Orientador: Fernando Lucas Primo / Resumo: Neste trabalho de mestrado profissional foi possível obter um sistema nanoestruturado polimérico contendo Quinizarina (QZ), um corante fotossensibilizador que emerge como nova alternativa para tratamento antitumoral, utilizando a terapia fotodinâmica (TFD). As nanopartículas foram produzidas em escala, utilizando um método inovador de Nano Spray Dryer as quais foram caracterizadas por diferentes métodos, tais como: Espectroscopia por Absorção e Emissao de Fluorescência na região do Ultra-Violeta Visível (UV-Vis), Espalhamento de Luz dinâmica (DLS) e Microscopia Eletrônica de Varredura (MEV). Através das caracterizações observou-se nanopartículas monodispersas com diâmetro hidrodinâmico reduzido, verificou-se também que as nanopartículas foram preparadas de forma eficiente, o qual obteve-se a encapsulação das partículas QZ camada por camada (layer by layer). As nanopartículas foram preparadas utilizando uma rota de baixo custo e com altissimo rendimento (>70%). Após a completa caracterização do sistema, as nanopartículas foram aplicadas em testes biológicos in vitro utilizando dois tipos de linhagens celulares: a fibroblastóide (NIH-3T3) e cancerígena de origem melanocítica (B16-F10). Realizou-se estudos de biocompatibilidade, internalização utilizando QZ livre e encapsulada (uptake) e microscopia confocal em ambas as linhagens utilizadas e testes de fototoxicidade na linhagem melanocítica. Observou-se através dos estudos de uptake que houve uma maior internalização da quiniza... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: In this professional master's work it was possible to obtain a polymeric nanostructured system containing Quinizarin (QZ), a photosensitizing dye that appears as a new alternative for antitumor treatment, using a photodynamic therapy (PDT). The nanoparticles were produced in scale using an innovative Nano Spray Dryer method, and characterized by different methods such as: Absorption Spectroscopy and Fluorescence Emission in the Ultra-Violet and Visible Region (UV-Vis), Dynamic Light Scattering (DLS) and Scanning Electron Microscopy (SEM). Through caracterizations, was observed that the nanoparticles produced where monodispered and small hydrodynamic diameter, the particles where prepared in a efficient way, which encapsulated the QZ particles layer by layer. The nanoparticles were prepared using a low cost, high yield (> 70%) route. After a complete characterization of the system, nanoparticles were applied in in vitro biological tests using two types of cell line: a fibroblast (NIH-3T3) and a melanocytic cancer (B16-F10). Biocompatibility, uptake, using free and encapsulated QZ and confocal microscopy studies were performed in both cell lines, and phototoxicity tests were performed in melanocytic cell line. It was observed through uptake studies that there was a greater internalization of nanostructured quinizarin, due to its high biocompatibility, compared to free quinizarin. The internalization study by confocal microscopy demonstrates that the QZ nanostructured system fun... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

As enzimas constituem parte essencial à vida, sendo catalisadores capazes de aumentar em várias ordens de grandeza a velocidade da reação. As lipases, que catalisam a hidrólise de triacilglicerídeos, são enzimas versáteis e de fácil obtenção e por isso estão presentes em diversos setores da indústria e também constituem tema de estudo no meio acadêmico. Tem-se como os objetivos principais deste trabalho a elaboração de um método para se avaliar a cinética hidrólise de lipase suportada por intermédio de espectroscopia de fluorescência. O sistema utilizado foi o DAQ (diaceto-quinizarina) / quinizarina. Este sistema é propício, pois a DAQ, que não é fluorescente, quando hidrolisada resulta na quinizarina, altamente fluorescente. Para se tratar a cinética de hidrólise foi desenvolvido um modelo considerando-se duas etapas seqüenciais de hidrólise, uma vez que a enzima catalisa a quebra de apenas um grupo éster por ciclo catalítico. O modelo mostrou-se bastante fiel no ajuste dos dados experimentais obtidos, sendo possível obter a constante cinética envolvida no processo global de hidrólise, que constitui uma combinação linear das constantes cinéticas dos processos elementares. / Enzymes are essential to life and are capable to increase in many orders of magnitude the velocity of reaction. Lipases, that catalyses the hydrolysis of triacylglyceride, are versatile enzymes and easy to obtain and are present in many industry segments and also constitutes academic studies. The objective of this work is the elaboration of a method to evaluate the hydrolysis kinetic of immobilized lipase through fluorescence spectroscopy. The system used was DAQ (diacetate-quinizarin) / quinizarin. This system is auspicious because DAQ, not-fluorescent, when hydrolyzed results quinizarin, highly fluorescent. To treat the hydrolysis kinetic, a model that consider a twostep sequential reaction were developed, once the enzymes breaks only one ester in each catalytic cycle. The model agreed with the experimental data, and it was possible to obtain the global kinetic constant, that is a linear combination of the elementary constants

As enzimas constituem parte essencial à vida, sendo catalisadores capazes de aumentar em várias ordens de grandeza a velocidade da reação. As lipases, que catalisam a hidrólise de triacilglicerídeos, são enzimas versáteis e de fácil obtenção e por isso estão presentes em diversos setores da indústria e também constituem tema de estudo no meio acadêmico. Tem-se como os objetivos principais deste trabalho a elaboração de um método para se avaliar a cinética hidrólise de lipase suportada por intermédio de espectroscopia de fluorescência. O sistema utilizado foi o DAQ (diaceto-quinizarina) / quinizarina. Este sistema é propício, pois a DAQ, que não é fluorescente, quando hidrolisada resulta na quinizarina, altamente fluorescente. Para se tratar a cinética de hidrólise foi desenvolvido um modelo considerando-se duas etapas seqüenciais de hidrólise, uma vez que a enzima catalisa a quebra de apenas um grupo éster por ciclo catalítico. O modelo mostrou-se bastante fiel no ajuste dos dados experimentais obtidos, sendo possível obter a constante cinética envolvida no processo global de hidrólise, que constitui uma combinação linear das constantes cinéticas dos processos elementares. / Enzymes are essential to life and are capable to increase in many orders of magnitude the velocity of reaction. Lipases, that catalyses the hydrolysis of triacylglyceride, are versatile enzymes and easy to obtain and are present in many industry segments and also constitutes academic studies. The objective of this work is the elaboration of a method to evaluate the hydrolysis kinetic of immobilized lipase through fluorescence spectroscopy. The system used was DAQ (diacetate-quinizarin) / quinizarin. This system is auspicious because DAQ, not-fluorescent, when hydrolyzed results quinizarin, highly fluorescent. To treat the hydrolysis kinetic, a model that consider a twostep sequential reaction were developed, once the enzymes breaks only one ester in each catalytic cycle. The model agreed with the experimental data, and it was possible to obtain the global kinetic constant, that is a linear combination of the elementary constants