Le schwannome vestibulaire (SV) est une tumeur bénigne qui se développe aux dépens des cellules de Schwann du nerf vestibulaire. Cette tumeur croît lentement dans le conduit auditif interne puis dans l’angle ponto-cérébelleux. La croissance lente de la tumeur entraîne une altération progressive de la fonction vestibulaire, ce qui a des incidences sur la fonction d’équilibration. Des facteurs individuels tels que l’âge, la pratique d’activité physique ou la préférence visuelle, ainsi que des facteurs liés à la tumeur tels que le statut vestibulaire ou l’origine de la tumeur sur le nerf ont été identifiés comme ayant une influence sur la compensation de la fonction d’équilibration chez les patients présentant un SV et bénéficiant d’une exérèse chirurgicale par voie trans-labyrinthique qui entraîne une désafférentation vestibulaire unilatérale aiguë. Dans la continuité des précédents travaux, les objectifs de cette recherche étaient d’évaluer l’impact de la taille de la tumeur sur la fonction d’équilibration et d’identifier des facteurs psychologiques individuels pouvant influencer la compensation de l’équilibre. Les concepts psychologiques se réfèrent aux modèles d’autorégulation que sont le modèle transactionnel stress-coping (Lazarus et Folkman) et le modèle du Sens Commun (Leventhal) ainsi qu’au modèle de la personnalité « Big Five ». Cette recherche se base sur l’évaluation de quatre-vingt-sept patients atteints d’un SV avec indication de chirurgie. Parmi ces patients, vingt-huit étaient inclus dans un protocole de recherche spécifique. Les patients ont été évalués trois jours avant, huit jours, un mois, trois mois et un an après la chirurgie et ont bénéficié d’une évaluation de posturographie, une vidéonystagmographie et de questionnaires psychologiques (NEO-PI-R (inventaire de personnalité-Révisé) ; IPQ-R (Illness Perception Questionnaire-Revised) ; BRIEF-COPE (inventaire de coping) ; WHOQOL-Bref (World Health Organization Quality of Life-Bref) ; HADS (Hospital Anxiety Depression scale). En conclusion, la taille de la tumeur apparaît comme un facteur déterminant pour les mécanismes centraux de neuro-plasticité et d’adaptation de la compensation posturale mis en place lors de la croissance tumorale. Une amélioration des performances posturales entre les stades I et III et une dégradation entre les stades III et IV sont constatées. La dégradation pourrait être expliquée par un dysfonctionnement vestibulaire central, résultat de la compression des structures nerveuses centrales par la tumeur et pourrait entraîner des modifications dans les processus d’intégration sensorielle. Après la chirurgie, la cinétique des performances posturales correspond à celle mise en évidence lors de précédentes études ; la situation posturale des patients s’améliore progressivement jusqu’à être supérieure un an après la chirurgie mais demeure inférieure à celle d’une population générale, y compris un an après la chirurgie. La qualité de vie physique des patients est altérée par le SV et sa chirurgie. Un an après, les qualités de vie physique et sociale sont inférieures à celles d’une population générale. Il existe des relations entre la qualité de vie physique et psychologique avant la chirurgie et la récupération posturale à court et long terme. Concernant les facteurs psychologiques, la structure de personnalité des patients reste globalement stable. Les affects d’anxiété et de dépressions sont peu présents. En revanche il existe des relations entre ces affects et la récupération posturale à court et long terme. Les facteurs psychologiques ont une influence importante sur la récupération posturale à court et long terme et plus particulièrement la personnalité et les façons de faire face à la situation. Les facettes de personnalité prédictives sont tournées vers la capacité à être centré sur soi et une anxiété peu importante. / The vestibular schwannoma (VS) is a benign tumor arising from Schwann cells of the vestibular nerve. This tumor grows slowly in the internal auditory canal and then into the cerebellopontine angle. The slow growth of the tumor leads to a progressive alteration of the vestibular function that affects the function of equilibration. Balance disorders associated to vestibular schwannoma and its surgery have an impact on daily life of patients and affect their quality of life. Individual factors such as age, physical practices or visual preference and factors related to the tumor such as vestibular status or origin of the tumor in the nerve have been identified as having an influence on the postural compensation in patients presenting VS and benefiting a surgical removal of the tumor that leads to an acute unilateral vestibular deafferentation. In line with previous studies, the objectives of this research were to assess the impact of tumor size on balance control and to identify individual psychological factors influencing postural compensation. Psychological factors identified in this research included the personality structure, illness perceptions and coping strategies. An evaluation of the quality of life of patients and their anxiety and depression affects were also realized. Eighty-seven patients were included in the research. Twenty-eight were included in a special protocol including psychological assessments and were evaluated three days before surgery, eight days, one month, three month and one year after surgery. Each patient performed posturography assessment and a videonystagmography. Posturography tests were performed with the SOT (Sensory Organization Test). Psychological questionnaires included the NEO-PI-R (Revised NEO Personality Inventory), the IPQ-R (Revised Illness Perceptions Questionnaire) and the Brief-COPE (coping inventory), the WHOQOL-Bref (World Health Organization Quality of LIFE short form) and the HADS (Hospital Anxiety and Depression Scale). Statistical analysis aimed to identify relationships between postural performances, quality of life and anxiety and depression affects. It also aimed to highlight psychological predictors’ factors to explain postural performances after surgery. The results of this study could help to provide a more personalized management of balance disorders in patients with vestibular schwannoma.

Contexte : Le schwannome vestibulaire (SV) est une tumeur bénigne de la gaine du nerf vestibulaire. La plupart des SV présentent une inactivation somatique bi-allèlique du gène suppresseur de tumeur NF2. L’inactivation congénitale du gène NF2 est impliquée dans le développement de la Neurofibromatose de type 2, une maladie génétique autosomique dominante prédisposant au développement de tumeurs multiples du système nerveux central et en particulier de schwannomes vestibulaires bilatéraux. Le traitement des schwannomes vestibulaires repose sur la chirurgie ou la radiothérapie délivrée en conditions stéréotaxiques. La réduction de la dose d’irradiation des schwannomes vestibulaires a permis d’améliorer le pronostic fonctionnel auditif tout en garantissant un taux de réponse satisfaisant. Pourtant de nombreux patients présenteront une surdité neurosensorielle progressive. Afin de poursuivre cette réduction de dose d’irradiation, des modèles biologiques fidèles récapitulant le statut d’inactivation du gène NF2 et la surdité neurosensorielle sont nécessaires à l’élaboration d’une approche préclinique.Problématique : Nous avons proposé de développer des systèmes modèles in-vitro et in-vivo compatibles avec l’étude de la radiosensibilité des schwannomes vestibulaires en combinaison avec des thérapies ciblant les voies de signalisation spécifiquement activées par la perte de fonction NF2.Méthodes : Les lignées cellulaires humaines de schwannomes vestibulaires NF2 (HEI_193, HEI_182), et de cellules de Schwann vestibulaire contrôle (HEI_286) ont été cultivées en essai clonogénique afin de déterminer le nombre d’unité formatrices de colonies à doses croissantes d’inhibiteur mTOR (Rapamycine), PI3K (GDC_0941), mTOR et PI3K (BEZ_235) pour déterminer le 50% d’inhibition de croissance (GI50%) puis en combinaison à doses croissantes de radiation gamma (Co60). La lignée cellulaire murine inactivée pour nf2 (SC4#9) a été utilisée pour réaliser des greffes syngéniques orthotopiques. La croissance des tumeurs a été suivie par IRM et bioluminescence et l’audition déterminée par potentiels évoqués auditifs. L’analyse histologique des cochlées a été réalisée par coloration en hématoxyline et éosine puis par fluorescence après clarification cochléaire. Des volumes complets ont été obtenus par microscopie confocale à balayage laser.Résultats : Les essais clonogéniques réalisés en Agarose ont identifié une radiorésistance relative des lignées humaines de schwannomes mutées pour NF2 par comparaison au contrôle humain non muté. Cette résistance identifiée en réponse à l’exposition à une dose unique d’irradiation gamma peut être contournée par l’inhibition de la voie mTOR au moment de l’irradiation restituant une sensibilité comparable au contrôle humain non muté. Une tendance à un bénéfice de l’association d’une inhibition mTOR à un inhibiteur PI3 kinase a été retrouvée à une dose maximum d’irradiation. Un modèle murin de schwannome vestibulaire qui récapitule la croissance dans l’angle ponto-cérébelleux et la perte d’audition a été développé par injection stéréotaxique dans le paquet acoustico faciale. Le suivi de croissance de ce schwannome a été caractérisé par IRM et bio-luminescence in-vivo. Enfin un protocole de clarification cochléaire a été adapté aux mammifères murins pour permettre l’étude histologique de cochlées intactes compatible avec l’étude de l’otoxicité des schwannomes et/ou de leur traitement .Conclusion : Les modèles décrits dans cette thèse permettent l’évaluation pré-clinique de stratégies thérapeutiques combinant thérapie ciblée et irradiation gamma en dose unique. L’amélioration des connaissances des mécanismes participant à l’ototoxicité des schwannomes et de leur traitement permettra d’améliorer le ciblage moléculaire afin de réduire les effets auditifs secondaires de la radiochirurgie. / Context: Vestibular schwannomas (VS) are benign neoplasm arising from the Schwann cells of the vestibular nerve. Most of sporadic VS carry a bi-allelic inactivation of the tumor suppressor gene NF2. Congenital inactivation of the NF2 gene is linked to the onset of Neurofibromatosis type 2 (NF2), a genetic condition predisposing to the development of multiple benign tumor of the central nervous system with bilateral VS as a hallmark. Treatment of VS is either surgical or by use of radiation therapy delivered in stereotactic condition. A significant dose reduction has led to improving the hearing outcomes while maintaining good tumor control. Meanwhile a significant number of treated patients will develop a progressive sensorineural hearing loss (SNHL). Laboratory models that faithfully recapitulate NF2 gene inactivation and SNHL are needed to pursue the reduction of the dose delivered.Aim: We aimed at developing new models in-vitro and in-vivo for the study of vestibular schwannoma radio sensitivity in combination with selected compounds that selectively target the pathways activated secondary to NF2 loss of function.Methodes: Human vestibular schwannoma cell lines (HEI_193, HEI_182) and control human Schwann cell line (HEI_286) were used in clonogenic assay to determine the number of colony forming unit (CFU) spontaneously and at increasing dosing of mTOR inhibitor (Rapamycin), PI3 kinase inhibitor (GDC_0941), PI3K-mTOR dual inhibitor (BEZ_235) to determine the 50% growth inhibitory threshold (GI50%) then in combination with increasing radiation regimen of gamma radiation emitted by a source of Co60. The mouse cell line inactivated for nf2 (SC4#9) was used to generate orthotropic syngrafts. The growth of the tumor was monitored using MRI and bioluminescence imaging and hearing was tested by recording auditory brainstem responses. Pathology of the cochlea were obtained from paraffin embedded sections and then using fluorescence confocal microscopy of whole mounted transparent cochleae.Results: Soft agar clonogenic assays were used and identified a resistance to radiation therapy in human cell lines of VS inactivated for NF2 when compared to the non-mutated control. This radiation resistance could be overcome by pre-exposure to the mTOR inhibitor Rapamycin allowing a return to the radiosensibility of non-mutated control. There was a tendency toward a beneficial effect when using a dual inhibition of the mTOR and PI3 kinase at a maximum dose of exposure to radiation. A mouse model of VS has been developed by stereotactic seeding of nf2 deficient cell line SC4#9 targeting the cochleo-vestibular nerve complex. It recapitulates the growth in the suitable micro-environment and secondary SNHL. The growth has been characterized using MRI and in-vivo bioluminescence imaging. Hearing loss was confirmed using sequential ABR. Last a protocol for the clarification of whole mounted cochleae has been adapted to species of rodents suitable for the pathological study of ototoxic change secondary to VS and/or its treatment.Conclusion: The models presented in this thesis may be used for the preclinical evaluation of combined therapeutic approaches with single dose gamma radiation. A better understanding of the mechanisms involved in ototoxicity secondary to VS and of its treatment would improve the molecular targeting in order to warrant better auditory outcomes.

Objectifs: La pathophysiologie de la maladie de Ménière (MM) demeure mal comprise. Nous avons identifié dans la littérature un groupe de protéines exprimées sur le sac endolymphatique (SEL) et impliquées dans la régulation du volume endolymphatique : l’Aquaporine-2 (AQP2), le récepteur V2R de vasopressine (AVP), le Co-transporteur de Sodium Potassium et Chlorure type 2 (NKCC2) et le canal TRP type V4 (TRPV4). Notre objectif est de déterminer si leur expression sur le SEL est altérée dans la MM, pour améliorer notre compréhension de la physiologie de l’hydrops endolymphatique. Méthodes: Recrutement des cas de MM et schwannomes vestibulaires (SV) comme contrôles, le jour de leurs chirurgies respectives. Prélèvement de biopsies de SEL et sang pour AVP. L’immunohistochimie pour AQP2, V2R, NKCC2 et TRPV4 fut effectuée, et les lames scannées pour analyse digitale de densité d’expression par un logiciel spécialisé (VIS par Visiopharm®). Résultats: Total de 27 cas MM et 23 contrôles. Les scores générés par le logiciel représentent la densité d’expression totale et relative des protéines, exclusivement sur l’épithélium du SEL. Les scores d’AQP2 sont élevés de façon significative dans la MM comparée aux contrôles (p = 0.018). Nous ne rapportons aucune variation significative pour AVP, V2R, NKCC2 et TRPV4. Conclusion: Cette étude originale évalue l’expression simultanée de AQP2, V2R, NKCC2 et TRPV4 sur le SEL dans la MM, avec un groupe contrôle (SV). Nos résultats démontrent une augmentation isolée de l’AQP2 dans la MM. Nous proposons une surexpression constitutive de cette dernière, indépendante de son axe de régulation (AVP-V2R). Une mutation somatique au niveau des séquences régulatrices pourrait justifier nos observations. / Objectives: Endolymphatic sac (ELS) pathophysiology in Ménière’s Disease (MD) remains poorly understood. We identified from the literature a group of proteins expressed on the ELS and involved in endolymph volume regulation: Aquaporin-2 (AQP2), vasopressin receptor V2R, Sodium Potassium Chloride Cotransporter type 2 (NKCC2) and TRP channel type V4 (TRPV4). Our objective was to determine whether their ELS expression was altered in MD, to better understand the pathophysiology of endolymphatic hydrops. Methods: Patients with definite MD undergoing endolymphatic duct blockage surgery were recruited, as well as controls undergoing surgery for vestibular schwannomas (VS). ELS biopsies and blood samples for plasma Arginine Vasopressin (AVP) were obtained. Immunohistochemistry for AQP2, V2R, NKCC2 and TRPV4 was performed. Slides were scanned digitally for highly sensitive pixel density analysis by specialized software (VIS by Visiopharm®). Results: 27 definite MD patients and 23 VS controls were included. Global scores generated by the software represent total and relative protein expression density of 3 staining intensity levels, exclusively on ELS epithelium. AQP2 expression density was significantly elevated in MD compared to VS (p = 0.018). There was no significant difference in plasma AVP, V2R, NKCC2 and TRPV4 expression. Conclusion: This original study evaluates simultaneous in-situ expression of AQP2, V2R, NKCC2 and TRPV4 on the human ELS in MD, with a VS control group. Our results show only AQP2 up regulation on the ELS of MD patients. We suggest a constitutively increased expression of AQP2 in MD, independent of its regulatory axis (AVP-V2R). Acquired regulator sequence mutations could support this model.