Submitted by Ubirajara Cruz (ubirajara.cruz@gmail.com) on 2017-05-15T16:46:34Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_Stela_Gheller.pdf: 569023 bytes, checksum: a5e2134d6233755fa80a8cad9319a551 (MD5) / Approved for entry into archive by Aline Batista (alinehb.ufpel@gmail.com) on 2017-05-16T16:45:47Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertacao_Stela_Gheller.pdf: 569023 bytes, checksum: a5e2134d6233755fa80a8cad9319a551 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-16T16:45:47Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertacao_Stela_Gheller.pdf: 569023 bytes, checksum: a5e2134d6233755fa80a8cad9319a551 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2015-02-12 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Na refrigeração a sobrevivência da célula espermática é dependente da sua orientação espacial no meio diluidor não devendo essas se aglutinarem e nem sedimentarem. Em diluentes mais sólidos como os suplementados com gelatina, essa disposição pode ser beneficiada, além de ocorrer uma redução na demanda metabólica celular devido a redução da motilidade quando refrigerado. Em decorrência disto, este trabalho teve como objetivo avaliar o efeito da adição de gelatina ao diluente para sêmen ovino acondicionado a 50, através de parâmetros de qualidade seminal realizados por teste in vitro durante um período de até 72hs.. Foram utilizados 8 carneiros, realizando-se 4 coletas de sêmen para cada macho, totalizando 32 ejaculados. Dois diluentes foram utilizados neste estudo, E1 (leite integral 10%, 0,2 g de D-gligose, 50 mg de estreptomicina e 100 ml de água mili Q), e a E2 (E1 acrescido de 1,5% de gelatina). Foram avaliados os parâmetros de motilidade, morfologia espermática, integridade de membrana, DNA e acrossoma durante os períodos de 0, 24, 48 e 72h de armazenado a 5ºC. Durante as primeiras 48 horas de armazenamento, não houve diferença estatística na motilidade entre E1 e E2, no entanto, a E2 nas 72 horas (51,9%) foi mais eficaz (P <0,05) na manutenção dos parâmetros de motilidade do que o E1 (31,1%). A integridade do acrossoma foi semelhante em ambos os extensores a 0, 24 e 48 horas, mas às 72h a E2 foi maior (P <0,05) da qualidade neste parâmetro (E1= 42,9 e E2 = 66,9). As variáveis, integridade de membrana, DNA, e morfologia espermática, não apresentaram diferença entre os tratamentos (P>0,05). Com os resultados encontrados pode-se concluir que a adição de gelatina na concentração de 1,5% ao diluente melhorou a motilidade e integridade do acrossoma em sêmen ovino armazenado por até 72hs, a 5ºC aumentando assim o período de armazenamento das doses em 24 horas, sem perda de qualidade do espermática em testes realizado in vitro. / Under refrigeration, the spermatic cell survivability depends upon its spatial orientation in the extender medium and the agglutination or sedimentation of these cells should not occur. In more solid extenders like the one supplemented with gelatin, the spatial disposition can be improved, and also the metabolic demand is lower by the reduced motility provoked by more solid medium. The main aim of this work was evaluate the qualitative effect provoked by addition of gelatina to the ram semen extender stored at 5ºC. There were used 8 rams being accomplished 4 semen collections for each, totalizing 32 ejaculates. Two extenders were used in this study, E1 (whole milk 10%, 0.2g D-Glugose, 50 mg streptomycin and 100 ml of mili Q water), and the E2 (E1 plus 1.5% of gelatin). There were evaluated motility, cell morphology, DNA, membrane and acrosome integrity, during the period of 0h, 24hs, 48hs, and 72 hours of storage under refrigeration at 5°C. During the first 48hs of storage the spermatic motility remained the same in the E1 and E2, however, at 72hs the E2 (51,9%) was more efficient in the maintenance of the motility parameters (P<0.05) than the E1 (31,1%). The acrosome integrity was similar in both extenders at 0h, 24hs and 48h of storages, but at 72hs the E2 showed the best result (P<0.05) in this parameter (E1=42,9% and E2=66,9%). The viability, morphology and membrane and DNA integrity had not shown statistical difference comparing the treatments (P>0.05). With the results there is possible to conclude that the addition of gelatin to the extender increased the motility and acrosome integrity in ram semen stored at 5ºC, increasing through this the possibility of extending the storage time under refrigeration of the semen doses to more than 24hs.

Made available in DSpace on 2016-08-15T20:31:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 PatriciaCS_DISSERT.pdf: 1847560 bytes, checksum: 7da5854056af7ddc3546a8a90de2324f (MD5) Previous issue date: 2013-08-30 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The objective of this work, cryopreserve semen from six-banded armadillos, assessing in advance the effects of centrifugation and dilution of their seminal parameters over thermoresistance test (TRT) in order to define the best diluent to be used in semen cryopreservation of this species. Semen samples (n = 12) derived from 04 adult males collected by electroejaculation were divided into four aliquots, two immediately diluted in Tris or powdered coconut water (ACP-119®), and the other centrifuged (800g/10 min) prior to dilution. The samples were incubated at 34°C for 3h and the seminal parameters evaluated at intervals of 1 h. In general, was observed greater efficiency of Tris regard to the preservation of seminal parameters along the TRT, especially up to 120 min of evaluation, but after this period the two extenders were equivalents. Still, the centrifugation caused deleterious effect on semen quality of six-banded armadillos, this method is not suitable for this species. For the cryopreservation of the semen of six banded armadillos, was then diluted in Tris-base, plus 20% egg yolk and 3% glycerol. Following the steps of dilution, the samples semen cooling and thawing was performed classical analysis simultaneously to fluorescence analysis, employing the combination of fluorophores to assess the plasma membrane integrity (Propidium iodide - PI and Hoechst - H-342), and also mitochondrial activity (CMXRos - Mito Tracker red®). Most of the changes observed in all stages of cryopreservation of semen of six-banded armadillos was secondary, but the proportions of these defects increased significantly from step cooling, and higher in step thawing, due to the impacts of heat shock and osmotic stress be more significant in this phase. The results of fluorescence analysis indicated a percentage of cells with intact plasma membrane more higher (8.4%) than that of motile cells (6.1%) on thawed semen. This may be due to the action of egg yolk, to provide greater structural integrity to some cells. In images taken by transmission electron microscopy were identified in sperm cryopreserved rupture and vesiculation of the plasma membrane, mitochondrial abnormalities, as well nuclear and acrosomal changes characterized by changes in chromatin and sperm capacitation, respectively. This study is the first report on the use of cryopreservation on semen xenarthras, and given the importance of biotech to preserve the genetic material of armadillos, the results obtained here are fundamental to promote the improvement of semen cryopreservation in six-banded armadillos, aiming its applications in other species of armadillos endangered or vulnerable to extinction / Objetivou-se com este trabalho, criopreservar o sêmen de tatus-peba, avaliando previamente os efeitos da centrifugação e da diluição sobre seus os parâmetros seminais ao longo do teste de termorresistência (TTR), a fim de definir o melhor diluente a ser utilizado no processo de criopreservação seminal desta espécie. Amostras de sêmen (n=12) oriundas de 04 machos adultos coletados por eletroejaculação foram divididas em quatro alíquotas, sendo duas imediatamente diluídas em Tris ou água de coco em pó (ACP-119®), e as demais centrifugadas (800g/10 min) previamente à diluição. As amostras foram incubadas a 34°C por 3h, e os parâmetros seminais avaliados em intervalos de 1h. Em termos gerais, observou-se uma melhor eficiência do Tris quanto à preservação dos parâmetros seminais ao longo do TTR, principalmente até os 120 min de avaliação, mas após este período, os dois diluentes se equipararam. Ainda, verificou-se efeito deletério da centrifugação sobre a qualidade do sêmen de tatus-peba, não sendo esse método indicado para esta espécie. Para a criopreservação, o sêmen de tatus-peba foi então diluído em solução a base de Tris,acrescidade 20% de gema e 3% de glicerol.Após as etapas de diluição, refrigeração e descongelação, foi realizada a análise clássica das amostras simultânea à análise por fluorescência, empregando a associação de fluoróforos para avaliar a integridade da membrana plasmática (Iodeto de Propídio - PI e Hoechst - H-342), e também a atividade mitocondrial (CMXRos - Mito Tracker red®).A maioria das alterações observadas em todos os estágios da criopreservação do sêmen de tatus-peba foi secundária, mas as proporções desses defeitos aumentaram significativamente a partir da etapa de refrigeração, sendo maior após a descongelação, devido aos impactos do choque térmico e do estresse osmótico serem mais expressivos nessa fase. Os resultados da análise de fluorescência indicaram um percentual de células com a membrana plasmática intacta maior (8,4%) do que o de células móveis (6,1%), em sêmen descongelado.Isto pode ser devido à ação da gema de ovo em permitir maior integridade estrutural a algumas células. Em imagens captadas por eletromicroscopia de transmissão foram identificados, em espermatozoides criopreservados, ruptura e vesiculação da membrana plasmática, anormalidades mitocondriais, como também modificações nucleares e acrossomal caracterizadas por alterações da cromatina e capacitação espermática, respectivamente. Este estudo é o primeiro relato sobre a utilização da criopreservação em sêmen de xenartras, e dada a importância desta biotécnica para a preservação do material genético de tatus, os resultados aqui obtidos são fundamentais para promover o aperfeiçoamento da criopreservação seminal em tatus-peba, visando sua aplicação em outras espécies de tatus ameaçadas ou vulneráveis à extinção