Memoria para optar al título profesional de Ingeniero Agrónomo Mención: Sanidad Vegetal / El estado infectivo (J3) de los nemátodos entomopatógenos (NE) del género Steinernema (Steinernematidae) es la única etapa de vida libre, responsable de localizar a un insecto huésped susceptible y penetrar en su interior a través de las aberturas naturales, dirigirse al hemocele y liberar su bacteria simbionte del género Xenorhabdus (Enterobacteriaceae), la que se multiplica y causa la muerte del insecto huésped en 48 h por septicemia. Para evaluar aspectos del comportamiento de un nemátodo nativo, se hicieron 3 ensayos de laboratorio. En el primero se evaluó el efecto de varias temperaturas (5, 10, 15, 20, 25 y 30ºC), en el segundo se evaluaron suspensiones ajustadas de 10, 20, 40, 80, 120 y 240 J3 y en el tercero se evaluó un sustrato con diferentes contenidos de agua para determinar la susceptibilidad de las larvas del último instar del insecto huésped polilla de la cera, Galleria mellonella L. Además se determinó su progenie (J3 emergidos por larva) y su eficacia de penetración (J3 que penetraron al insecto huésped). La larva fue altamente susceptible a la infección por estos nemátodos, con una mortalidad cercana al 100% a las 48 h en la mayoría de los tratamientos. A 20ºC se obtuvo la máxima emergencia, por lo que esta temperatura resultó ser óptima para la reproducción y desarrollo del aislamiento evaluado. La mortalidad fue afectada por efecto de la concentración. El número de nemátodos que entraron en el hospedero aumentó con la concentración de J3 inoculados. La infectividad del nemátodo fue mayor en un contenido de agua moderado del suelo, cercana a la capacidad de campo. Se concluye que el parasitismo, progenie y eficacia de penetración del aislamiento evaluado de Steinernema sp. son afectados por factores abióticos como la temperatura y el contenido de agua del suelo.

Memoria para optar al título profesional de Ingeniero Agrónomo Mención: Sanidad Vegetal / El estado infectivo (J3) de los nemátodos entomopatógenos (NE) del género Steinernema (Steinernematidae) es la única etapa de vida libre, responsable de localizar a un insecto huésped susceptible y penetrar en su interior a través de las aberturas naturales, dirigirse al hemocele y liberar su bacteria simbionte del género Xenorhabdus (Enterobacteriaceae), la que se multiplica y causa la muerte del insecto huésped en 48 h por septicemia. Para evaluar aspectos del comportamiento de un nemátodo nativo, se hicieron 3 ensayos de laboratorio. En el primero se evaluó el efecto de varias temperaturas (5, 10, 15, 20, 25 y 30ºC), en el segundo se evaluaron suspensiones ajustadas de 10, 20, 40, 80, 120 y 240 J3 y en el tercero se evaluó un sustrato con diferentes contenidos de agua para determinar la susceptibilidad de las larvas del último instar del insecto huésped polilla de la cera, Galleria mellonella L. Además se determinó su progenie (J3 emergidos por larva) y su eficacia de penetración (J3 que penetraron al insecto huésped). La larva fue altamente susceptible a la infección por estos nemátodos, con una mortalidad cercana al 100% a las 48 h en la mayoría de los tratamientos. A 20ºC se obtuvo la máxima emergencia, por lo que esta temperatura resultó ser óptima para la reproducción y desarrollo del aislamiento evaluado. La mortalidad fue afectada por efecto de la concentración. El número de nemátodos que entraron en el hospedero aumentó con la concentración de J3 inoculados. La infectividad del nemátodo fue mayor en un contenido de agua moderado del suelo, cercana a la capacidad de campo. Se concluye que el parasitismo, progenie y eficacia de penetración del aislamiento evaluado de Steinernema sp. son afectados por factores abióticos como la temperatura y el contenido de agua del suelo. / The infection status (J3) of the entomopathogenic nematodes (EPN) of the genus Steinernema (Steinernematidae) is the only free living stage, they are responsible for locating a susceptible insect host and penetrate inside through natural openings, moving toward the hemocoel and release their symbiotic bacteria of the genus Xenorhabdus (Enterobacteriaceae), which multiply and kill the insect host after about 48 hours by septicemia. In order to assess aspects of behavioral of a native nematode, three series of laboratory trials were conducted. In the first, several temperatures were evaluated (5, 10, 15, 20, 25, and 30°C). In the second, adjusted suspensions of 10, 20, 40, 80, 120 and 240 J3 were evaluated. In the third, a substrate was evaluated with various water contents to determine the susceptibility of last instar larvae of the insect host, the wax moth Galleria mellonella L. The nematode progeny (J3 emerged from each larva) and their penetration efficacy (J3 that penetrate into the insect host). The larva was highly susceptible to infection with these nematodes, with a mortality rate approaching 100% within 48 h in most treatments. Maximum emergency occurred at 20°C, so this temperature was optimal for the reproduction and development of the EPN isolate evaluated. Insect mortality was affected by EPN concentration. The number of nematodes that penetrated the host increased with the concentration of J3 inoculated. The infectivity of the nematode was greater in soil with moderate water content, near to the field capacity. In is concluted that parasitism, progeny and penetration efficiency of isolate evaluated of Steinernema sp. were affected by abiotic factors such as the temperature and the amount of water of soil.

Os isolados de nematóides entomopatogênicos provenientes do solo de Monte Negro (RO) receberam o prefixo LPP seguido de um número sequencial. As linhagens de bactérias simbiontes receberam o prefixo MN como referência ao local de isolamento. As culturas dos isolados de nematóides entomopatogênicos LPP foram estabelecidas em nosso laboratório, sendo necessário cultivar também o lepidóptero Galleria mellonella para as infeções visando manter os nematóides em cultura. Os isolados, tanto de nematóides como das bactérias, foram identificados através do sequenciamento de genes ribossômicos (ITS 1 e 2 além do 5.8S para os nematóides e 16S para as bactérias). Análises integradas, abrangendo morfologia (em colaboração com a Dra. Claudia Dolinski e Inês Machado) e análises filogenéticas permitiram a identificação dos nematóides. Essas análises morfomoleculares mostram que as linhagens não podem ser descritas como novas espécies, baseadas apenas no local de isolamento, mas como pertencentes à espécies já descritas e bem caracterizadas. As linhagens de nematóides foram identificadas como pertencentes a duas espécies do gênero Heterorhabditis (Rhabditida): Heterorhabditis baujardi (LPP5, 7, 8, 10 e 11) Heterorhabditis indica (LPP1, 2, 3, 4, 9). A bactéria entomopatogênica simbionte isolada a partir do nematoide Heterorhabditis baujardi linhagem LPP7 foi identificada como pertencente à espécie Photorhabdus luminescens subsp. luminescens linhagem MN7. Análises filogenéticas mostram que há similaridade entre o isolado bacteriano e as outras linhagens já descritas de Photorhabdus luminescens subsp. luminescens. Ao mesmo tempo em que eram isoladas as bactérias simbiontes, ocorreu o isolamento de outra espécie de bactéria forética dos nematóides entomopatogênicos, identificada após sequenciamento parcial do 16S, como pertencentes ao gênero Ochrobactrum. As linhagens isoladas foram denominadas OMN2, OMN3, OMN4. / The entomopathogenic nematodes isolates from Monte Negro (RO) soils received the prefix LPP followed by a sequential number. The strains of bacterial symbionts received the prefix MN as a reference to its isolation site. Cultures of LPP entomopathogenic nematodes were established in our laboratory and the need for suitable hosts were supplied by cultivating the lepidopteran Galleria mellonella. Nematode and bacterial isolates were identified through ribosomal genes (ITS 1 and 2, 5.8S for nematodes and 16S for bacteria) sequencing. Integrated analysis, including morphology (in collaboration with Dr. Claudia Dolinski and Inês Machado) and a phylogenetic approach allowed the identification of nematodes. These morpho-molecular analysis clearly showed that our strains can not be described as new species, solely based on the isolation site critheria. It should be described as belonging to previously described and well characterized species. The nematode strains were identified as belonging to two species of the genus Heterorhabditis (Rhabditida): Heterorhabditis baujardi (LPP5, 7, 8, 10 and 11) Heterorhabditis indica (LPP1, 2, 3, 4, 9). The entomopathogenic bacterial symbiont isolated from the nematode Heterorhabditis baujardi strain LPP7 was identified as belonging to the species Photorhabdus luminescens subsp. luminescens strain MN7. Phylogenetic analysis showed similarities between isolated bacterial strains and other previously described Photorhabdus luminescens subsp. luminescens strains. In paralel work, along with bacterial symbionts isolation, other entomopathogenic nematodes foretic bacteria were isolated and identified after partial sequencing of 16S, as belonging to the genus Ochrobactrum. The isolated strains were named OMN2, OMN3, OMN4.

Os isolados de nematóides entomopatogênicos provenientes do solo de Monte Negro (RO) receberam o prefixo LPP seguido de um número sequencial. As linhagens de bactérias simbiontes receberam o prefixo MN como referência ao local de isolamento. As culturas dos isolados de nematóides entomopatogênicos LPP foram estabelecidas em nosso laboratório, sendo necessário cultivar também o lepidóptero Galleria mellonella para as infeções visando manter os nematóides em cultura. Os isolados, tanto de nematóides como das bactérias, foram identificados através do sequenciamento de genes ribossômicos (ITS 1 e 2 além do 5.8S para os nematóides e 16S para as bactérias). Análises integradas, abrangendo morfologia (em colaboração com a Dra. Claudia Dolinski e Inês Machado) e análises filogenéticas permitiram a identificação dos nematóides. Essas análises morfomoleculares mostram que as linhagens não podem ser descritas como novas espécies, baseadas apenas no local de isolamento, mas como pertencentes à espécies já descritas e bem caracterizadas. As linhagens de nematóides foram identificadas como pertencentes a duas espécies do gênero Heterorhabditis (Rhabditida): Heterorhabditis baujardi (LPP5, 7, 8, 10 e 11) Heterorhabditis indica (LPP1, 2, 3, 4, 9). A bactéria entomopatogênica simbionte isolada a partir do nematoide Heterorhabditis baujardi linhagem LPP7 foi identificada como pertencente à espécie Photorhabdus luminescens subsp. luminescens linhagem MN7. Análises filogenéticas mostram que há similaridade entre o isolado bacteriano e as outras linhagens já descritas de Photorhabdus luminescens subsp. luminescens. Ao mesmo tempo em que eram isoladas as bactérias simbiontes, ocorreu o isolamento de outra espécie de bactéria forética dos nematóides entomopatogênicos, identificada após sequenciamento parcial do 16S, como pertencentes ao gênero Ochrobactrum. As linhagens isoladas foram denominadas OMN2, OMN3, OMN4. / The entomopathogenic nematodes isolates from Monte Negro (RO) soils received the prefix LPP followed by a sequential number. The strains of bacterial symbionts received the prefix MN as a reference to its isolation site. Cultures of LPP entomopathogenic nematodes were established in our laboratory and the need for suitable hosts were supplied by cultivating the lepidopteran Galleria mellonella. Nematode and bacterial isolates were identified through ribosomal genes (ITS 1 and 2, 5.8S for nematodes and 16S for bacteria) sequencing. Integrated analysis, including morphology (in collaboration with Dr. Claudia Dolinski and Inês Machado) and a phylogenetic approach allowed the identification of nematodes. These morpho-molecular analysis clearly showed that our strains can not be described as new species, solely based on the isolation site critheria. It should be described as belonging to previously described and well characterized species. The nematode strains were identified as belonging to two species of the genus Heterorhabditis (Rhabditida): Heterorhabditis baujardi (LPP5, 7, 8, 10 and 11) Heterorhabditis indica (LPP1, 2, 3, 4, 9). The entomopathogenic bacterial symbiont isolated from the nematode Heterorhabditis baujardi strain LPP7 was identified as belonging to the species Photorhabdus luminescens subsp. luminescens strain MN7. Phylogenetic analysis showed similarities between isolated bacterial strains and other previously described Photorhabdus luminescens subsp. luminescens strains. In paralel work, along with bacterial symbionts isolation, other entomopathogenic nematodes foretic bacteria were isolated and identified after partial sequencing of 16S, as belonging to the genus Ochrobactrum. The isolated strains were named OMN2, OMN3, OMN4.