Dissertação(mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Animal / Submitted by Sabrina Silva de Macedo (sabrinamacedo@bce.unb.br) on 2012-07-11T15:06:44Z No. of bitstreams: 1 2012_CesarAugustoPriasMarquez.pdf: 1029411 bytes, checksum: d57e4c8da8e6cbfd2e1beb6554f2c535 (MD5) / Approved for entry into archive by Jaqueline Ferreira de Souza(jaquefs.braz@gmail.com) on 2012-07-30T12:03:51Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_CesarAugustoPriasMarquez.pdf: 1029411 bytes, checksum: d57e4c8da8e6cbfd2e1beb6554f2c535 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-07-30T12:03:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_CesarAugustoPriasMarquez.pdf: 1029411 bytes, checksum: d57e4c8da8e6cbfd2e1beb6554f2c535 (MD5) / No presente trabalho foi caracterizado biológica e estruturalmente umpeptídeo análogo da ocelatina-P1 isolado a partir da secreção da pele da rã-pimentaLeptodacfylus labyrinthicus. A secreção cutânea, obtida por estimulação elétrica, foifracionada por RP-HPLC em coluna C3 e as frações obtidas testadas contra cepasreferenciais das bactérias Escherichia coii e Staphylococcus aureus. Um novopeptídeo antimicrobianoi nomeado G160CP1, foi purificado por RP-HPLC em colunaC18, analisado por MALDI-TOF MS e submetido à degradação de Edman paradeterminação de sua estrutura primária. Posteriormente, o peptídeo G160CP1 foisintetizado quimicamente (com o emprego da química Fmoc) e analisado pordicroísmo circular para avaliação dos seus componentes de estrutura secundária,bem como empregado em ensaios biológicos para avaliação de suas propriedadescitolíticas. A atividade antibacteriana deste peptídeo foi avaliada com a determinaçãoda CIM contra bactérias Gram-positivas {Staphylococcus aureus, Staphylococcusepidermidis e Enterococcus faecalis) e Gram-negativas (Escherichia coli, Klebsiellapneumoniae, Enterobacter cloacae e Pseudomonas aeruginosa). Também foramavaliados seus efeitos citotóxicos sobre eritrócitos, leucócitos e plaquetas humanos.O peptídeo G160CP1 apresenta uma massa molecular de 2,51 kDa, amidação naporção C-terminal e propensão para formar estruturas em a-hélice em ambienteshidrofóbicos. Tal peptídeo mostrou-se ativo contra os bacilos Gram-negativos E. colie K. pneumoniae e contra a bactéria Gram-positiva S. epidermidis, não tendodemonstrado toxicidade relevante contra células sangüíneas. Essas característicastornam o peptídeo G160CP1 um bom candidato para o tratamento de doençascausadas por bactérias Gram-negativas. ______________________________________________________________________________________ ABSTRACT / This study allowed the biological and structural characterization of a peptideanalog of ocellatin-P1 isolated from the skin secretion of the pepper-frogLeptodactyius labyhnthicus. The skin secretion, obtained by electrical stimulation,was fractioned by RP-HPLC using a Cs column and the eluted fractions were testedagainst Escherichia coli and Staphylococcus aureus bacterial strains. One newantimicrobial peptide, named G160CP1, was purified by RP-HPLC using a C18column, analyzed by MALDI-TOF MS and sequenced by Edman degradation.Subsequently, the peptide was chemically synthesized (using Fmoc chemistry) andanalyzed by circular dichroism for assessment of its secondary structurecomponents, as well as employed in biological assays to evaluate its cytolyticproperties. Antibacterial activity of this peptide was assessed by determination of itsMICs against Gram-positive (Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidisand Enterococcus faecalis) and Gram-negative {Escherichia coli, Klebsiellapneumoniae., Enterobacter and Pseudomonas aeruginosa) bacteria. Cytotoxic effectson human erythrocytes, leucocytes and platelets were also assessed. The G160CP1peptide has a molecular mass of 2.51 kDa, amidated C-terminus and a propensity toform a-helix structures at hydrophobic environments. This peptide was active againstGram-negative bacilli E. coli and K. pneumoniae and against the Gram-positivebacteria S. epidermidis, while not relevant toxicity was found in blood cells. Suchfeatures make G160CP1 a good candidate for treatment of diseases caused byGram-negative bacteria.