Made available in DSpace on 2014-12-17T15:32:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 MaiaraM_Dissert.pdf: 2968185 bytes, checksum: 105b46ac6fb81afd7b7596a11828a3c8 (MD5) Previous issue date: 2010-03-10 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior / Receptor ativador nuclear κappa B (RANK), ligante do receptor ativador nuclear κappa B (RANKL) e osteoprotegerina (OPG) s?o membros da fam?lia do fator de necrose tumoral relacionados com o metabolismo ?sseo. A forma??o, diferencia??o e atividade dos osteoclastos s?o reguladas por estas tr?s prote?nas. RANK ? um receptor transmembrana presente em diversos tipos celulares, principalmente em c?lulas de linhagem macrof?gica, linf?citos, c?lulas dendr?ticas e fibroblastos e quando ativado pelo seu ligante, RANKL, promove a diferencia??o e ativa??o de c?lulas osteocl?sticas respons?veis pelo processo de reabsor??o ?ssea. A OPG impede a liga??o RANK/RANKL atuando como um receptor inibit?rio para a atividade osteol?tica. O objetivo deste estudo foi comparar a express?o imuno-histoqu?mica destes biomarcadores em cistos radiculares (n=20) e cistos dent?geros (n=20). A express?o imuno-histoqu?mica destes marcadores foi avaliada no epit?lio e na c?psula dos cistos por escores e percentuais m?dios de imunomarca??o. Para o epit?lio, a an?lise semi-quantitativa revelou um padr?o similar dos escores de imunomarca??o de RANK, RANKL e OPG nas les?es, n?o havendo diferen?a estat?stica significante (p=0.589, p=0.688, p=0.709, respectivamente). Para a c?psula c?stica a an?lise quantitativa, mostrou diferen?a estat?stica significante entre os percentuais m?dios de imunomarca??o do RANK e RANKL (p=0,001 e p=0,005, respectivamente) nos cistos. A correla??o dos escores de imunomarca??o de RANKL e OPG no epit?lio do CR e do CD revelou diferen?a estat?stica significante (p=0,029, p=0,003, respectivamente). No epit?lio dos CRs e dos CDs observou-se uma maior imunoexpress?o da OPG comparada a do RANKL. Os resultados apontam a presen?a de RANK, RANKL e OPG nos cistos radiculares e cistos dent?geros, sugerindo a atua??o destas prote?nas no desenvolvimento e expans?o das les?es no osso adjacente / Receptor ativador nuclear κappa B (RANK), ligante do receptor ativador nuclear κappa B (RANKL) e osteoprotegerina (OPG) s?o membros da fam?lia do fator de necrose tumoral relacionados com o metabolismo ?sseo. A forma??o, diferencia??o e atividade dos osteoclastos s?o reguladas por estas tr?s prote?nas. RANK ? um receptor transmembrana presente em diversos tipos celulares, principalmente em c?lulas de linhagem macrof?gica, linf?citos, c?lulas dendr?ticas e fibroblastos e quando ativado pelo seu ligante, RANKL, promove a diferencia??o e ativa??o de c?lulas osteocl?sticas respons?veis pelo processo de reabsor??o ?ssea. A OPG impede a liga??o RANK/RANKL atuando como um receptor inibit?rio para a atividade osteol?tica. O objetivo deste estudo foi comparar a express?o imuno-histoqu?mica destes biomarcadores em cistos radiculares (n=20) e cistos dent?geros (n=20). A express?o imuno-histoqu?mica destes marcadores foi avaliada no epit?lio e na c?psula dos cistos por escores e percentuais m?dios de imunomarca??o. Para o epit?lio, a an?lise semi-quantitativa revelou um padr?o similar dos escores de imunomarca??o de RANK, RANKL e OPG nas les?es, n?o havendo diferen?a estat?stica significante (p=0.589, p=0.688, p=0.709, respectivamente). Para a c?psula c?stica a an?lise quantitativa, mostrou diferen?a estat?stica significante entre os percentuais m?dios de imunomarca??o do RANK e RANKL (p=0,001 e p=0,005, respectivamente) nos cistos. A correla??o dos escores de imunomarca??o de RANKL e OPG no epit?lio do CR e do CD revelou diferen?a estat?stica significante (p=0,029, p=0,003, respectivamente). No epit?lio dos CRs e dos CDs observou-se uma maior imunoexpress?o da OPG comparada a do RANKL. Os resultados apontam a presen?a de RANK, RANKL e OPG nos cistos radiculares e cistos dent?geros, sugerindo a atua??o destas prote?nas no desenvolvimento e expans?o das les?es no osso adjacente

Das RANKL/RANK/OPG-System spielt eine entscheidende Rolle in der Steuerung der Osteoklastendifferenzierung und -aktivierung durch Osteoblasten/ Knochenmarkbindegewebszellen im Rahmen des Knochenremodelings. Osteoblasten/Knochenmarkbindegewebszellen exprimieren RANKL. Dieses hat im Körper zwei Rezeptoren: RANK und OPG. RANKL kann durch Bindung an RANK auf Osteoklasten/Osteoklastenvorläuferzellen in Gegenwart von M-CSF seine osteoklastenstimulierende Wirkung entfalten. Der ebenfalls von Osteoblasten gebildete „decoy“-Rezeptor OPG blockiert als freies Protein durch Bindung an RANKL dessen Interaktion mit RANK und verhindert somit die Osteoklastogenese und Osteoklastenaktivierung. Das RANKL/RANK/OPG-System erfüllt im Körper noch weitere Funktionen im Immunsystem, in der Organentwicklung lymphatischer Gewebe und in der Entwicklung der laktierenden Brustdrüse. Viele Zytokine greifen hemmend oder aktivierend in die Osteoklastogenese ein. Sie können dies zum einen durch die Beeinflussung des RANKL/OPG-Verhältnisses, zum anderen durch direkte Interaktion mit Osteoklasten/Osteoklastenvorläuferzellen tun. Zytokine, die die Osteoklastogenese begünstigen, werden vor allem bei inflammatorischen Prozessen ausgeschüttet. Zusammen mit dem, bei diesen Zuständen von aktivierten T-Zellen produzierten RANKL kann dies längerfristig zu einem Knochenverlust führen, welcher sich im klinischen Bild der Osteoporose äußert. Aus den in der vorliegenden Dissertation durchgeführten Untersuchungen ergeben sich folgende Schlussfolgerungen: 1. Monozyten der Zelllinie RAW 264.7 lassen sich, wie bereits in der Literatur beschrieben, durch Zugabe von M-CSF und RANKL zu osteoklastenähnlichen Zellen differenzieren. 2. Die Osteoklastogenese lässt sich anhand der Veränderung verschiedener osteoklastenspezifischer Parameter charakterisieren. Es zeigt sich bei den mit M-CSF und RANKL stimulierten Monozyten eine erhöhte Transkription von CTR (Calcitoninrezeptor)- und TRAP (tartratresistente saure Phosphatase)-mRNA, eine erhöhte Expression des CTR-Proteins, eine erhöhte TRAP-Aktivität und eine Formierung TRAP-positiver mehrkerniger Riesenzellen, die in diesen Eigenschaften Osteoklasten entsprechen. Die zusätzliche Zugabe von TGF-b1 in Kombination mit M-CSF und RANKL resultiert in einer verstärkten Expression von CTR-mRNA und CTR-Protein. TRAP-mRNA-Expression und TRAP-Aktivität bleiben davon unbeeinflusst. 3. Als funktionelles Merkmal der in vitro differenzierten Osteoklasten können ihre Fähigkeit zur Ausbildung von Aktinringen und die Resorption von mineralisiertem Kollagen nachgewiesen werden. 4. Im Verlauf ihrer Differenzierung sekretieren Osteoblasten unterschiedliche Mengen an OPG. Das Maximum der Synthese liegt bei Tag 11. Freies RANKL lässt sich in Überständen von MC3T3-E1-Osteoblasten nicht nachweisen. 5. Das von Osteoblasten in das Medium abgegebene OPG ist in der Lage, die durch RANKL induzierte Osteoklastogenese von RAW-Monozyten zu hemmen. 6. In Kokulturen von MC3T3-E1-Osteoblasten und RAW-Monozyten kann keine Osteoklastogenese beobachtet werden, wahrscheinlich durch Fehlen der RANKLExprimierung oder zu starke OPG-Sekretion durch Osteoblasten. Besonders in der westlichen Welt mit ihrer hohen Lebenserwartung haben Krankheiten mit Knochenverlust sowie bösartige Neubildungen mit Knochenbefall eine große medizinische Bedeutung. Die Beeinflussung des RANKL/RANK/OPG-Systems bietet eine vielversprechende Möglichkeit zur Entwicklung hochwirksamer und nebenwirkungsarmer Medikamente zur Behandlung dieser Zustände.