Orientador: Iscia Teresinha Lopes Cendes / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-23T06:36:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Gonsales_MarinaCoelho_D.pdf: 5961380 bytes, checksum: 501b9df1659eb15a6a8545ae0943d967 (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: As epilepsias são distúrbios cerebrais caracterizados por uma predisposição persistente para a geração de crises epilépticas, que são interrupções transitórias no funcionamento normal do sistema nervoso. Acredita-se que a maioria das epilepsias relacionadas com idade de inicio precoce possui etiologia presumivelmente genética. Sendo assim, elas representam um grupo para o qual o uso de testes genéticos seria potencialmente benéfico. Os objetivos principais deste trabalho foram: a caracterização das bases moleculares de diferentes formas de epilepsia da infância e da adolescência e a avaliação do potencial dos genes candidatos estudados para a utilização em testes genéticos para fins clínicos. A estratégia empregada foi à triagem de mutações nos seguintes genes: SCN1A, em pacientes com síndromes de Dravet e de Doose; SCL2A1 em pacientes com síndrome de Doose e epilepsias idiopáticas generalizadas (EIGs), especialmente a epilepsia mioclonica juvenil (EMJ); e EFHC1 e GABRA1, em pacientes com EMJ e outras formas comuns de EIGs. A triagem de mutações foi realizada por sequenciamento automático pela técnica de Sanger. As alterações potencialmente deletérias foram investigadas em um grupo controle composto por 100 indivíduos sem epilepsia. O potencial deletério das substituições que resultam em troca do resíduo de aminoácido na proteína codificada foi estimado utilizando-se diferentes algoritmos de predição. As mutações previamente descritas na literatura foram compiladas e analisadas quanto a sua provável localização na proteína e predição de efeito deletério. Analises por Multiplex Ligation-dependent Probe Amplification (MLPA) foram realizadas para a detecção de variações no numero de copias de SCN1A. A analise de mutações no gene SCN1A revelou alterações potencialmente deletérias em 81% dos pacientes com síndrome de Dravet, e em apenas um paciente com síndrome de Doose. Esses dados, juntamente com os resultados das analises de compilação das mutações descritas na literatura, sugerem que o teste genético em SCN1A para fins clínicos seria altamente recomendável em indivíduos com síndrome de Dravet, mas não para os com síndrome de Doose típica. O gene SLC21A não parece estar envolvido na etiologia da síndrome de Doose e das EIGs em nossa casuística. A frequencia de alterações potencialmente deletérias no gene EFHC1 em indivíduos com EMJ foi relativamente baixa, sugerindo que esse gene não seja o principal causador dessa epilepsia, embora possa ser um fator de predisposição. Por fim, o gene GABRA1 não parece conferir predisposição para as EIGs comuns em nossa casuística / Abstract: Epilepsy is a brain disorder characterized by a long lasting predisposition to generate epileptic seizures, which are transient interruptions of normal brain function. Most epilepsies with early onset presumably have a genetic etiology. Thus, they represent a group for which the use of genetic testing would be potentially beneficial. The main goals of this study were to characterize the molecular basis of different forms of epilepsy in childhood and adolescence and to evaluate the potential clinical use of genetic testing in the context of these disorders. To achieve these goals we searched for mutations in the following genes: SCN1A in patients with Dravet and Doose syndromes; SLC2A1 in patients with Doose syndrome and idiopathic generalized epilepsies (IGEs), particularly juvenile myoclonic epilepsy (JME); and EFHC1 and GABRA1 in patients with JME and other common forms of IGEs. Mutation screening was performed by automated Sanger sequencing using capillary electrophoresis. Potentially deleterious nucleotide changes found were subsequently investigated in a control group of 100 individuals without epilepsy. In addition, the deleterious potential of amino acid changes identified was estimated using different prediction algorithms. Mutations previously described in the literature were compiled and analyzed regarding their putative location on the protein and predicted deleterious effect. Furthermore, Multiplex Ligation-dependent Probe Amplification (MLPA) analyzes were performed to detect the presence of copy number variations in SCN1A. Our results showed potentially deleterious variants in SCN1A in 81% of patients with Dravet syndrome, but only in one patient with Doose syndrome. These data, along with the results of the compilation of mutations reported in the literature suggest that genetic testing for SCN1A is clinically relevant in Dravet syndrome, but not in typical Doose syndrome. SLC21A does not seem to be involved in the etiology of Doose syndrome and EIGs in our cohort. The frequency of potentially deleterious changes in EFHC1 in individuals with JME was relatively low, suggesting that this gene is not the main cause of this form of epilepsy, although it may be a predisposing factor. Lastly, GABRA1 does not seem to confer predisposition to common EIGs in our cohort / Doutorado / Fisiopatologia Médica / Doutora em Ciências

Orientador: Eros Antonio de Almeida / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-20T19:20:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 RamirezNunez_WilsonRanu_D.pdf: 1943462 bytes, checksum: 1cb7938d9770774612068d3048db5b0e (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: O esvaziamento gástrico (EG) consiste na transferência ordenada do conteúdo do estômago para o duodeno, Situações patológicas como alterações hemodinâmicas modificam a velocidade do E.G. e função motora do trato gastrointestinal. O infarto do miocárdio determina retarde do E.G. em ratos, possivelmente pelo estresse causado pela ligadura da artéria coronária. O sistema nervoso central (SNC) afeta as funções motora e secretora gastrintestinais, frente a uma situação de estresse existe aumento da retenção gástrica (RG) induzindo o retarde do E.G. O sistema parassimpático pode estar envolvido neste fenômeno. Por outro lado o sistema simpático controla o E.G., interrompendo a motilidade e a secreção, frente a uma situação de estresse como a do infarto do miocárdio o retarde do E.G., pode estar relacionado à atuação desse sistema. O objetivo deste trabalho foi Avaliar complacência gástrica (CG) em ratos submetidos a infarto recente do miocárdio, participação do nervo vago, sistema nervos simpático, efeito da injeção intra-cerebro-ventricular de GABAb e efeito da lesão do núcleo paraventricular no retarde do EG observado no infarto recente do miocárdio em ratos. Utilizados ratos Wistar, machos, entre 220 - 300g, adaptados ás condições do laboratório, divididos em 3 grupos: grupo INF; grupo SH e grupo NA. Infarto realizado por ligadura da artéria coronária descendente anterior esquerda. Animais após cirurgia permaneceram em jejum alimentar recebendo água ad libitum. Vinte e quatro horas após foi avaliado EG de 1,5 ml/100g de peso do animal de uma refeição de prova (RP) salina marcada com fenol vermelho. EG foi avaliado indiretamente, através da determinação da % de retenção gástrica (RG) da RP, 10 min. após administração orogástrica. Resultados mostraram que para o estudo da complacência gástrica não houve diferença significativa de pressão intragástrica entre os três grupos, nos três pontos de medida da pressão intragástrica (PIG) e em complementação as CGs não apresentaram diferenças significativas quando comparados entre si. No estudo da Vagotomia subdiafragmatica houve diferença significativa das RG (%) entre os subgrupos SH+Sh vs SH+Inf, o subgrupo Vgx+Inf apresentou diferença significativa em relação ao subgrupo SH+Inf e não diferiu do subgrupo Vgx+Sh. Para o estudo do efeito da injeção intra-cerebro-ventricular de GABAb houve diferença significativa entre os grupos SH+Sal e SH+Bac e Inf+Sal e Inf+Bac. No estudo da Simpatectomia química, grupo Inf+Sal apresentou diferença significativa quando comparados aos ratos SH+Sal, e grupo Inf+Pra com grupo SH+Sal não apresentaram diferenças significativas. O grupo Inf+Pra e Inf+Sal apresentaram diferença significativa e ratos SH+Pra e SH+Sal apresentaram diferença significativa quando comparados, No estudo da lesão do Núcleo paraventricular houve diferença significativa das RG (%) entre os subgrupos SH+Sh vs SH+Inf, os grupos PVN+Inf e SH+Inf apresentaram diferença significativa. Conclusões: 1) infarto recente do miocárdio não induz modificações no tônus gástrico em ratos, 2) Existe participação do nervo vago no retarde do EG causado pelo infarto recente do miocárdio, 3) Retardo EG mostrado pelos ratos infartados tem participação, pelo menos em parte, dos receptores alpha-1 adrenérgicos do sistema nervos simpático. 4) Existe participação do núcleo paraventricular no retardo do EG induzido pelo infarto recente do miocárdio / Abstract: Gastric emptying (GE) is the orderly transfer of stomach contents into the duodenum, pathological situations as hemodynamic changes modify GE speed and motor function of the gastrointestinal tract. Myocardial infarction determines GE delayed in rats, possibly due to stress caused by coronary artery ligation. Central nervous system (CNS) affects gastrointestinal secretory and motor functions, in a stressful situation there is increased gastric retention (GR) inducing GE delay. Parasympathetic system may be involved in this phenomenon. On the other hand sympathetic nervous system controls GE, disrupting motility and secretion, compared to a stressful situation such as myocardial infarction, GE delay, may be related to performance of this system. The objective of this study was to evaluate gastric compliance (GC) in rats submitted to recent myocardial infarction, involvement of vagus nerve, sympathetic nervous system, intra-cerebro-ventricular of GABAb injectin effect and paraventricular nucleus lesion effect on GE delay observed in recent myocardial infarction in rats. Used male Wistar rats, between 220-300g, adapted to laboratory conditions, divided into three groups: INF, SH and NA groups. Infarction performed by left anterior descending coronary artery ligation. After surgery, animals were fasted receiving water ad libitum. Twenty four hours after was evaluated GE of 1.5ml/100g body weight of a saline test meal (TM) labeled with red phenol. GE was indirectly estimated by determining % of gastric retention (GR) of test meal. 10 min. after orogastric administration. Results showed that gastric compliance study there was no significant difference in intragastric pressure between the three groups, in the three points of measurement of intragastric pressure (IGP) and complementation in GC showed no significant differences when compared with each other. In subdiaphragmatic vagotomy study, significant difference of GR (%) between subgroups SH+Sh vs SH+Inf, subgroup Vgx+Inf significant difference in the subgroup SH+Inf and did not differ in subgroup Vgx+Sh. To study the effect of intracerebroventricular injection of GABAb significant difference between groups SH+Sal vs SH+Bac and Inf+Sal vs Inf+Bac. To study the chemical simpatectomy by prazosin, the Inf+Sal group showed significant difference when compared to SH+Sal rats, and the group Inf+Pra with SH+Sal group showed no significant difference. The group Inf+Pra and Inf+Sal showed significant differences and the rats SH+Pra and SH+Sal showed significant difference when compared, for the study of the lesion of paraventricular nucleus of GR significant difference (%) between subgroups SH+Sh vs SH+Inf, the group PVN+Inf and SH+Inf showed significant difference. Conclusions: 1) recent myocardial infarction does not induce changes in gastric tone in rats, 2) there is involvement of the vagus nerve in GE delay caused by recent myocardial infarction, 3) GE delayed in infracted rats have participation, at least in part, of alpha-1 adrenergic receptors of the sympathetic nervous system, 4) there is participation of the paraventricular nucleus of GE delayed induced by recent myocardial infarction / Doutorado / Ciencias Basicas / Doutor em Clínica Médica