Orientador: Alexandre Lima de Andrade / Co-orientador: Tereza Cristina Cardoso da Silva / Banca: Camila da Silva Frade / Banca: Maria Gisela Laranjeira / Banca: Debora Aparecida Pires de Campos Zuccari / Banca: Flávia de Rezende Eugênio / Resumo: Em medicina veterinária, os tumores mamários de cadelas possuem alta casuística e o seu prognóstico, em muitos casos, já desfavorável. Dessa forma, é imperioso desenvolver formas eficientes para estudar o comportamento dessa neoplasia, utilizando cultivos celulares para aplicação de testes quimioterápicos associados à expressão de indutores da apoptose. Assim o objetivo desse estudo foi realizar o cultivo, em 3D, de tumores mamários, mimetizando o ambiente tumoral "in vivo", em substituição aos testes experimentais com animais e cobaias de laboratório. Adicionalmente, pretendeuse analisar a expressão das proteínas caspase 2, 3, 8, 9, Bcl-2 e Bax em células após o tratamento com carboplatina (dose 1,25μM), e a p53 em cultivo monocamada em células de baixa e alta passagem (20 até 58, respectivamente). O cultivo em 3D demonstrou ser uma boa ferramenta para o estudo "in vitro". Os esferoides formados diminuíram de tamanho após tratamento com carboplatina. A expressão de Bcl-2, em duas amostras, indicou resistência à carboplatina em dois tipos histológicos (carcinoma solido e carcinoma espinocelular). As caspases 2 e 3 não foram expressas em amostras tratadas, indicando que a carboplatina não causa morte celular pela apoptose. A p53 foi marcada no núcleo e no citoplasma, indicando anormalidade nessa proteína, que pode estar associada à progressão maligna em neoplasias. Todos os ensaios desenvolvidos no cultivo 3D mostraram que é possível, com essa técnica, aprofundar os estudos sobre as neoplasias mamárias em cães, podendo contribuir para novas descobertas referente ao prognóstico e novos tratamentos / Abstract: In Veterinary Medicine canine mammary tumors have high casuistry and in many cases bad prognosis the prognosis is bad. Thus it is imperative to develop efficient ways to study the behavior of this tumor using tissue culture tests for applying chemotherapeutic associated with expression inducers of apoptosis. The aim of this study was to grow cells of breast tumors in 3D culture where can mimic the environment "in vivo". Additionally, analyze the expression of the caspase protein 2, 3, 8, 9, Bcl-2 and Bax and cells after treatment with carboplatin (dose 1.25 mM). Thus, analyse of p53 cells in monolayer culture in high-pass (up to 58 passages) and low-pass (up to 20 passages). The spheroids formed decreased in size after treatment with carboplatin. The expression of Bcl- 2 in both samples showed resistance to carboplatin in two histological types (solid carcinoma and squamous cell carcinoma). The caspase 2 and 3 not expressed in treated samples indicating that carboplatin does not cause cell death by apoptosis. P53 showed cytoplasmic and in the nucleus, indicating that abnormal protein may be associated with malignant progression in cancer. All assays developed in 3D culture showed that it is possible with this technique, further studies on mammary tumors in dogs that can contribute on new discoveries regarding the prognosis and treatments / Doutor

Orientador: Aureo Evangelista Santana / Coorientador: Mirela Tinucci Costa / Banca: Maura Rosane Valério Ikoma / Banca: Felipe Augusto Ruiz Sueiro / Banca: Marcia Ferreira da Rosa Sobreira / Banca: Sabryna Gouveia Calazans / Resumo: Em Medicina Veterinária o linfoma é uma neoplasia caracterizada por proliferação clonal de linfócitos malignos, sendo uma das mais comuns em cães. Há evidências que as Tregs inibem a função efetora contra tumores, resultando em disfunção de células T em humanos e cães com câncer. O aumento da expressão da enzima ciclooxigenase-2 (COX-2) pelas células do tumor e células inflamatórias locais, estimula o desenvolvimento das Tregs. Deste modo, o tratamento com inibidores de COX-2, como os anti-inflamatórios não esteroidais é mais uma estratégia para a supressão das Tregs. Neste contexto, este trabalho teve como objetivo avaliar quantitativamente, por intermédio da citometria de fluxo, as Tregs em cães com linfoma, submetidos ao protocolo quimioterápico CHOP, associado ou não a um inibidor de COX-2 (Firocoxib). Foram utilizados 12 cães controles (hígidos), 12 cães com linfoma tratados com o protocolo CHOP e 12 cães com linfoma, tratados com o CHOP+Firocoxib. As Tregs formam avaliadas por citometria de fluxo, no momento do diagnóstico, após a indução da quimioterapia (5ª semana) e ao término do protocolo (20ª semana). Os resultados mostraram que os cães com linfoma apresentaram porcentagens maiores de Tregs (17,08±1,62) quando comparados ao grupo controle (5,67±1,62) (p<0,0001). Além disso, no grupo linfoma teve uma diminuição das porcentagens de Tregs ao final do protocolo quimioterápico, nos grupos tratados com o protocolo CHOP tradicional (GT1) (8,648±1,736) e no grupo tratado com CHOP associado a um firocoxib (GT2) (5,903±1,126) (p<0,0001). E que entre os grupos, GT1 (20,66±2,487) e GT2 (12,79±0,7673), apenas no momento do diagnóstico (M0), foi estatisticamente diferente (p<0,0114). Conclui-se que cães com linfoma multicêntrico possui um aumento das Tregs, e durante o protocolo quimioterápico, associado ou não a um firocoxib, essas células diminuem significativamente / Abstract: In Veterinary Medicine lymphoma is a neoplasm characterized by clonal proliferation of malignant lymphocytes, one of the most common in dogs. There is evidence that Treg inhibit the effector function against tumors, resulting in T cell dysfunction in humans and dogs with cancer. Increased expression of cyclooxygenase-2 enzyme (COX-2) by tumor cells and local inflammatory cells, stimulates the development of Treg. Thus, treatment with COX-2 inhibitors such as nonsteroidal anti-inflammatory is a further strategy for the removal of Tregs. In this context, this work aimed to evaluate quantitatively, through flow cytometry, Tregs in dogs with lymphoma undergoing chemotherapy protocol CHOP, with or without a COX-2 inhibitor (Firocoxib). 12 dogs were used controls (healthy), 12 dogs with lymphoma treated with CHOP protocol and 12 dogs with lymphoma treated with CHOP + Firocoxib. Tregs form assessed by flow cytometry at diagnosis after induction chemotherapy (Week 5) and the protocol termination (20 weeks). The results showed that dogs with lymphoma had higher percentages of Tregs (17.08 ± 1.62) compared with the control group (5.67 ± 1.62) (p <0.0001). Moreover, in the lymphoma group had a decrease of Treg percentages at the end of chemotherapy protocol, the groups treated with the traditional CHOP protocol (GT1) (8.648 ± 1.736) and in the CHOP arm associated with a firocoxib (GT2) (5,903 ± 1.126) (p <0.0001). And that between the groups, GT1 (20.66 ± 2.487), and GT2 (12.79 ± 0.7673) only at the time of diagnosis (M0), was statistically different (p <0.0114). It was concluded that dogs with multicentric lymphoma has increased Tregs, and during the chemotherapy protocol, with or without a firocoxib, these cells decrease significantly / Doutor

Orientador: Aureo Evangelista Santana / Banca: Maria Angélica Dias / Banca: Maria Luísa Buffo de Cápua / Banca: Marcia Ferreira da Rosa Sobreira / Banca: Flávia Eiras dela Coleta / Resumo: Considerando a relevância do linfoma canino na rotina veterinária e o curto período de sobrevida alcançado com os protocolos quimioterápicos empregados, novas alternativas de tratamento estão sendo estudadas. Nas últimas décadas, diversos estudos foram realizados correlacionando o desenvolvimento e progressão de alguns tipos de neoplasias com a superprodução de prostaglandinas nas células tumorais e inflamatórias locais, em consequência à maior produção de COX-2, que leva à proliferação celular, à supressão da apoptose, à indução da angiogênese e da metástase, ações estas que contam para sua função oncogênica. Uma das estratégias para a redução das concentrações de PGE2 é a utilização de inibidores de COX-2 no tratamento antineoplásico. No presente estudo foram avaliados 20 cães com diagnóstico de linfoma multicêntrico, divididos em dois grupos. Os animais do grupo 1 foram tratados com o protocolo quimioterápico de Madson-Wisconsin convencional, e os do grupo 2, com o protocolo modificado pela substituição da prednisona por um inibidor seletivo de COX-2. Antes da primeira (T1) e da quinta (T2) sessão de quimioterapia, foram realizados hemograma e dosagem de PGE2 plasmática por ELISA. Observou-se um maior número de animais fêmeas, das raças Rottweiler e sem raça definida, de meia idade, que apresentaram com maior freqüência, o linfoma multicêntrico em estádio IVa, de origem celular B, e difuso de grandes células. No leucograma, notou-se em alguns animais, no momento do diagnóstico, a presença de leucocitose por neutrofilia ou por linfocitose, e após o primeiro ciclo de quimioterapia, sete casos de linfopenia. Os cães com remissão dos sinais clínicos após o primeiro ciclo de quimioterapia, apresentam menores concentrações de PGE2 plasmática quando comparados com aqueles sem remissão. A associação do tratamento quimioterápico com um inibidor de COX-2 foi capaz de reduzir ... / Abstract: Considering the relevance of canine lymphoma in veterinary medicine and the short survival achieved with chemotherapy protocols employed, new treatment options are being studied. In the last decades, various studies have been conducted to correlate the development and progression of certain types of cancer with the overproduction of prostaglandins in tumor sites and inflammatory cells, due to increased production of COX-2, leading to cell proliferation, the suppression of apoptosis , the induction of angiogenesis and metastasis, these actions that count toward their oncogenic function. One strategy for reducing the levels of PGE2 is the use of COX-2 in anticancer treatment. In this study 20 dogs with diagnosis of multicentric lymphoma, divided in two groups were evaluated. Animals in group 1 were treated with the standard Madison-Wisconsin chemotherapy protocol, and group 2, with this protocol modified by the replacement of prednisone for a selective inhibitor of COX-2. Before the first (T1) and fifth (T2) chemo, blood samples and measurement of plasma PGE2 by ELISA were performed. We observed a higher number of female animals, Rottweiler breeds and mixed breed, middle age animals, who presented with greater frequency, multicentric lymphoma in stage IVa, B cell origin, and diffuse large cell. Leukocytosis with neutrophilia or lymphocytosis was observed for some animals at the moment of diagnosis, and after the first cycle of chemotherapy, seven cases of lymphopenia. Dogs with clinical signs of remission after the first cycle of chemotherapy show lower plasma PGE2 when compared with those without remission. The association of chemotherapy treatment with a COX-2 was able to reduce concentrations of PGE2 in 50% of patients, while only 10% of those in group 1 decreased. However, it was not possible to confirme the role of PGE2 as a marker of prognosis and survival time for dogs with lymphoma / Doutor