvimento de imaturos de D. citri em plantas infectadas e sadias, observaram-se efeitos negativos induzidos por Lam e Las na viabilidade de ninfas, viabilidade do ciclo total, longevidade de fêmeas e parâmetros reprodutivos. Apesar de estatisticamente semelhante à Las, o efeito negativo de Lam na viabilidade do inseto aparentou ser mais pronunciado. Machos e fêmeas apresentam maior propensão ao voo após o desenvolvimento em plantas Lam. Não foram encontrados efeitos de plantas infectadas no pouso do inseto. Os resultados do presente estudo indicam que o comportamento em voo de D. citri pode ser modulado por fatores ambientais e da planta, os quais podem fornecer bases para o desenvolvimento de novas táticas de controle e ajudar a compreender a epidemiologia do HLB dos citros. Além disso, Lam parece afetar com mais intensidade parâmetros biológicos do inseto, o que poderia ser um fator determinando a baixa incidência de Las nos pomares brasileiros. / Huanglongbing (HLB) is considered the major obstacle to the orange juice industry worldwide. In Brazil, the disease is associated mainly to the bacteria \'Candidatus Liberibacter americanus\' (Lam) and \'Ca. L. asiaticus\' (Las), which are transmitted by the Asian citrus psyllid, Diaphorina citri Kuwayama (Hemiptera: Liviidae). Surveys show a significant increase of diseased plants in Brazilian citrus orchards and this increase is mainly due to the movement of the insect vector by flight. Literature information about the influence of environmental and plant condition factors on D. citri take-off are incipient or absent, as well as the effect of Lam on biological and behavioral parameters of the insect. Knowledge of these factors could help to understand HLB epidemiology and to develop effective control tactics. Therefore, the objectives of the current study were (1) to determine the effect of environmental factors on D. citri take-off; (2) to verify the effect of plant condition on D. citri take-off; and (3) to study the possible influence of Lam and Las on the biology, flight propensity and alighting preferences of D. citri. In the study in which the effects of environmental factors were tested, healthy adults of D. citri were evaluated in relation to the diel flight periodicity and the temperature threshold for flight. Furthermore, the effect of different photoperiod and temperature regimes and constant temperatures on D. citri take-off were evaluated considering the number of insects which took off from sweet orange citrus seedlings [Citrus sinensis (L.) Osbeck] and entered inside 50 mL tubes located on the cap of plastic bottle cages. Using the same methodology, the effect of water stress, fertilization, shoots of citrus plants and density of insects were evaluated. To study the effect of bacteria on biological and behavioral parameters, we evaluated some life traits, including development time, survival, adult longevity, sex ratio, preoviposition time, female fecundity and take-off from adults that developed on Lam-infected, Las-infected and healthy plants. A fertility life table was calculated with life-trait data. In addition, the alighting and settling preference of healthy adults on infected and healthy plants was evaluated. The results showed that a small portion of tested population tends to take off from citrus plants and this behavior is more prevalent in the afternoon (14:00-16:00 h). Adults that were submitted to lower temperatures (18° C) and short light periods (10h) showed less propensity to flight. In contrast, at constant 27° C the insects were more prone to fly. Coincidently, the threshold of temperature for flight was 27.1º C. When subjected to water-stressed plants, adults were less prone to fly compared with insects confined on plants with 70 and 100% of field capacity. Nymphs developed on plants with poor nutritional quality generated adults more prone to fly. The same was observed after the development on plants with high population density of nymphs. Negative effects of Lam and Las infections were observed on nymph survival, egg to adult survival, adult longevity and reproductive parameters. Although statistically similar to Las, the negative effect of Lam on viability appeared to be more pronounced than that of Las on D. citri populations. Male and female of D. citri showed more propensity for flight after development on Lam-infected plants, with the Las treatment showing intermediate behavior between Lam and control plants. There was no effect of infected plants on alighting and settling preferences. Results from current study suggest that the flight behavior of D. citri is modulated by environmental and plant conditions factors, which could provide a basis for further development of efficient control tactics and understanding HLB epidemiology. Furthermore, Lam seems to have a more pronounced negative effect on biological parameters of D. citri, which could be a factor determining the low incidence of this bacterium in Brazilian orchards.

O Huanglongbing (HLB) é a doença dos citros mais importante em todo mundo, por afetar todas as variedades cítricas cultivadas e ser de difícil controle. No Brasil, onde afeta as principais regiões produtoras de citros, a doença vem se espalhando e causando enormes prejuízos à atividade. O manejo do HLB depende da utilização de ações integradas, dentre elas o controle do inseto vetor, o psilídeo-asiátco-dos-citros, Diaphorina citri Kuwayama (Hemiptera: Liviidae). Para controlar de forma eficiente esse inseto vetor é necessário que se conheça, por meio de amostragens eficazes, suas características de dinâmica tanto temporal quanto espacial, identificando regiões mais propensas à infestações e épocas do ano em que o inseto se desenvolve melhor. Por isso, o presente estudo teve como objetivos: a) avaliar a dinâmica temporal do psilídeo D. citri em pomares do Estado de São Paulo, examinando o efeito de diferentes regiões, épocas do ano e idade dos plantios; b) verificar a existência de diferenças no número de insetos amostrados em diferentes alturas da planta cítrica, comparando diferentes métodos de amostragem; e c) investigar o padrão de distribuição espacial do inseto em pomares de diferentes idades. Para isso foram realizados levantamentos ao longo de dois anos em seis localidades, representativas de três regiões do parque citrícola paulista, com pomares de diferentes idades, sendo amostradas todas as fases de vida de D. citri e brotações cítricas. Para a avaliação da amostragem de psilídeos em diferentes alturas, foram estudados dois pomares com plantas de diferentes idades, com avaliação da densidade de psilídeos e brotos cítricos em vários estratos da planta, comparando-se dois tipos de amostragem de insetos adultos. Para o estudo da distribuição espacial de D. citri foram feitos levantamentos em pomares de dois municípios da região citrícola central, analisando-se os dados com geoestatística. Foram constatados efeitos de região, idade dos plantios e épocas do ano sobre a população de D. citri. As maiores populações do inseto estão presentes na região central, onde o inseto ocorre com maior frequência ao longo do ano, seguida da região noroeste e sul. Mais ninfas ocorreram em pomares mais jovens, mas a população de adultos não necessariamente ocorre em maiores números nestes locais. A primavera foi a estação do ano na qual ocorreram as maiores populações de insetos, mas elevações populacionais podem ocorrer em qualquer época desde que haja brotações presentes e que o clima seja favorável. A altura de amostragem influenciou o número de adultos de D. citri detectados no pomar mais velho e de todas as fases de vida do inseto no pomar mais novo, bem como o número de brotações cítricas. Amostras mais precisas foram geradas pela amostragem com armadilhas adesivas do que visualmente, sendo recomendada a amostragem de D. citri com armadilhas em pontos mais elevados da planta para melhor precisão. D. citri apresentou distribuição agregada e forte dependência espacial na maioria das datas de amostragem e em pomares de diferentes idades. Focos foram identificados nos pomares, com área de 1.257 m², em média. / Huanglongbing (HLB) is the most important citrus disease in the world, affecting all cultivated citrus varieties, and it is very difficult to control. In Brazil, HLB is spreading in the major citrus producing areas and causing huge losses to the citriculture. Disease management depends on integration of different methods, including control of the insect vector, the Asian citrus psyllid, Diaphorina citri Kuwayama (Hemiptera: Liviidae). In order to effectively monitor and control this vector, it is necessary to understand his population dynamics in citrus orchards, identifying regions and seasons where the insect develops higher populations. This study was designed to investigate the temporal and spatial dynamics of D. citri in citrus orchards of Sao Paulo State, examining the effect of different regions, seasons and plant age. Surveys of psyllid populations and citrus shoots were carried out over two years in six locations, representing three growing regions of São Paulo State, in citrus orchards of different ages, where all life stages of D. citri and citrus shoots were sampled. The spatial distribution of D. citri was analyzed by geostatistics in orchards of two municipalities of the central region of São Paulo State. The efficacy of sampling methods (yellow sticky cards vs. visual inspections) and sampling height on the tree canopy for estimating psyllid populations and number of citrus shoots was investigated as well; this particular study was conducted in two orchards of different ages, in the central region. Significant effects of region, orchard age and seasons of the year on the population of D. citri were observed. The highest insect populations are present in the central region, where the insect occurs more frequently throughout the year, followed by the northwestern and southern regions of São Paulo State. More nymphs occurred in younger orchards, but the adult population does not necessarily occur in higher numbers in the younger orchards. Spring was the season of highest populations of D. citri, but population increases can occur at any time if there are shoots present and the weather is favorable. The sampling height influenced the number of D. citri adults trapped by yellow sticky cards in the older orchard, and the numbers of psyllid eggs, nymphs and adults, as well as of citrus shoots, visualized on the younger orchard. More accurate sampling data were generated by using yellow sticky traps compared with visual inspections. Yellow sticky traps should be placed closer to the top of the citrus tree for better accuracy. D. citri showed aggregated pattern and strong spatial dependence in most sampling dates and in orchards of different ages. Foci were identified in the orchards, with a mean area of aggregation of 1,257 m².

Huanglongbing é considerado como o principal obstáculo da indústria produtora de sucos de laranja do mundo. No Brasil, a doença está associada predominantemente às bactérias \'Candidatus Liberibacter americanus\' (Lam) e \'Ca. L. asiaticus\' (Las), as quais são transmitidas pelo psilídeo Diaphorina citri Kuwayama (Hemiptera: Liviidae). Levantamentos mostram um aumento expressivo na incidência de plantas doentes nos pomares brasileiros e esse incremento se deve, em grande parte, à disseminação pelo inseto vetor. Informações na literatura da influência de fatores ambientais e da condição da planta na mobilidade de D. citri são escassos ou inexistentes, assim como o efeito de Lam em parâmetros biológicos e comportamentais do inseto. O conhecimento desses fatores pode auxiliar no entendimento da epidemiologia da doença e no desenvolvimento de táticas de controle mais eficientes. Diante disso, os objetivos do presente estudo foram (1) determinar o efeito de fatores ambientais no processo de decolagem de D. citri; (2) verificar o efeito da condição da planta no processo de decolagem do inseto; e (3) estudar a possível influência de Lam e Las na biologia, voo e preferência ao pouso de D. citri. No estudo em que foi determinado o efeito de fatores ambientais, adultos sadios de D. citri foram avaliados quanto à periodicidade diária de voo e ao limiar de temperatura para decolagem. Além disso, verificou-se o efeito de diferentes regimes de fotoperíodo e temperatura e temperaturas constantes na fase inicial de voo a partir da coleta de indivíduos que decolavam de seedlings de laranjeira doce [Citrus sinensis (L.) Osbeck] e entravam em tubos de 50 mL acoplados na tampa de gaiolas de garrafa plástica. Usando a mesma metodologia, verificou-se o efeito da condição da planta como estresse hídrico, adubação, brotações e densidade de insetos. Para estudar o efeito das bactérias em parâmetros biológicos e comportamentais, avaliaram-se a duração, viabilidade, longevidade de adultos, razão sexual, período de pré-oviposição, fecundidade e decolagem de adultos que se desenvolveram em plantas infectadas por Lam, Las e plantas sadias. Com os dados de biologia calculou-se uma tabela de vida de fertilidade. Além disso, verificou-se a preferência ao pouso de adultos sadios de D. citri em plantas infectadas por Lam, Las e sadias (controle). Os resultados mostraram que uma pequena parcela da população tende a decolar de plantas cítricas e esse comportamento é mais frequente no período da tarde (14:00 e 16:00 h). Insetos que se desenvolveram em regime de temperatura baixa (18 °C) e curto período de luz (10h) apresentaram menor propensão ao voo. Em contraste, após o desenvolvimento em temperatura constante de 27° C, os insetos apresentaram uma maior tendência de decolagem das plantas. Coincidentemente, estimou-se a temperatura limiar de voo de D. citri em 27,1° C. Ao serem submetidos a plantas com estresse hídrico, adultos foram menos propensos ao voo quando comparados com insetos confinados em plantas com 70 e 100 % de capacidade de campo. Ninfas desenvolvidas em plantas com baixa qualidade nutricional geraram adultos mais propensos ao voo. O mesmo foi observado após o desenvolvimento em plantas com alta densidade populacional de ninfas. Após o desenvolvimento de imaturos de D. citri em plantas infectadas e sadias, observaram-se efeitos negativos induzidos por Lam e Las na viabilidade de ninfas, viabilidade do ciclo total, longevidade de fêmeas e parâmetros reprodutivos. Apesar de estatisticamente semelhante à Las, o efeito negativo de Lam na viabilidade do inseto aparentou ser mais pronunciado. Machos e fêmeas apresentam maior propensão ao voo após o desenvolvimento em plantas Lam. Não foram encontrados efeitos de plantas infectadas no pouso do inseto. Os resultados do presente estudo indicam que o comportamento em voo de D. citri pode ser modulado por fatores ambientais e da planta, os quais podem fornecer bases para o desenvolvimento de novas táticas de controle e ajudar a compreender a epidemiologia do HLB dos citros. Além disso, Lam parece afetar com mais intensidade parâmetros biológicos do inseto, o que poderia ser um fator determinando a baixa incidência de Las nos pomares brasileiros. / Huanglongbing (HLB) is considered the major obstacle to the orange juice industry worldwide. In Brazil, the disease is associated mainly to the bacteria \'Candidatus Liberibacter americanus\' (Lam) and \'Ca. L. asiaticus\' (Las), which are transmitted by the Asian citrus psyllid, Diaphorina citri Kuwayama (Hemiptera: Liviidae). Surveys show a significant increase of diseased plants in Brazilian citrus orchards and this increase is mainly due to the movement of the insect vector by flight. Literature information about the influence of environmental and plant condition factors on D. citri take-off are incipient or absent, as well as the effect of Lam on biological and behavioral parameters of the insect. Knowledge of these factors could help to understand HLB epidemiology and to develop effective control tactics. Therefore, the objectives of the current study were (1) to determine the effect of environmental factors on D. citri take-off; (2) to verify the effect of plant condition on D. citri take-off; and (3) to study the possible influence of Lam and Las on the biology, flight propensity and alighting preferences of D. citri. In the study in which the effects of environmental factors were tested, healthy adults of D. citri were evaluated in relation to the diel flight periodicity and the temperature threshold for flight. Furthermore, the effect of different photoperiod and temperature regimes and constant temperatures on D. citri take-off were evaluated considering the number of insects which took off from sweet orange citrus seedlings [Citrus sinensis (L.) Osbeck] and entered inside 50 mL tubes located on the cap of plastic bottle cages. Using the same methodology, the effect of water stress, fertilization, shoots of citrus plants and density of insects were evaluated. To study the effect of bacteria on biological and behavioral parameters, we evaluated some life traits, including development time, survival, adult longevity, sex ratio, preoviposition time, female fecundity and take-off from adults that developed on Lam-infected, Las-infected and healthy plants. A fertility life table was calculated with life-trait data. In addition, the alighting and settling preference of healthy adults on infected and healthy plants was evaluated. The results showed that a small portion of tested population tends to take off from citrus plants and this behavior is more prevalent in the afternoon (14:00-16:00 h). Adults that were submitted to lower temperatures (18° C) and short light periods (10h) showed less propensity to flight. In contrast, at constant 27° C the insects were more prone to fly. Coincidently, the threshold of temperature for flight was 27.1º C. When subjected to water-stressed plants, adults were less prone to fly compared with insects confined on plants with 70 and 100% of field capacity. Nymphs developed on plants with poor nutritional quality generated adults more prone to fly. The same was observed after the development on plants with high population density of nymphs. Negative effects of Lam and Las infections were observed on nymph survival, egg to adult survival, adult longevity and reproductive parameters. Although statistically similar to Las, the negative effect of Lam on viability appeared to be more pronounced than that of Las on D. citri populations. Male and female of D. citri showed more propensity for flight after development on Lam-infected plants, with the Las treatment showing intermediate behavior between Lam and control plants. There was no effect of infected plants on alighting and settling preferences. Results from current study suggest that the flight behavior of D. citri is modulated by environmental and plant conditions factors, which could provide a basis for further development of efficient control tactics and understanding HLB epidemiology. Furthermore, Lam seems to have a more pronounced negative effect on biological parameters of D. citri, which could be a factor determining the low incidence of this bacterium in Brazilian orchards.

O Huanglongbing (HLB) ou \"greening\" é considerada, atualmente, a mais séria doença da citricultura no mundo, cujos sintomas estão associados às bactérias \"Candidatus Liberibacter spp.\". Uma vez que não há medidas curativas para a doença, o manejo baseia-se em medidas curativas como o controle de Diaphorina citri, vetor do patógeno. Esse inseto apresenta uma gama de hospedeiros de mais de 50 espécies da família Rutaceae, incluído as espécies e variedades do gênero Citrus, porém, nem todos os hospedeiros permitem o completo desenvolvimento do inseto. Dessa forma, objetivou-se com este trabalho verificar a existência de características de variedades cítricas de copa e porta-enxerto, mais utilizadas na citricultura, que afetam os aspectos bioecológicos de D. citri, bem como caracterizá-las, de modo que possam servir de base para desenvolvimento de estratégias de manejo do inseto vetor. Para isso, foram estudados: 1) comportamento de escolha hospedeira de D. citri em diferentes combinações de variedades de copa e porta-enxerto e a identificação dos voláteis envolvidos; 2) os efeitos das combinações copa e porta-enxerto na biologia de D. citri e 3) estudos sobre o comportamento alimentar de D. citi por meio da técnica de Electrical Penetration Graph em diferentes variedades de copa de citros. Verificou-se comportamento de escolha diferenciado entre fêmeas e machos de D. citri em função do hospedeiro. O porta-enxerto não influenciou o comportamento de escolha de D. citri. Foram observadas diferenças significativas na qualidade e quantidade nos perfis de voláteis liberados pelos diferentes hospedeiros, com a predominância de terpenoides. As variáveis biológicas de D. citri foram afetadas pelos hospedeiros. A variedade \'Hamlin\' foi classificada como a menos adequada ao psilídeo independentemente do porta-enxerto utilizado. Houve influencia da variedade de copa de citros no consumo alimentar de D. citri. Utilizando-se a técnica de EPG não é possível observar diferenças no comportamento alimentar de D. citri entre os hospedeiros testados. / Huanglongbing (HLB) or \"greening\" is currently considered the most serious citrus disease worldwide, whose symptoms are associated with the bacteria \"Candidatus Liberibacter spp.\". Since there are no curative measures for the disease, management is based on curative measures like control of the pathogen vetor, Diaphorina citri. This insect has a range host of more than 50 species of the family Rutaceae, including species and varieties of the genus Citrus, but not all hosts allow the complete development of the insect. Thus, the objective of this study was to verify the existence of characteristics of citrus scion and rootstock varieties, more used in the citriculture, that affect the bioecological aspects of D. citri, as well as characterize them, serving as basis for development of management strategies for this insect vector. For this, were studied: 1) host choice behavior of D. citri in different combinations of scion and rootstock varieties and the identification of the volatiles involved; 2) the effects of scion and rootstock combinations on the biology of D. citri and 3) studies on the feeding behavior of D. citi using the Electrical Penetration Graph technique in different varieties of citrus scion. There was a differentiated choice behavior between males and females of D. citri depending on the host. The rootstock did not influence the choice behavior of D. citri. Significant differences were observed in the quality and quantity of the volatiles released by the different hosts, with the predominance of terpenoids. The biological variables of D. citri were affected by the hosts. The \'Hamlin\' variety was classified as less suitable to the psyllid independently of the rootstock used. There was influence of the citrus scion variety on the food intake of D. citri. Through EPG technique it is not possible to observe differences in the feeding behavior of D. citri among the hosts tested.

O Huanglongbing (HLB) ou \"greening\" é considerada, atualmente, a mais séria doença da citricultura no mundo, cujos sintomas estão associados às bactérias \"Candidatus Liberibacter spp.\". Uma vez que não há medidas curativas para a doença, o manejo baseia-se em medidas curativas como o controle de Diaphorina citri, vetor do patógeno. Esse inseto apresenta uma gama de hospedeiros de mais de 50 espécies da família Rutaceae, incluído as espécies e variedades do gênero Citrus, porém, nem todos os hospedeiros permitem o completo desenvolvimento do inseto. Dessa forma, objetivou-se com este trabalho verificar a existência de características de variedades cítricas de copa e porta-enxerto, mais utilizadas na citricultura, que afetam os aspectos bioecológicos de D. citri, bem como caracterizá-las, de modo que possam servir de base para desenvolvimento de estratégias de manejo do inseto vetor. Para isso, foram estudados: 1) comportamento de escolha hospedeira de D. citri em diferentes combinações de variedades de copa e porta-enxerto e a identificação dos voláteis envolvidos; 2) os efeitos das combinações copa e porta-enxerto na biologia de D. citri e 3) estudos sobre o comportamento alimentar de D. citi por meio da técnica de Electrical Penetration Graph em diferentes variedades de copa de citros. Verificou-se comportamento de escolha diferenciado entre fêmeas e machos de D. citri em função do hospedeiro. O porta-enxerto não influenciou o comportamento de escolha de D. citri. Foram observadas diferenças significativas na qualidade e quantidade nos perfis de voláteis liberados pelos diferentes hospedeiros, com a predominância de terpenoides. As variáveis biológicas de D. citri foram afetadas pelos hospedeiros. A variedade \'Hamlin\' foi classificada como a menos adequada ao psilídeo independentemente do porta-enxerto utilizado. Houve influencia da variedade de copa de citros no consumo alimentar de D. citri. Utilizando-se a técnica de EPG não é possível observar diferenças no comportamento alimentar de D. citri entre os hospedeiros testados. / Huanglongbing (HLB) or \"greening\" is currently considered the most serious citrus disease worldwide, whose symptoms are associated with the bacteria \"Candidatus Liberibacter spp.\". Since there are no curative measures for the disease, management is based on curative measures like control of the pathogen vetor, Diaphorina citri. This insect has a range host of more than 50 species of the family Rutaceae, including species and varieties of the genus Citrus, but not all hosts allow the complete development of the insect. Thus, the objective of this study was to verify the existence of characteristics of citrus scion and rootstock varieties, more used in the citriculture, that affect the bioecological aspects of D. citri, as well as characterize them, serving as basis for development of management strategies for this insect vector. For this, were studied: 1) host choice behavior of D. citri in different combinations of scion and rootstock varieties and the identification of the volatiles involved; 2) the effects of scion and rootstock combinations on the biology of D. citri and 3) studies on the feeding behavior of D. citi using the Electrical Penetration Graph technique in different varieties of citrus scion. There was a differentiated choice behavior between males and females of D. citri depending on the host. The rootstock did not influence the choice behavior of D. citri. Significant differences were observed in the quality and quantity of the volatiles released by the different hosts, with the predominance of terpenoids. The biological variables of D. citri were affected by the hosts. The \'Hamlin\' variety was classified as less suitable to the psyllid independently of the rootstock used. There was influence of the citrus scion variety on the food intake of D. citri. Through EPG technique it is not possible to observe differences in the feeding behavior of D. citri among the hosts tested.