Made available in DSpace on 2015-07-22T20:49:59Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-11-24. Added 1 bitstream(s) on 2015-08-11T03:26:31Z : No. of bitstreams: 1 Publico-474.pdf: 1648088 bytes, checksum: ac90101ea1d6072c64d4dd6e9a18d152 (MD5) / Justificativa: O presente trabalho aborda os efeitos de novos inibidores de acetilcolinesterase (AChE) na reatividade farmacológica e neurotransmissão em ratos e camundongos. Os novos anticolinesterásicos, ITH12118 e ITH12117, têm estrutura híbrida, derivada da molécula do anticolinesterásico Tacrina e da 1,4 diidropiridina nimodipina, inibidor de canal de Ca2+ do tipo L. O objetivo da síntese foi obter fármacos candidatos para o tratamento da Doença de Alzheimer. Materiais e métodos. Os experimentos de contração foram feitos inicialmente para comparar a ação de ITH12118 e ITH12117 com Fisostigmina, Tacrina, e Nimodipina em ductos deferentes de ratos (DDR) e camundongos (DDC) em curva concentração-efeito (CCE) para acetilcolina (ACh), avaliando-se os parâmetros efeito máximo (Emax), dose eficaz 50 (DE50), afinidade aparente (pD2), relação de doses (Dose Ratio, DR) para avaliar a potencialização da resposta da ACh pelos inibidores de AChE e responsividade relativa () para avaliar o efeito máximo do receptor de ACh. Para estudar o papel do Ca2+ foram feitas curvas cumulativas e tempo-efeito para o íon na presença dos inibidores de AChE ou nimodipina, além da medida de Ca2+ citosólico com sonda fluorescente FURA-2AM. Realizou-se também curvas por estimulação elétrica transmural para estudar o efeito sobre a contração neurogênica. CCE para NA também foram feitas. Além disso, foi medida a atividade da enzima AChE em microplaca, na presença dos inibidores. Foram feitos testes após o tratamento in vivo com Fisostigmina, e testes de aprendizado e memória em camundongos após tratamento com Tacrina e ITH12118. Resultados. Por alteração de DR, observou-se maior potenciação das curvas de ACh pela Fisostigmina, seguido da Tacrina e ITH12118 em DDR e discreta potenciação na presença de Fisostigmina e Tacrina em DDC. Entretanto, o Emax das curvas de ACh caiu drasticamente na presença dos anticolinesterásicos em DDR e em DDC, na presença de ITH12118 e ITH12117. Os experimentos para Ca2+ evidenciaram uma inibição significativa com a Nimodipina e ITH12118 em DDR, sendo que em DDC o ITH12117 também bloqueou a contração. Em relação à contração por estímulos elétricos, observamos somente bloqueio da fase tônica por ITH12118. Os experimentos em microplaca mostraram inibição da AChE pela Fisostigmina e Tacrina em DDR, DDC e SNC (córtex) de rato e camundongo, com inibição da enzima pelos compostos ITH12118 e ITH12117 somente em maiores concentrações. Em córtex de rato e camundongo, ITH12118 e ITH12117 mostraram maior potência de inibição. Observou-se maior proporção de BuChE em DDR, e experimentos preliminares de contração induzida com ACh realizados na presença de Iso-OMPA, inibidor seletivo de BuChE, e Fisostigmina, mostraram que a diminuição do Emax é menor que na presença de Fisostigmina isoladamente. A CCE para NA foi bloqueada em DDR pela Nimodipina e ITH12118, e em DDC pela Nimodipina, ITH12118 e ITH12117. Após tratamento in vivo, CCE para ACh não foram deslocadas. A avaliação de memória e aprendizado não apresentou diferenças em relação aos controles, porém houve tendência de maior retenção de memória após Tacrina e ITH12118. Conclusões. A potenciação da ACh no eixo das doses é coerente com o mecanismo de inibição da colinesterase pelos antagonistas. Entretanto ainda merece explicação a redução observada no Emax. Conforme os experimentos de contração, os compostos ITH12118 e ITH12117 apresentaram maior potência como bloqueadores de canal de Ca2+ do que como anticolinesterásicos. Os achados em relação às diferenças entre DDR e DDC parecem ser relacionadas à maior concentração de BuChE em DDR, mas esta observação deve ser melhor investigada. / Justification: The present work considers the effects of new inhibitors of acetylcholinesterase (AChE) on the reactivity and neurotransmission in rats and mice. The new anticholinesterase compounds, ITH12118 and ITH12117, have an hybrid stucture, derived from the molecule of of the anticholinesterase Tacrine and the 1,4 dihydropyridine nimodipine, a blocker of l-type calcium channel blocker. The objective of the syntesis was to obtain drugs as candidates for the theatment of Alzheimer’s disease. Material and Methods: Contraction experiments were initialy made to compare de actions of ITH12118 and ITH12117 with that of Physostigmine, Tacrine and Nimodipine in vas deferens of rats (RVD) and mice (MVD) on concentration-response curves (CRC) for ACh, for the measurement of the folowwing parameters: maximum effect (Emax), 50% effective dose (ED50), aparent affinity (pD2), dose ratio for agonist (DR) to evaluate the potentiation by cholinesterase blockers, intrinsic activity (a) of agonists and relative responsiveness () to evaluate the maximum effect of ACh receptor. For the study of the role of calcium, cumulative and time-response curves for this ion were made, in the presence of cholinesterase blockers and Nimodipine, besides the measurement of cytosolic calcium by means of fluorescent FURA-2AM. In addition, curves for transmural electrical stimulation were also made for the study of neurogenic contractions. CRC for NA were also made. Furthermore, the activity of the enzyme AchE was also analysed in microplates, in the presence of blockers. Finaly, tests after treatment in vivo were made for Physostigmine and tests for learning and memory of mice, after treatment with Tacrine and ITH12118. Results: After measuments of DR, we have observer a higher potentiation of the curves of ACh by Physostigmine, followed by Tacrine and ITH12118 in RVD, and a slght potentiation by Physostigmine and Tacrine in MVD. However, the Emax of the CRC for ACh was greatly decreased in the presence of anticholinesterase blockers in RVD and and in MVD after ITH12118 and ITH12117. The experiments with Ca2+ showed a significant block by Nimodipine and ITH12118 in RVD, and by ITH12117 in MVD. In relation to the contraction by electrical transmural stimulation, just a block of tonic contraction was induced by ITH12118. The experiments in microplates showed a block of AChH by Fisotigmine and Tacrine in RVD and MVD, and in rat and mouse in Central Nervous Sistem, with a blockade by higher concentrations of ITH12118 and ITH12117. In rat and mouse cortex ITH12118 and ITH12117 showed a higher potency of blockade. A higher proportion of BuChE was shown in RVD, and in preliminary contraction experiments with Iso-OMPA, a selective blocker of BuChE, and Physostigmine, showed that a reduction of Emax is lower in the presence of Physostigmine isolatedly. The curves for NA were blocked in RVD by Nimodipine and ITH12118 and by Nimodipine, ITH12118 and ITH12117 in MVD. After treatment in vivo, the curves for ACh were not displaced. The evaluation of learning and memory did not show significant differences from controls, but a tendency for a higher retention of memory was presented after Tacrine and ITH12117. Conclusions: The potentiation of ACh in the dosis axis is within the expectations for the block of cholinesterase by the antagonists. However, the decrease of Emax needs further investigation. According to the contraction experiments, compounds ITH12118 and ITH12117 showed a higher potency as blockers of calcium channels than of cholinesterase. The changes between RVD and MVD seem to be related to the higher concentration of BuChE in RVD, but this point needs additional investigation. / TEDE

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:50:06Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-03-30 / Justificativa: Devido aos poucos estudos que enfatizam o tratamento agudo in vivo com anfetamina e etanol e sua conseqüência na transmissão noradrenérgica da musculatura lisa de animais jovens, decidimos estudar os efeitos do tratamento simultâneo destes dois fármacos, estudando-os também isoladamente e em diferentes dosagens, tendo como modelo o ducto deferente (DD) de ratos periadolescentes, faixa etária que é pouco considerada nos estudos farmacológicos e que apresenta na maioria das vezes respostas diferentes daquelas esperadas para animais adultos e que podem determinar o desenvolvimento do animal. Materiais e métodos: Os animais periadolescentes foram divididos em seis grupos experimentais. A anfetamina (AMPH) foi administrada nas dosagens de 3 mg/Kg e 7 mg/Kg, enquanto o etanol (EtOH) foi administrado nas dosagens de 4 mL/Kg e 8 mL/Kg. A anfetamina e o etanol foram administrados tanto isoladamente quanto simultaneamente (AMPH 3 mg/Kg + EtOH 4 mL/Kg e AMPH 7 mg/Kg + EtOH 8 mL/Kg) para verificar possíveis interações. Para os experimentos funcionais, o DD foi montado sob tensão de 1 grama num banho de órgão isolado. As mudanças de tensão foram registradas em fisiógrafo. Curvas concentração-efeito cumulativas foram realizadas para agonistas adrenérgicos (noradrenalina, dopamina, fenilefrina) e bário e os parâmetros farmacológicos Emax, pD2 e ρ medidos e analisados. Curvas tempo-resposta também foram realizadas para a tiramina, para checar a liberação de noradrenalina endógena. Para avaliar a contração neurogênica ao estímulo Elétrico Transmural (EET) o DD foi montado em banho de órgão isolado entre dois eletrodos. Estímulos de 60 V, 1 ms de duração com freqüências de 0,1 a 20 Hz foram empregados. Para avaliar a participação do íon cálcio, o DD foi despolarizado por 5 minutos com 80mM de KCl na ausência de Ca+2 e na presença de EGTA (10μM) seguido pela adição de uma dose única de CaCl2 (10mM por 10 minutos). Para a dosagem de noradrenalina utilizou-se o detector eletroquímico para a detecção das catecolaminas e o HPLC, Shimadzu, coluna Chromolith RP-18e (Merck) para a separação das mesmas. As concentrações de corticosterona plasmáticas foram quantificadas por radioimunoensaio específico para ratos. Resultados: O grupo tratado com AMPH 3 mg/Kg apresentou uma potencialização da resposta contrátil do DD à noradrenalina, ao bário e ao cálcio, sem alterar a contração neurogênica. Observou-se, ainda, que o conteúdo de catecolaminas foi reduzido. Com o aumento da dosagem do tratamento (AMPH 7 mg/Kg) observou-se apenas uma redução da contração fásica ao EET e do conteúdo de noradrenalina determinado pelo HPLC. O grupo tratado com EtOH 4 mL/Kg apresentou uma diminuição da contratilidade do DD à noradrenalina, fenilefrina e bário, e ao EET, assim como um menor conteúdo de catecolaminas. A resposta ao cálcio não foi alterada. Com o aumento da dosagem (EtOH 8 mL/Kg) a resposta do DD a agonistas adrenérgicos, bário e ao EET não foi alterada. Em contrapartida, tal tratamento deprimiu a resposta tônica das curvas tempo-efeito para o cálcio mostrou uma tendência de aumento do conteúdo neuronal de noradrenalina. O grupo tratado com AMPH 3 mg/Kg + EtOH 4 mL/Kg não apresentou quaisquer alterações nos protocolos experimentais utilizados. Estes dados sugerem que a anfetamina e o etanol poderiam estar atuando de forma antagônica. Utilizando dosagens maiores para este tratamento simultâneo (AMPH 7 mg/Kg + EtOH 8 mL/Kg) observamos nenhuma alteração significativa nos protocolos experimentais testados. No entanto, este tratamento anulou os efeitos individuais do pré-tratamento com cada fármaco no EET e nas curvas tempo-efeito para o cálcio. Os tratamentos com anfetamina (7 mg/Kg) ou etanol (4 mL/Kg e/ou 8 mL/Kg), assim como os tratamentos simultâneos mostraram uma tendência de aumento da concentração plasmática de corticosterona. Conclusões: Desta forma, observamos um efeito antagônico entre a anfetamina e o etanol quando administrados simultaneamente, possivelmente por agir em sítios intracelulares próprios ou competir por estes, quanto aos efeitos na neurotransmissão simpática de animais periadolescentes. / Justification: Because of the few studies that emphasize the in vivo acute treatment with amphetamine and ethanol, and their consequence onnoradrenergic transmission in the smooth muscles of young animals, we decided to study the effect of these drugs on peripheral sympathetic neurotransmission. We use d he vas deferens (VD) of periadolescent rats as a model for the study of sympathetic neurotransmission. Materials and methods: The periadolescent animals were divided into six groups. Amphetamine (AMPH) was administered at doses of 3 mg/kg 7 mg/kg, while ethanol (EtOH) was administered at doses of 4 mL /kg or 8 mL/kg. Amphetamine and ethanol were administered either alone or simultaneously (AMPH 3 mg/kg + EtOH, 4 mL/kg por AMPH 7 mg/kg + EtOH 8 mL/kg) to investigate possible interactions. For functional experiments, the VD was mounted under 1 g tension in isolated organ bath. The contraction was recorded in physiograph. Cumulative concentration-effect curves were made for adrenergic agonists (noradrenaline, dopamine, phenylephrine) and barium. Pharmacological +parameters E max, ripD and ρ were analyzed. Time - response curves were also performed for tyramine, to check the release of endogenous nor adrenaline. To evaluate the neurogenic contraction to electrical field stimulation (EFS) the VD was mounted on the isolated organ bath between two electrodes. Stimuli of 60 V, 1 ms duration at frequencies of 0.1 to 20 Hz were employed To evaluate the role of calciu m the V D was depolarized for 5 minutes with 80 mM KCl in the absence of Ca +2 in the presence of EGTA (10μM) followed by the addition of a single dose of CaCl 2 (10 mM for 10 minutes). For the dosage of noradrenaline we used an electrochemical detector for t he detection of catecholamine in HPLC, Shimadzu, column RP - 18e Chromolith (Merck). Plasma corticosterone concentrations were measured by radioimmunoassay. Results: T he group treated with AMPH 3 mg /kg showed a potentiating of the VD contractile response of noradrenaline, barium and calcium, without chang e of neurogenic contraction . It was noted also that the content of noradrenaline was reduced. With increasing dosage (AMPH 7 mg/ kg) we found only a reduction of phasic contraction to the E FS and the content o f noradrenaline determined by HP LC. The group treated with EtOH 4 mL/ k g showed a decrease in VD contractility to noradrena line , p henylephrine and barium, and EFS , as well as a lower content of catecholamine. The response to calcium was unchanged. Wi th incr easing dosage (EtOH 8 mL /kg) t he response of the agonists and barium, and the EFS was not changed. In contrast, such treatment depressed the tonic response for time - effect curves for calcium showed a tendency for increasing, though not significant ly , the c ontent of noradrenaline. T he group treated with AMPH 3 mg /kg + EtOH, 4 mL/kg did not show any changes in experimental protocols used. These data suggest that amphetamine and ethanol could be acting antagonistically. Using higher doses for this si multaneous treatment (AMPH 7 mg / kg + EtOH 8 mL / kg) we found no alteration in the experimental protocols tested. However, this treatment nullified the effects of each individual drug in the E FS and the time - effect curves for calcium. The treatments with amphetamine ( 7 mg / kg) or ethanol (4 mL / kg and / or 8 mL / kg) XXIV and simul t aneous treatments, did not significantly increase plasma concentrations of corticosterone . Conclusion: We observed a possible antagonism between amphetamine and ethanol when adm inistered simultaneously on peripheral sympathetic neurotransmission of periadolescent animals / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações