Made available in DSpace on 2016-08-15T20:31:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 PatriciaCS_DISSERT.pdf: 1847560 bytes, checksum: 7da5854056af7ddc3546a8a90de2324f (MD5) Previous issue date: 2013-08-30 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The objective of this work, cryopreserve semen from six-banded armadillos, assessing in advance the effects of centrifugation and dilution of their seminal parameters over thermoresistance test (TRT) in order to define the best diluent to be used in semen cryopreservation of this species. Semen samples (n = 12) derived from 04 adult males collected by electroejaculation were divided into four aliquots, two immediately diluted in Tris or powdered coconut water (ACP-119®), and the other centrifuged (800g/10 min) prior to dilution. The samples were incubated at 34°C for 3h and the seminal parameters evaluated at intervals of 1 h. In general, was observed greater efficiency of Tris regard to the preservation of seminal parameters along the TRT, especially up to 120 min of evaluation, but after this period the two extenders were equivalents. Still, the centrifugation caused deleterious effect on semen quality of six-banded armadillos, this method is not suitable for this species. For the cryopreservation of the semen of six banded armadillos, was then diluted in Tris-base, plus 20% egg yolk and 3% glycerol. Following the steps of dilution, the samples semen cooling and thawing was performed classical analysis simultaneously to fluorescence analysis, employing the combination of fluorophores to assess the plasma membrane integrity (Propidium iodide - PI and Hoechst - H-342), and also mitochondrial activity (CMXRos - Mito Tracker red®). Most of the changes observed in all stages of cryopreservation of semen of six-banded armadillos was secondary, but the proportions of these defects increased significantly from step cooling, and higher in step thawing, due to the impacts of heat shock and osmotic stress be more significant in this phase. The results of fluorescence analysis indicated a percentage of cells with intact plasma membrane more higher (8.4%) than that of motile cells (6.1%) on thawed semen. This may be due to the action of egg yolk, to provide greater structural integrity to some cells. In images taken by transmission electron microscopy were identified in sperm cryopreserved rupture and vesiculation of the plasma membrane, mitochondrial abnormalities, as well nuclear and acrosomal changes characterized by changes in chromatin and sperm capacitation, respectively. This study is the first report on the use of cryopreservation on semen xenarthras, and given the importance of biotech to preserve the genetic material of armadillos, the results obtained here are fundamental to promote the improvement of semen cryopreservation in six-banded armadillos, aiming its applications in other species of armadillos endangered or vulnerable to extinction / Objetivou-se com este trabalho, criopreservar o sêmen de tatus-peba, avaliando previamente os efeitos da centrifugação e da diluição sobre seus os parâmetros seminais ao longo do teste de termorresistência (TTR), a fim de definir o melhor diluente a ser utilizado no processo de criopreservação seminal desta espécie. Amostras de sêmen (n=12) oriundas de 04 machos adultos coletados por eletroejaculação foram divididas em quatro alíquotas, sendo duas imediatamente diluídas em Tris ou água de coco em pó (ACP-119®), e as demais centrifugadas (800g/10 min) previamente à diluição. As amostras foram incubadas a 34°C por 3h, e os parâmetros seminais avaliados em intervalos de 1h. Em termos gerais, observou-se uma melhor eficiência do Tris quanto à preservação dos parâmetros seminais ao longo do TTR, principalmente até os 120 min de avaliação, mas após este período, os dois diluentes se equipararam. Ainda, verificou-se efeito deletério da centrifugação sobre a qualidade do sêmen de tatus-peba, não sendo esse método indicado para esta espécie. Para a criopreservação, o sêmen de tatus-peba foi então diluído em solução a base de Tris,acrescidade 20% de gema e 3% de glicerol.Após as etapas de diluição, refrigeração e descongelação, foi realizada a análise clássica das amostras simultânea à análise por fluorescência, empregando a associação de fluoróforos para avaliar a integridade da membrana plasmática (Iodeto de Propídio - PI e Hoechst - H-342), e também a atividade mitocondrial (CMXRos - Mito Tracker red®).A maioria das alterações observadas em todos os estágios da criopreservação do sêmen de tatus-peba foi secundária, mas as proporções desses defeitos aumentaram significativamente a partir da etapa de refrigeração, sendo maior após a descongelação, devido aos impactos do choque térmico e do estresse osmótico serem mais expressivos nessa fase. Os resultados da análise de fluorescência indicaram um percentual de células com a membrana plasmática intacta maior (8,4%) do que o de células móveis (6,1%), em sêmen descongelado.Isto pode ser devido à ação da gema de ovo em permitir maior integridade estrutural a algumas células. Em imagens captadas por eletromicroscopia de transmissão foram identificados, em espermatozoides criopreservados, ruptura e vesiculação da membrana plasmática, anormalidades mitocondriais, como também modificações nucleares e acrossomal caracterizadas por alterações da cromatina e capacitação espermática, respectivamente. Este estudo é o primeiro relato sobre a utilização da criopreservação em sêmen de xenartras, e dada a importância desta biotécnica para a preservação do material genético de tatus, os resultados aqui obtidos são fundamentais para promover o aperfeiçoamento da criopreservação seminal em tatus-peba, visando sua aplicação em outras espécies de tatus ameaçadas ou vulneráveis à extinção