Adaptive immune responses are highlyco-ordinated and rely upon efficient intracellular communication to orchestratecell function. Phosphoinositide 3-kinase (PI3K) signalling is a well-studiedand important positive mediator in T lymphocyte function; however the role for SH2-domaincontaining inositol phosphatase 1 (SHIP-1), a negative regulator of PI3Ksignalling, has not been so thoroughly investigated. The use of knockout mousemodels has given an insight into the role of SHIP-1 in murine T cells, butthese are compromised by loss of function during development which impingesupon mature T cell function and by the loss of non-catalytic functions ofSHIP-1. Recent work has indicated a clear rolefor reactive oxygen species (ROS), specifically hydrogen peroxide (H2O2),in immune cell signalling and functional responses including migration. Howeverlike SHIP-1, the functional roles of ROS are poorly understood in human Tlymphocytes, particularly the mechanisms by which ROS signals to alter Tlymphocyte biology. ROS has been previously shown to activate PI3K, Mitogenactivate protein kinase (MAPK) and Src family tyrosine kinase (SFK) signallingin a number of different cell types. In addition, ROS have been shown to inactivatephosphatase and tensin homology (PTEN), another negative regulator of PI3K, andare postulated to inactive SHIP-1 signalling. A pharmacological approach wasutilised to manipulate the catalytic activity of SHIP-1 and the cellularaccumulation of ROS in primary human T lymphocytes. Remarkably, it wasdetermined that both SHIP-1 activation and inhibition reduced the ligand-mediatedfunctions of human T lymphocytes, including signalling, proliferation, adhesionand migration. Furthermore, H2O2 selectively inhibited directionalmigration to chemokine CXCL11, enhanced F-actin polymerisation and decreasedactin polarisation to CXCL11. H2O2 required SFKsignalling to induce the phosphorylation/catalytic activation of SHIP-1 and todecrease the surface expression of CXCR3, both of which could be mechanismsunderlying the deficiency in migration observed with H2O2.

Le facteur de transcription NF-κB joue un rôle majeur dans lorchestration de nombreux processus biologiques, tels que les réponses immunitaires innée et adaptative, la division cellulaire, lapoptose et le développement. Le NF-κB est activé en réponse à un grand nombre de stimuli, comme les cytokines pro-inflammatoires, les agents viraux et bactériens et la stimulation antigénique des cellules du système immunitaire. Il peut être aussi activé dans des conditions de stress oxydant, par exemple après une exposition à des concentrations physiologiques (de lordre du µM) de peroxyde dhydrogène (H2O2). Au début de ce travail, le mécanisme conduisant à lactivation du NF-κB par le stress oxydant était mal connu et sujet à maintes controverses, ce qui nous a poussé à investiguer cette voie plus avant. Dans une première partie, nous nous sommes attachés à étudier le mécanisme dactivation du NF-κB dans des lymphocytes T soumis à un stress oxydant. Les cellules du système immunitaire sont en effet très sensibles à lenvironnement redox, et sont fréquemment en contact avec des espèces réactives de loxygène libérées par les cellules phagocytaires (monocytes/macrophages et neutrophiles) lors dune réponse inflammatoire. Comme le NF-κB est une protéine cruciale pour le développement et lhoméostasie des lymphocytes T, létude de sa modulation lors dun stress oxydant savère particulièrement importante. Nous avons pu mettre en évidence une activation importante du facteur de transcription lors dun traitement oxydant, ainsi quune dégradation presque compète de linhibiteur IκBα. Létude approfondie du mécanisme menant à cette dégradation a mis au jour un mécanisme dactivation tout à fait inédit, impliquant lactivation du complexe IKK via lintervention de lInositol Phosphatase SHIP-1. Dans cette première partie, nous avons également mis en évidence le rôle crucial de la protéine SHIP-1 dans la protection des lymphocytes T contre lapoptose induite par le stress oxydant, ce qui en fait une protéine clé dans la lhoméostasie des lymphocytes T. Dans un second temps, nous nous sommes intéressés au mécanisme influençant la fixation du NF-κB à lADN. Nous avons pu démontrer le rôle important de la protéine IKKα comme déterminant la fixation du NF-κB aux promoteurs de certains gènes, mettant ainsi au jour un mode daction inconnu pour cette protéine. Ce rôle est dautant plus intéressant quil est spécifique, ce qui pourrait déboucher sur des applications thérapeutiques intéressantes.

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