Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2016-09-02T18:25:03Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 898935 bytes, checksum: 76e4100a96f4410f999b0f8c2973b39e (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-02T18:25:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 898935 bytes, checksum: 76e4100a96f4410f999b0f8c2973b39e (MD5) Previous issue date: 2015-03-06 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais / Os vírus que infectam plantas apresentam um genoma pequeno e codificam um número reduzido de proteínas. A limitação do número de proteínas virais é superada pela modulação da expressão de genes na célula hospedeira. O mapeamento das redes de interações entre fatores do patógeno e do hospedeiro tem fornecido respostas importantes para a compreensão dos processos que favorecem a infecção viral. O objetivo deste trabalho foi avaliar a contribuição de duas proteínas do tomateiro, a chaperona citosólica Hsp70 e sua co-chaperona DnaJ (classe 1) no estabelecimento da infecção pelo Pepper yellow mosaic virus (PepYMV). Essas duas proteínas foram identificadas com a expressão induzida em células infectadas pelo PepYMV. A sequencia codificadora da Hsp70 de tomateiro (SlHsp70) foi clonada e sequenciada. A análise in silico mostrou a presença de todos os domínios típicos de uma Hsp70. Alinhamento entre a sequencia da proteína SlHsp70, e as Hsps70 de Arabidopsis thaliana, Nicotiana benthamiana e Nicotiana tabacum mostrou uma alta conservação na sequência de aminoácidos das quatro proteínas alinhadas. A localização subcelular de SlHsp70 em células infectadas pelo PepYMV foi analisada por microscopia confocal. Células sadias e infectadas apresentaram uma localização nuclear e citoplasmática, entretanto em células infectadas foi possível observar a expressão da Hsp70 em estruturas ancoradas a membrana semelhantes a vesículas replicativas induzidas pela proteína viral 6K2. Para avaliar a ocorrência de interação entre SlHsp70 com proteínas virais, e SlDj1 com proteínas virais foi realizado um ensaio de duplo hibrido em leveduras. Não houve a detecção de nenhuma interação entre as proteínas do PepYMV e as proteínas SlHsp70 e SlDj1. Foi detectado a ocorrência de interação entre SlHsp70 e SlDj1. Com o objetivo de avaliar o efeito do silenciamento de SlDj1 na infecção viral, plantas de tomateiro foram transformadas com uma construção que induz o silenciamento de SlDj1 via Agrobacterium tumefaciens. As plantas transformadas silenciadas apresentaram um fenótipo de letalidade e esse fenômeno não permitiu a quantificação do acúmulo do PepYMV em tomateiros transformados. Os resultados deste trabalho sugerem que as proteínas SlHsp70 e SlDj1 favorecem a infecção viral de forma indireta, e que estudos mais detalhados irão formecer informações sobre o envolvimento dessas proteínas no processo de infecção pelo PepYMV. / Viruses are obligate intracellular parasites with a small genome and encode a limited number of proteins. Limitation in the number of viral proteins is overcome by modulating the expression of certain genes in the host cell. Mapping interaction networks between pathogen and host factors has provided important answers to the understanding of the processes that promote viral infection. This study objective is to evaluate the contribution of the tomato proteins chaperone Hsp70 and its co- chaperone DnaJ in infection process with Pepper yellow mosaic virus (PepYMV). These two proteins were investigated due to the modification of gene expression reports of transcripts in infected cells PepYMV. Initially the coding sequence corresponding to the tomato Hsp70 (SlHsp70) was analyzed in silico, the presence of all the domains of a typical Hsp70 was confirmed. Sequence alignment between the protein SlHsp70, and Hsps70 Arabidopsis thaliana, as well as Nicotiana benthamiana and Nicotiana tabacum revealed high conservation in the amino acid sequence alignment of the four proteins. The subcellular localization by confocal scanning microscopy was performed with SlHsp70 and demonstrated a common cytoplasmic and nuclear localization to healthy cells and cells infected by PepYMV. The infected cells showed similar expression of Hsp70 in membrane-anchored structures, similar to replicative vesicles induced by 6K2. Study of protein-protein interaction was performed by two-hybrid assay in yeasts. Due to SlHsp70 chaperone and co-chaperone SlDj1 act together, the interactions between the PepYMV proteins were tested with both the vegetable proteins. There was no detection of any interaction between PepYMV proteins and vegetable proteins, a single interaction was detected between SlHsp70 and SlDj1. Genetic transformation of tomato plants by Agrobacterium tumefaciens was carried out to induce silencing of the gene encoding the protein SlDj1. The silenced plants showed a lethality phenotype, and this phenomenon did not allow the quantification of the PepYMV accumulation in processed tomato. These results suggest that SlHsp70 and SlDj1 proteins promove the viral infection indirectly, and that investigations in the PepYMV replication process can reveal interesting facts about the involvement of these proteins in infection.

Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2014-11-19T12:41:14Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Gabriel Ghizzi Pedra - 2012.pdf: 846283 bytes, checksum: 50d54e15ed4d52a8b35a656c968189e8 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2014-11-20T14:21:35Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Gabriel Ghizzi Pedra - 2012.pdf: 846283 bytes, checksum: 50d54e15ed4d52a8b35a656c968189e8 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-11-20T14:21:35Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Gabriel Ghizzi Pedra - 2012.pdf: 846283 bytes, checksum: 50d54e15ed4d52a8b35a656c968189e8 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2012-08-08 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / The relationships between fig trees and their hosts, as well as other traits, can be determinated by factors that act in response to the environment (ecological) wich are and the historical factors expressed in filogeny (evolutionary). The occurrence of a species in a habitat is the result of the balance between ecological and niche conservation processes. Thus the aim of this study is to investigate if the differences in the occurrence of the fig trees in the available habitats are determinated by historical or current factors. The work was performed in the forestry remnants (capões) in south Pantanal where a survey of the fig trees found was conducted and identified the habitat (hemiepiphyte or non-hemiepiphyte) as well as the species of the hosts. We find that the niches of the fig species were not phylogenetically conserved within the group (genus Ficus) and that the current processes are determining their niche. There was specialization on the species of hosts. We discuss how the fig species coexists the capões of south Pantanal. / A intensidade da relação das figueiras com seus hospedeiros, assim como outros traços, podem ser determinados por fatores que atuam em resposta ao ambiente no qual estão (ecológicos) e fatores históricos que são expressos na filogenia (evolutivos). A ocorrência de uma dada espécie em um habitat é fruto do balanço entre pressões ecológicas e o processo de conservação de nicho. Com isso, o objetivo do nosso estudo é investigar se a diferença na ocorrência das espécies de figueiras entre os habitats disponíveis é determinada por fatores históricos (filogenéticos) ou atuais. O trabalho foi realizado nos capões de mata do Pantanal Sul, onde foi feito o levantamento das figueiras que foram encontradas e identificadas o hábito (hemiepifitico ou não) e a espécie de hospedeiro quando possível. Encontramos que os nichos das espécies não foram conservados filogenéticamente dentro do grupo (gênero Ficus) e que os processos atuais estão determinando seu nicho. Houve uma especialização de todas as espécies por uma única espécie de hospedeiro. Neste trabalho nós discutimos como as espécies de figueiras coexistem nos capões do Pantanal Sul.

Made available in DSpace on 2016-12-08T16:24:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 PGCA10MA080.pdf: 1326677 bytes, checksum: 58057ce0c8eb68eed4a42da002d7ab29 (MD5) Previous issue date: 2010-10-20 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / The trypanosomiasis is enzootic caused by several species of the genus Trypanosoma. It is a hemoflagellate widely distributed and of great veterinary importance, because infects a wide variety of mammals. Trypanosoma evansi is the causative agent of disease popularly known as surra , which has great economic importance in Africa, Asia and South America. These protozoa possess digenetic life cycles. When the parasites move from vector to host they suffer a heat shock. The HSPs are found in several pathogens, where the heat shock is a natural event of their biology. The heat shock response is a homeostatic mechanism that protects cells from the deleterious effects of environmental stress. The HSPs have a key role in intracellular work such as DNA replication, cell division, transcription, translation, functions in membrane transport proteins as well as providing assistance to correct protein folding nascent and unfolded by stress accumulation. This work aimed to amplify the HSP10 gene, to be able, afterwards, to observe its expression in trypanosomatids. Rats Wistar were infected with T. evansi, the parasites were purified, the DNA and RNA extraction was made, beyond the reverse transcriptase, PCR, transformation into E. coli DH5α and sequencing of clones. The bands that corresponded to the size of HSP10 gene were selected for clone. The constructions of the inserts selected were subjected to sequencing to verify the correct construction of the clones. The sequencing analysis showed that the sequence obtained has a homology of 40% corresponding to HSP10 hypothetical T. brucei. This is one of the first papers that attempted to identify a gene family of HSPs in T. evansi, that should be used as a chemotherapeutic target / A tripanossomíase é uma enzootia ocasionada por diversas espécies do gênero Trypanosoma. Este é um hemoflagelado amplamente distribuído e de grande importância veterinária, pois infecta uma grande variedade de mamíferos. O Trypanosoma evansi é o agente causador da doença denominada popularmente como surra, que possui grande importância econômica na África, Ásia e América do Sul. Estes protozoários possuem ciclos de vida digenéticos. Quando os parasitos passam do vetor para o hospedeiro estes acabam sofrendo um choque térmico. As HSPs são encontradas em uma variedade de patógenos, onde o choque térmico é um evento natural de sua biologia. A resposta de choque térmico é um mecanismo homeostático que protege as células dos efeitos deletérios do estresse ambiental. As HSPs possuem um papel fundamental no trabalho intracelular como replicação de DNA, divisão celular, transcrição, tradução, funções nas membranas, transporte de proteínas, além de darem assistência correta ao enovelamento de proteínas nascentes e desenoveladas pelo acúmulo de estresse. Este trabalho teve como intuito amplificar o gene da HSP10, para que seja possível futuramente observar sua expressão nos tripanosomatídeos. Ratos Wistar foram infectados com T. evansi, os parasitos foram purificados, efetuou-se a extração de DNA e RNA, além da transcrição reversa, PCR, transformação em E. coli DH5α e o seqüenciamento dos clones. As bandas que corresponderam ao tamanho do gene HSP10 foram selecionadas para clonagem. As construções dos insertos selecionados foram submetidos ao sequenciamento a fim de verificar a construção correta dos clones. A análise do seqüenciamento demonstrou que a sequência obtida possui uma homologia de 40% correspondente a HSP10 hipotética de T. brucei. Este é um dos primeiros trabalhos que buscam identificar um gene da família das HSPs em T. evansi, que poderá ser usado como alvo quimioterápico

Orientador: Adjair Antônio do Nascimento / Banca: Milton Hissashi Yamamura / Banca: Alessandro Francisco Talamini do Amarante / Banca: Flavio Ruas de Moraes / Banca: Rosemeri de Oliveira Vasconcelos / Resumo: A adequada compreensão dos mecanismos fisiopatológicos das doenças que afetam os animais silvestres contribui positivamente para a melhoria das condições de manutenção desses animais em cativeiro e fornece subsídios para a elaboração de planos de conservação de animais de vida livre. Diversos relatos de Haemonchus contortus em cervídeos de cativeiro e vida livre, bem como a importância desse nematódeo para a ovinocultura, motivaram o presente estudo. Inicialmente, foram determinados valores de normalidade para os parâmetros hematológicos e bioquímicos, bem como testada possível influência do sexo sobre eles. Num segundo momento, os animais foram separados em grupos e infectados experimentalmente. O processo infeccioso foi monitorado por um período de 60 dias, ao final do qual os animais foram submetidos à eutanásia e necropsiados. O processo infeccioso estabelecido, em intensidade parasitária similar à observada em animais de vida livre, não foi capaz de suscitar alterações hematológicas, bioquímicas ou anátomo-patológicas relevantes, tampouco interferir na ingestão de alimentos, sugerindo que, apesar da possibilidade de parasitismo, a infecção por H. contortus, nos níveis deste experimento, não provocam doença clínica nos animais. À luz dos dados morfométricos e parasitológicos, sugere-se uma má adaptação do H. contortus aos veados-catingueiros, apesar da possibilidade de manutenção do parasita nestes animais. / Abstract: The comprehension of the pathophysiological aspects concerning wild animals' diseases contributes favourably to the improvement of captive rearing of these animals, and also to the elaboration of conservation action plans for free-ranging animals. The diverse reports on deer parasitism by Haemonchus contortus and the importance of this nematode for sheep production motivated this research. First, reference values for haematological and biochemical parameters were determined for this species and the gender influence on them was tested. Then, the animals were divided in groups and infected. The infectious process was monitored over a 60 days period, and then the animals were killed and necropsied. The established infection, similar to natural acquired infections, was insufficient to lead to haematological, biochemical or pathological changes or interfere with food uptake. Based on this, despite the possibility of infection, H. contortus did not cause clinical disease in gray-brocket deer. Moreover, the morphometric and parasitological data suggest a maladaptation of H. contortus in this host species. / Doutor