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Estudo comparativo de parâmetros elétricos na absorção de substratos Na+/H+-dependentes em epitélio jejunal e ileal de coelho em câmaras de ussing / Comparative study of electric parameters in the substratum absorption Na+/H+-dependentes in epitélio jejunal and ileal de coelho in Chambers of UssingSilva, Eduardo Augusto Torres da January 2002 (has links)
SILVA, Eduardo Augusto Torres da. Estudo comparativo de parâmetros elétricos na absorção de substratos Na+/H+-dependentes em epitélio jejunal e ileal de coelho em câmaras de ussing. 2002. 183 f. Tese (Doutorado em Farmacologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2002. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2012-06-08T12:21:48Z
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Previous issue date: 2002 / Cholera is a disease that became endemic in Brazil Northeastern after the pandemic initiated in Peru in 1991. Choleratoxin causes a potent intestinal secretion effect, resulting in significant loss of hydro-electrolyte balance and hypovolemic lock in patients with cholera. We postulate that the administration of substrates, such as amino acids and di-peptide-based glutamine, may increase intestinal sodium and water absorption, resulting in partial decrease of hydro-electrolyte loss in this disease. The aim of this work is to study the phar-macodinamic of Na+ and/or H+-dependent substrates in the rabbit normal small bowel and in the pre-treated with choleratoxin. The administration of substrates with sodium-dependent absorption could, partially, counterbalance the water and electrolyte losses. Others substrates such as di- and tri-peptides presenting mechanisms of proton-dependent absorption also reveal similar properties. The above facts encouraged the development of this comparative study about the ef-fect of cholera toxin on jejunum and ileum absorptive functions. The proximal jejunum and distal ileum loops were isolated in vivo and injected with 5 ml of cholera toxin (1 mg/ml) in saline (experimental group) or equal volume of saline alone (control group). After 1 hour of toxin incubation, the jejunum and ileum loops were excised, freed of their serosa membrane and opened. The fragments were mounted in perfusion chambers with temperature and oxygen control. The mucosal side was perfused with glucose-free physiological solution (substituted by manitol) and the serosas side by physiological solution with glucose. After stabilization, substrates from 1x10-5 to 1.7x10-3 M were cumulatively added. The electric parameters of short circuit current (icc), transepitelial potential difference (VTE) and transepitelial resistance (RTE) were measured in Ussing chambers be-fore and during the period of substrate addition. It was observed that: 1) the presence of cholera toxin increased significantly those parameters, except for RTE, in ileum fragments; 2) the addition of substrates presenting sodium-dependent absorption onto cholera toxin pre-incubated fragments always provoked an increase of RTE larger than that observed with control fragments. The same oc-curred with VTE, except for reduction of icc; and 3) the di-peptide alanyl-glutamine did not alter the RTE but increased significantly the icc both in normal and pre-incubated preparations. These results indicate a probable link between the transport mechanisms of Na+-dependent substrates and the regulatory mechanisms of the paracellular resistance, phenomena not observed in H+-dependent substrate absorption. / A cólera é uma doença que se tornou endêmica no Nordeste do Brasil após a pandemia iniciada no Peru em 1991. A toxina do Vibrio cholerae (TC) causa potente ação secretória no intestino delgado, podendo levar a desequilíbrio hidro-eletrolítico e choque hipovolêmico nos pacientes com cólera. Postulamos que a administração de substratos, tais como aminoácidos e di-peptídeos à base de glutamina, possa aumentar a absorção de sódio e água no intestino, reduzindo parcialmente as perdas hidro-eletrolíticas na doença. Este trabalho tem como objetivo estudar a farmacodinâmica da absorção de substratos Na+ e/ou H+-dependentes no intestino delgado de coelho normal e naquele pré-tratado com a TC. A administração de substratos com mecanismos de absorção Na+-dependentes pode contrabalançar parcialmente as perdas hídricas e eletrolíticas. Outros substratos, tais como os di- e tri-peptídeos, que apresen-tam mecanismos de absorção próton-dependentes, também possuem propriedades se-melhantes. Estas reflexões nos levaram a estudar os efeitos da toxina de cólera sobre os parâmetros elétricos de dois segmentos intestinais (jejuno e íleo). Alças de jejuno proximal e de íleo distal foram isoladas in vivo e injetadas com 5 ml de toxina de cóle-ra (1 mg/ml) em solução fisiológica (grupo experimental) ou igual volume de solução fisiológica (grupo controle). Após 1 hora de incubação com a toxina, as alças foram retiradas, dissecadas da membrana serosa e abertas. Os fragmentos planos foram mon-tados em câmaras de perfusão com temperatura e oxigenação controladas. O lado mu-coso foi perfundido por solução sem glicose (substituída por manitol), enquanto que o lado seroso por solução glicosada. Após estabilização, foram adicionados cumulativa-mente substratos em concentrações que variam de 1x10-5 a 1,7x10-3 M. Os parâmetros elétricos corrente de curto-circuito (icc), diferença de potencial transepitelial (VTE) e resistência transepitelial (RTE) foram medidos em câmaras de Ussing, antes e durante o período de adição de substratos. Foi observado que: 1) a toxina de cólera aumentou significativamente estes parâmetros, com exceção da RTE, nos fragmentos de íleo; 2) a adição de substratos de absorção Na+-dependentes nos fragmentos pré-incubados com toxina de cólera sempre provocou um aumento da RTE significativamente maior do que aquele observado nos fragmentos controle, o mesmo ocorrendo com relação à VTE, mas com redução da icc; e 3) o di-peptídeo alanil-glutamina não causou alteração na RTE, mas aumentou significativamente a icc tanto nas preparações normais como nas pré-incubadas. Esses resultados indicam uma possível ligação entre os mecanismos de transporte de substratos Na+-dependentes e os mecanismos reguladores da resistência paracelular, fenômeno não observado na absorção do substrato H+-dependente.
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Identificação de resíduos de aminoácidos envolvidos no transporte ativo de açúcares pela permease AGT1 de saccharomyces cerevisiaeTrichez, Debora January 2007 (has links)
Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-graduação em Biotecnologia / Made available in DSpace on 2012-10-23T08:29:44Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Em Saccharomyces cerevisiae, a permease codificada pelo gene AGT1 é responsável pelo transporte ativo de uma série de a-glicosídeos usados em diversas aplicações industriais de leveduras, como panificação, cervejaria, produção de bebidas destiladas e álcool combustível. O transporte destes açúcares para dentro da célula, através de proteínas transportadoras, é o passo inicial para seu metabolismo, e também constitui um fator limitante na fermentação do açúcar. Com o intuito de compreender detalhes moleculares do mecanismo de transporte e contribuir para a otimização do processo fermentativo, no presente trabalho foi analisado os resíduos de aminoácidos da permease Agt1p que poderiam estar envolvidos na ligação do próton e/ou especificidade do substrato. Analisando a estrutura prevista para o transportador Agt1p, identificamos 4 resíduos de aminoácidos carregados em seus segmentos transmembrana (Glu-120, Asp-123, Glu-167 e Arg-504), resíduos que estão significativamente conservados nas mesmas posições em outros genes de transportadores de a-glicosídeos em Saccharomyces, Torulaspora, Kluyveromyces e Candida. Permeases Agt1p mutantes nos resíduos Glu-120, Asp-123 e Arg-504 foram geradas por mutagênese sítio-dirigida, expressadas em uma cepa agt1?, e a funcionalidade das permeases foi testada através do crescimento em maltotriose. A substituição do resíduo Arg-504 pela alanina aboliu completamente a utilização de maltotriose pelas células, enquanto que as permeases mutantes geradas pela substituição do Asp-123 pela glicina ou do Glu-120 pela alanina ocasionaram menores taxas de consumo de maltotriose e menor rendimento de etanol quando comparado ao transportador Agt1p normal, porém não impediram o crescimento em maltotriose. A atividade de transporte da permease Agt1p normal ou dos mutantes derivados também foi avaliada pelo transporte de pNPaG (substrato específico para o transportador Agt1p) e pelo transporte ativo de outros a-glicosídeos (maltose, maltotriose, trealose, sacarose e a-metil glicosídeo). Nesses ensaios, a mutação R504A ocasionou a maior perda na atividade de transporte da permease, tendo em vista que apresentou taxas similares às células sem a permease Agt1p. Em contrapartida, os mutantes E120A e D123G apresentaram atividades de transporte de pNPaG e de co-transporte açúcar-H+ inferiores à observada para o transportador Agt1p normal, condizendo com o perfil de utilização de maltotriose. Apesar das diferentes atividades de transporte encontradas para as permeases construídas, todas essas permeases (normal ou mutantes) quando fusionadas à GFP em sua extremidade C-terminal apresentaram-se normalmente localizadas na membrana plasmática. Portanto, os resultados demonstram o envolvimento dos resíduos mutados no transporte ativo de açúcares realizado pela permease Agt1p, sugerindo a participação dos resíduos Glu-120 e Asp-123 na translocação do próton, e de Arg-504 na ligação do substrato. Porém, estudos ainda são necessários para melhor esclarecer o mecanismo de transporte ativo realizado pela permease Agt1p, o que certamente é de grande relevância para o desenvolvimento de estratégias que permitam a otimização dos processos fermentativos industriais.
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Sistema de informação para o planejamento operacional do transporte coletivo urbano: aplicado a Região Metropolitana do Recifede Barros Araujo, Simone 31 January 2008 (has links)
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Previous issue date: 2008 / Esta dissertação procura investigar como um sistema de informações pode contribuir para o
aperfeiçoamento da gestão do sistema de transporte público de passageiros. A escolha do
tema é justificada pela necessidade de reduzir as deficiências no gerenciamento e operação
visando a melhoria da qualidade do serviço com um menor custo. O objetivo principal é
propor um sistema de informações que atenda as necessidades do planejamento operacional
de um Sistema de Transporte Público de Passageiros STPP alimentado por dados gerados
através de novos métodos e técnicas de pesquisa. O quadro conceitual trata sobre a
importância dos sistemas de informação para o planejamento operacional e sobre como novas
tecnologias estão auxiliando na obtenção automatizada de dados operacionais com rapidez e
confiabilidade. A área de estudo refere-se ao Sistema de Transporte Público de Passageiros da
Região Metropolitana do Recife STPP/RMR, gerenciado pela Empresa Metropolitana de
Transportes Urbanos EMTU/Recife. A metodologia empregada consistiu de uma revisão
bibliográfica sobre o significado das informações para as organizações. Com os
conhecimentos adquiridos foi possível analisar os sistemas de informação implantados na
EMTU/Recife, avaliar a situação atual e propor um novo sistema para suprir as carências de
informação do órgão gestor. A utilização diária do transporte coletivo foi usada como forma
de identificar os problemas enfrentados pelos usuários e que o gestor fiscaliza de forma
amostral. Foi realizada uma pesquisa com a finalidade de se ter um panorama dos métodos
utilizados no planejamento e controle operacional do transporte público de passageiros no
País. A pesquisa constatou que os sistemas de bilhetagem eletrônica estão sendo utilizados
por cerca de 70% das cidades pesquisadas, porém outros sistemas automatizados, ainda estão
começando a serem introduzidos no Brasil. O trabalho conclui sobre a necessidade de
investimento em gestão da informação e em tecnologias que possibilitem um maior e melhor
controle e monitoramento da performance operacional de forma a proporcionar, com um
menor custo, uma maior qualidade do serviço ofertado
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A câmara de compensação tarifária, solução para o financiamento de sistemas de transporte público de passageiros: o caso da Região Metropolitana do RecifeCavalcanti de de Albuquerque Sá Barreto, Angelusa January 2005 (has links)
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Previous issue date: 2005 / O objetivo dessa dissertação é identificar sob o ponto de vista teórico analítico o instrumento
Câmara de Compensação Tarifária no cumprimento dos objetivos para os quais foi criada. A
análise parte da regulamentação incidente no setor de transporte público, descritas por Orrico
Filho, R.; A. Brasileiro; E.C. Martins; J. Aragão (1996), Cordeiro, D.M., (1992), Alvarado,
L.; Contreras-Montoya, C.; Orrico Filho, R.D. (1996), e outros. Sob essa perspectiva, o
objetivo geral dessa dissertação é analisar a ferramenta Câmara de Compensação Tarifária em
seus aspectos eficiência e eficácia em sistemas de transporte metropolitanos, aplicado à
experiência de Recife, dando uma contribuição para o seu aperfeiçoamento. Foi necessário
definir uma ferramenta de análise adequada ao tema proposto que possibilitasse uma
visualização gráfica dos indicadores selecionados e aplicada na avaliação da CCT. A
ferramenta de análise baseou-se no método Controle Estatístico do Processo (CEP),
utilizando-se as cartas de controle para auxiliar a análise dos processos e eventos ocorridos ao
longo do período estudado. A aplicação dos gráficos de controle como uma ferramenta
auxiliar foi utilizada como plataforma de análise nesse estudo como um método de
diagnóstico. Os resultados confirmam empiricamente a eficácia da Câmara de Compensação
Tarifária como instrumento de gestão de sistemas de transporte público
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Influencia de la modificación del metabolismo del carbono y del nitrógeno sobre la regulación del influjo del ión NH4+ y la expresión del gen CitAMT1 en plantas de cítricosCamañes Querol, Gemma 09 July 2007 (has links)
En este trabajo se ha estudiado cuál es el punto común que regula el metabolismo del C y del N y como afectan ambos, sobre la regulación del influjo del ión NH4+ y la expresión del gen CitAMT1 en plantas de cítricos (Citrus sinensis L. Osbeck x Poncirus trifoliata blanco). Se ha aislado y caracterizado, por primera vez, los genes CitAMT1 y CitNRT2, los cuales están implicados mayoritariamente en el transporte, mediado por el HATS, de los iones NH4+ y NO3-, respectivamente. Se ha encontrado que el nexo de unión entre el metabolismo del N y el metabolismo del C, en plantas de cítricos, es la variación en la síntesis de sacarosa y su transporte a las raíces a través de la regulación de la fotosíntesis. La sacarosa regula de manera específica la expresión del gen CitAMT1 y el influjo del ión NH4+ en las raíces. Por otra parte, las plantas de cítricos prefieren absorben NH4+ frente a NO3- independientemente de la concentración y relación de N disponible. El influjo del ión NH4+ y la expresión del gen CitAMT1 se de-reprimen y de-inducen, por diferentes mecanismos que implican tanto regulación a nivel transcripcional como postranscripcional, en función del tiempo de carencia de N y se inducen y reprimen en función de la fuente de N disponible y de su concentración. Por último, parece ser que la regulación del influjo del ión NH4+, mediado por el LATS, no está sometida a los cambios en el metabolismo del C y del N.
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Ação do IGF-1 sobre o tratamento do ácido α-metilaminoisobutírico ([14C]MeAIB) e a produção de 17ß-estradiol em células do cumulus oophorus humanas cultivadas in vitro e estimuladas pelo FSHArruda, Leticia Schmidt January 2015 (has links)
O oócito e as células do cumulus apresentam uma comunicação bi-direcional através de projeções que atravessam a zona pelúcida, sendo fundamental no transporte de aminoácidos para o crescimento e maturação oocitária. O oócito regula diversas funções das células do cumulus que o rodeiam e é o responsável por mantê-las diferenciadas das demais. Desta forma, estas células têm se mostrado de grande utilidade para pesquisa, pois podem manter o estado menos indiferenciado in vitro, semelhantes às fases iniciais de desenvolvimento folicular e, portanto, ideais para estudos que visam entender melhor o processo de diferenciação celular durante a foliculogênese, bem como as interações hormonais que ocorrem neste período. Diversos trabalhos têm sugerido a ação sinérgica do FSH e do IGF-1 na esteroidogênese, através da estimulação das mesmas vias metabólicas, porém com grande variabilidade dos resultados entre as espécies. Neste trabalho, as células do cumulus foram coletadas durante o procedimento de FIV na Clínica Proser, e posteriormente cultivadas em meio DMEM modificado, na concentração final de 5x104 células/poço. Para ambos experimentos as células foram cultivadas em incubadora por 24h antes dos tratamentos específicos de cada grupo. Para o transporte de [14C]MeAIB foram feitos 3 grupos: 1) grupo controle; 2) grupo FSH; 3) grupo IGF-1+FSH. Todos os grupos foram cultivados por 24h em meio DMEM, sendo acrescido 25ng/mL de IGF-1 ao grupo IGF-1+FSH. Posteriormente, as células foram incubadas à 37ºC por 45 min em meio HBSS acrescido de 0,2 μCi/mL de [14C]MeAIB por amostra. Foi adicionado ao meio de incubação 75 mIU/ml de FSH nos grupos FSH e IGF-1+FSH. A reação foi encerrada com colocação das placas em gelo e o meio foi retirado da placa e congelado. As células foram lavadas com HBSS à 4ºC e 0,5 mL/poço de água foi adicionado antes de serem congeladas à -20°C. Para a contagem do radioativo, as células foram descongeladas, sonicadas e centrifugadas à 800g por 10min. Alíquotas de 100 μL foram retiradas de todas as amostras (meio interno e externo) e colocadas em 1,5mL de liquido de cintilação para a mensuração da radioatividade em espectrômetro de cintilação líquida LKB beta modelo 1215. A dosagem de proteína das amostras foi realizada segundo o método de Lowry. Os resultados foram expressos pela relação entre radioatividade das células e a radioatividade do meio de incubação. Para a dosagem de 17ß-estradiol as células foram cultivadas nas mesmas condições conforme o experimento anterior. Após 24 horas de cultivo, as células foram divididas em quatro grupos: 1)grupo controle: somente o meio de cultivo; 2) grupo FSH: foi adicionado 75mUI de FSH ao meio; 3) grupo IGF-1: foi adicionado na concentração de 25ng IGF-1/mL ao meio; 4) grupo FSH+IGF-1: foi adicionado FSH (75mUI/mL) e IGF-1 (25ng/mL) ao meio. Ao final de 24h de cultivo, o meio foi congelado à -20ºC. O meio foi diluído na proporção 1:10 no meio tampão do kit. Posteriormente, a mensuração do 17ß-estradiol foi feita por Elisa, utilizando-se o kit comercial 17ß-estradiol EIA kit. Foram utilizados os seguintes itens para correlação com os parâmetros experimentais: a idade e o número de oócitos MII que foram submetidos à ICSI. Para a análise estatística foram feitos os testes: ANOVA de uma via seguido de pósteste de Bonferroni, Shapiro-Wilk para avaliação da distribuição dos dados, Kruskal-Wallis e coefeciente de correlação de Pearson’s. As diferenças foram consideradas significativas quando P<0,05. Foi encontrado uma forte correlação negativa entre o número de oócitos MII e o transporte de [14C]MeAIB (n=5; P=0,03). Não foi encontrado correlação entre o transporte de [14C]MeAIB com a idade das pacientes, sendo o valore de P> 0,05. A incubação com FSH (75 mUI/mL) e o cultivo com IGF-1 (25ng/mL) durante 24h não estimularam o transporte de [14C]MeAIB nas células do cumulus humanas (n=5; P=0,620). O cultivo com a adição de FSH, IGF-1 ou ambos por 24h não aumentou a secreção de 17ß-estradiol (pg/mL) no meio de cultura, comparado ao grupo controle (n= 7; P = 0,855). Em relação à concentração de 17ßestradiol nas células do cumulus não tratadas, não foi encontrado nenhuma correlação entre os parâmetros avaliados de idade e número de oócitos MII (n=7) P> 0,05. Podemos concluir que o sistema A de transporte de aminoácidos está presente em células do cumulus humanas, sendo que a taxa basal é inversamente proporcional ao número de oócitos MII coletados. Provavelmente, o IGF-1 não ocasiona um aumento direto na expressão do FSHR, uma vez que quando adicionado ao meio de cutivo não estimulou os parâmetros analizados comparados aos grupos com somente FSH. Além disso, quando adicionado IGF-1 sozinho ao meio de cultura das células do cumulus, nenhuma alteração na produção de 17ß-estradiol foi observada, sugerindo que o IGF-1 não tenha um efeito direto na esteroidogênese destas células. Portanto, embora existam diversos trabalhos que tem auxiliado na compreensão da interação entre o IGF-1 e o FSH na diferenciação celular durante a foliculogênese, ainda faltam pontos cruciais neste processo em células humanas. Da mesma forma, são necessários mais estudos que caracterizem as células do cumulus, bem como a sua interação com o oócito, para que possamos aplicar estes conhecimentos com a finalidade de melhorar as taxas de MIV oocitária. / Oocyte and the cumulus cells have a bi-directional communication through projections that cross the zona pellucida, being fundamental for the transport of amino acids necessary for gamete growth and maturation. Oocyte plays a dominant role in establishing the heterogeneity of the granulosa cells found in preovulatory follicles by preventing the differentiation of the cumulus granulosa cells. Thus, culturing cumulus cells from preovulatory follicles is a suitable approach to study granulosa cell differentiation as well as the hormonal interactions that occur in folliculogenesis. Several studies have suggested the synergic action of FSH and IGF-1 in steroidogenesis, through the stimulation of the same metabolic pathways, but with great variability of results among species. We evaluate the basal transport and the transport stimulated by FSH [14C]MeAIB in human cumulus cells, observing whether the addition of IGF-I to the culture medium alters this parameter. Cumulus cells were collected during the IVF procedures at Proser Assisted Reproduction Center, and cultured in modified DMEM, at a final concentration of 5x104 cells/well. For both experiments, cells were cultured in an incubator for 24h before the specific treatment of each experimental group. For the transport of [14C]MeAIB 3 groups were made: 1) control group; 2) FSH group; 3) IGF-1 + FSH group. All groups were further cultured for 24h. Twenty five mg/mL of IGF-1 were added to the to the culture medium of the IGF-1 + FSH group. Cells were incubated at 37°C for 45 min in HBSS medium plus 0,2 μCi/mL of [14C] MeAIB per sample, wherein FSH and FSH + IGF-1 groups had 75 mIU/mL of FSH added to the incubation medium. The reaction was terminated by placing the plates on ice and the medium was removed from the plate and freezed. Cells were washed with HBSS at 4°C and 0.5 mL/well of water were added before being frozen at -20°C. For radioactive counting, cells were thawed, sonicated and centrifuged at 800g for 10min. Aliquots of 100 uL were taken from all samples (internal and external medium) and placed in 1.5 mL of scintillation liquid for measurement of radioactivity in a liquid scintillation spectrometer LKB beta 1215 model. Protein dosage of the samples was performed according to the method of Lowry. Results were expressed by the ratio between the radioactivity of cells and the radioactivity of the incubation medium. For the 17ß-estradiol dosage, cells were cultured under the same conditions as the previous experiment. After 24 hours of culture, the cells were divided into four groups: control group = only the culture medium; FSH group = it was added 75mUI of FSH to the medium; IGF-1 group = it was added IGF-1 at a concentration of 25ng/mL to the medium; FSH + IGF-1 group = it was added FSH (75mUI/mL) and IGF-1 (25ng/mL) to the medium. After of 24 hours of cultivation, the medium was frozen at -20°C. The medium was diluted in a 1:10 ratio in the kit buffer medium. Afterwards, measurement of 17ß-estradiol was made by ELISA using a 17ß-estradiol EIA commercial kit. The following items were used for correlation with the experimental parameters: the age of the patients and the number of MII oocytes that underwent ICSI. For statistical analysis two tests were used: One-way ANOVA followed by Bonferroni post-test, Shapiro-Wilk for evaluation of data distribution, Kruskal-Wallis and Pearson's correlation coefficient. Differences were considered significant when P <0.05. A strong negative correlation was found between the number of MII oocytes and the transport of [14C]MeAIB (n = 5; p = 0.03). No correlation was observed between the transport of [14C]MeAIB and the age of patients (P>0.05). The incubation with FSH (75 mIU/mL) and the cultivation with IGF-1 (25ng/mL) for 24 hours did not stimulate the transport of [14C]MeAIB in human cumulus cells (n = 5; P = 0.620). The culture with the addition of FSH, IGF-1, or both for 24 hours did not increase the secretion of 17ß-estradiol (pg/mL) in the culture medium compared to the control group (n = 7; P = 0.855). Regarding the 17ß-estradiol concentration in the untreated cumulus cells, it was not found any correlation between the evaluated parameters of age and number of MII oocytes (n = 7) P>0.05. We conclude that the A system amino acid transport is present in human cumulus cells, and that the basal rate is inversely proportional to the number of MII collected oocytes. Probably, IGF-1 does not cause a direct increase in FSHR expression, once when added to the culture medium it did not stimulate the parameters analyzed compared to the groups with FSH alone. Moreover, when IGF-1 is added alone to the culture medium of cumulus cells, no change in 17ß-estradiol production was observed, suggesting that IGF-1 has not a direct effect on these cells steroidogenesis. Therefore, although there are several studies that have assisted in understanding the interaction between IGF-1 and FSH in cell differentiation during folliculogenesis, there are still crucial unknown points in this process in human cells. Likewise, more studies are needed to characterize the cumulus cells, as well as their interaction with the oocyte, so we can apply this knowledge to improve oocyte IVM rates.
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Ação do IGF-1 sobre o tratamento do ácido α-metilaminoisobutírico ([14C]MeAIB) e a produção de 17ß-estradiol em células do cumulus oophorus humanas cultivadas in vitro e estimuladas pelo FSHArruda, Leticia Schmidt January 2015 (has links)
O oócito e as células do cumulus apresentam uma comunicação bi-direcional através de projeções que atravessam a zona pelúcida, sendo fundamental no transporte de aminoácidos para o crescimento e maturação oocitária. O oócito regula diversas funções das células do cumulus que o rodeiam e é o responsável por mantê-las diferenciadas das demais. Desta forma, estas células têm se mostrado de grande utilidade para pesquisa, pois podem manter o estado menos indiferenciado in vitro, semelhantes às fases iniciais de desenvolvimento folicular e, portanto, ideais para estudos que visam entender melhor o processo de diferenciação celular durante a foliculogênese, bem como as interações hormonais que ocorrem neste período. Diversos trabalhos têm sugerido a ação sinérgica do FSH e do IGF-1 na esteroidogênese, através da estimulação das mesmas vias metabólicas, porém com grande variabilidade dos resultados entre as espécies. Neste trabalho, as células do cumulus foram coletadas durante o procedimento de FIV na Clínica Proser, e posteriormente cultivadas em meio DMEM modificado, na concentração final de 5x104 células/poço. Para ambos experimentos as células foram cultivadas em incubadora por 24h antes dos tratamentos específicos de cada grupo. Para o transporte de [14C]MeAIB foram feitos 3 grupos: 1) grupo controle; 2) grupo FSH; 3) grupo IGF-1+FSH. Todos os grupos foram cultivados por 24h em meio DMEM, sendo acrescido 25ng/mL de IGF-1 ao grupo IGF-1+FSH. Posteriormente, as células foram incubadas à 37ºC por 45 min em meio HBSS acrescido de 0,2 μCi/mL de [14C]MeAIB por amostra. Foi adicionado ao meio de incubação 75 mIU/ml de FSH nos grupos FSH e IGF-1+FSH. A reação foi encerrada com colocação das placas em gelo e o meio foi retirado da placa e congelado. As células foram lavadas com HBSS à 4ºC e 0,5 mL/poço de água foi adicionado antes de serem congeladas à -20°C. Para a contagem do radioativo, as células foram descongeladas, sonicadas e centrifugadas à 800g por 10min. Alíquotas de 100 μL foram retiradas de todas as amostras (meio interno e externo) e colocadas em 1,5mL de liquido de cintilação para a mensuração da radioatividade em espectrômetro de cintilação líquida LKB beta modelo 1215. A dosagem de proteína das amostras foi realizada segundo o método de Lowry. Os resultados foram expressos pela relação entre radioatividade das células e a radioatividade do meio de incubação. Para a dosagem de 17ß-estradiol as células foram cultivadas nas mesmas condições conforme o experimento anterior. Após 24 horas de cultivo, as células foram divididas em quatro grupos: 1)grupo controle: somente o meio de cultivo; 2) grupo FSH: foi adicionado 75mUI de FSH ao meio; 3) grupo IGF-1: foi adicionado na concentração de 25ng IGF-1/mL ao meio; 4) grupo FSH+IGF-1: foi adicionado FSH (75mUI/mL) e IGF-1 (25ng/mL) ao meio. Ao final de 24h de cultivo, o meio foi congelado à -20ºC. O meio foi diluído na proporção 1:10 no meio tampão do kit. Posteriormente, a mensuração do 17ß-estradiol foi feita por Elisa, utilizando-se o kit comercial 17ß-estradiol EIA kit. Foram utilizados os seguintes itens para correlação com os parâmetros experimentais: a idade e o número de oócitos MII que foram submetidos à ICSI. Para a análise estatística foram feitos os testes: ANOVA de uma via seguido de pósteste de Bonferroni, Shapiro-Wilk para avaliação da distribuição dos dados, Kruskal-Wallis e coefeciente de correlação de Pearson’s. As diferenças foram consideradas significativas quando P<0,05. Foi encontrado uma forte correlação negativa entre o número de oócitos MII e o transporte de [14C]MeAIB (n=5; P=0,03). Não foi encontrado correlação entre o transporte de [14C]MeAIB com a idade das pacientes, sendo o valore de P> 0,05. A incubação com FSH (75 mUI/mL) e o cultivo com IGF-1 (25ng/mL) durante 24h não estimularam o transporte de [14C]MeAIB nas células do cumulus humanas (n=5; P=0,620). O cultivo com a adição de FSH, IGF-1 ou ambos por 24h não aumentou a secreção de 17ß-estradiol (pg/mL) no meio de cultura, comparado ao grupo controle (n= 7; P = 0,855). Em relação à concentração de 17ßestradiol nas células do cumulus não tratadas, não foi encontrado nenhuma correlação entre os parâmetros avaliados de idade e número de oócitos MII (n=7) P> 0,05. Podemos concluir que o sistema A de transporte de aminoácidos está presente em células do cumulus humanas, sendo que a taxa basal é inversamente proporcional ao número de oócitos MII coletados. Provavelmente, o IGF-1 não ocasiona um aumento direto na expressão do FSHR, uma vez que quando adicionado ao meio de cutivo não estimulou os parâmetros analizados comparados aos grupos com somente FSH. Além disso, quando adicionado IGF-1 sozinho ao meio de cultura das células do cumulus, nenhuma alteração na produção de 17ß-estradiol foi observada, sugerindo que o IGF-1 não tenha um efeito direto na esteroidogênese destas células. Portanto, embora existam diversos trabalhos que tem auxiliado na compreensão da interação entre o IGF-1 e o FSH na diferenciação celular durante a foliculogênese, ainda faltam pontos cruciais neste processo em células humanas. Da mesma forma, são necessários mais estudos que caracterizem as células do cumulus, bem como a sua interação com o oócito, para que possamos aplicar estes conhecimentos com a finalidade de melhorar as taxas de MIV oocitária. / Oocyte and the cumulus cells have a bi-directional communication through projections that cross the zona pellucida, being fundamental for the transport of amino acids necessary for gamete growth and maturation. Oocyte plays a dominant role in establishing the heterogeneity of the granulosa cells found in preovulatory follicles by preventing the differentiation of the cumulus granulosa cells. Thus, culturing cumulus cells from preovulatory follicles is a suitable approach to study granulosa cell differentiation as well as the hormonal interactions that occur in folliculogenesis. Several studies have suggested the synergic action of FSH and IGF-1 in steroidogenesis, through the stimulation of the same metabolic pathways, but with great variability of results among species. We evaluate the basal transport and the transport stimulated by FSH [14C]MeAIB in human cumulus cells, observing whether the addition of IGF-I to the culture medium alters this parameter. Cumulus cells were collected during the IVF procedures at Proser Assisted Reproduction Center, and cultured in modified DMEM, at a final concentration of 5x104 cells/well. For both experiments, cells were cultured in an incubator for 24h before the specific treatment of each experimental group. For the transport of [14C]MeAIB 3 groups were made: 1) control group; 2) FSH group; 3) IGF-1 + FSH group. All groups were further cultured for 24h. Twenty five mg/mL of IGF-1 were added to the to the culture medium of the IGF-1 + FSH group. Cells were incubated at 37°C for 45 min in HBSS medium plus 0,2 μCi/mL of [14C] MeAIB per sample, wherein FSH and FSH + IGF-1 groups had 75 mIU/mL of FSH added to the incubation medium. The reaction was terminated by placing the plates on ice and the medium was removed from the plate and freezed. Cells were washed with HBSS at 4°C and 0.5 mL/well of water were added before being frozen at -20°C. For radioactive counting, cells were thawed, sonicated and centrifuged at 800g for 10min. Aliquots of 100 uL were taken from all samples (internal and external medium) and placed in 1.5 mL of scintillation liquid for measurement of radioactivity in a liquid scintillation spectrometer LKB beta 1215 model. Protein dosage of the samples was performed according to the method of Lowry. Results were expressed by the ratio between the radioactivity of cells and the radioactivity of the incubation medium. For the 17ß-estradiol dosage, cells were cultured under the same conditions as the previous experiment. After 24 hours of culture, the cells were divided into four groups: control group = only the culture medium; FSH group = it was added 75mUI of FSH to the medium; IGF-1 group = it was added IGF-1 at a concentration of 25ng/mL to the medium; FSH + IGF-1 group = it was added FSH (75mUI/mL) and IGF-1 (25ng/mL) to the medium. After of 24 hours of cultivation, the medium was frozen at -20°C. The medium was diluted in a 1:10 ratio in the kit buffer medium. Afterwards, measurement of 17ß-estradiol was made by ELISA using a 17ß-estradiol EIA commercial kit. The following items were used for correlation with the experimental parameters: the age of the patients and the number of MII oocytes that underwent ICSI. For statistical analysis two tests were used: One-way ANOVA followed by Bonferroni post-test, Shapiro-Wilk for evaluation of data distribution, Kruskal-Wallis and Pearson's correlation coefficient. Differences were considered significant when P <0.05. A strong negative correlation was found between the number of MII oocytes and the transport of [14C]MeAIB (n = 5; p = 0.03). No correlation was observed between the transport of [14C]MeAIB and the age of patients (P>0.05). The incubation with FSH (75 mIU/mL) and the cultivation with IGF-1 (25ng/mL) for 24 hours did not stimulate the transport of [14C]MeAIB in human cumulus cells (n = 5; P = 0.620). The culture with the addition of FSH, IGF-1, or both for 24 hours did not increase the secretion of 17ß-estradiol (pg/mL) in the culture medium compared to the control group (n = 7; P = 0.855). Regarding the 17ß-estradiol concentration in the untreated cumulus cells, it was not found any correlation between the evaluated parameters of age and number of MII oocytes (n = 7) P>0.05. We conclude that the A system amino acid transport is present in human cumulus cells, and that the basal rate is inversely proportional to the number of MII collected oocytes. Probably, IGF-1 does not cause a direct increase in FSHR expression, once when added to the culture medium it did not stimulate the parameters analyzed compared to the groups with FSH alone. Moreover, when IGF-1 is added alone to the culture medium of cumulus cells, no change in 17ß-estradiol production was observed, suggesting that IGF-1 has not a direct effect on these cells steroidogenesis. Therefore, although there are several studies that have assisted in understanding the interaction between IGF-1 and FSH in cell differentiation during folliculogenesis, there are still crucial unknown points in this process in human cells. Likewise, more studies are needed to characterize the cumulus cells, as well as their interaction with the oocyte, so we can apply this knowledge to improve oocyte IVM rates.
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Ação do IGF-1 sobre o tratamento do ácido α-metilaminoisobutírico ([14C]MeAIB) e a produção de 17ß-estradiol em células do cumulus oophorus humanas cultivadas in vitro e estimuladas pelo FSHArruda, Leticia Schmidt January 2015 (has links)
O oócito e as células do cumulus apresentam uma comunicação bi-direcional através de projeções que atravessam a zona pelúcida, sendo fundamental no transporte de aminoácidos para o crescimento e maturação oocitária. O oócito regula diversas funções das células do cumulus que o rodeiam e é o responsável por mantê-las diferenciadas das demais. Desta forma, estas células têm se mostrado de grande utilidade para pesquisa, pois podem manter o estado menos indiferenciado in vitro, semelhantes às fases iniciais de desenvolvimento folicular e, portanto, ideais para estudos que visam entender melhor o processo de diferenciação celular durante a foliculogênese, bem como as interações hormonais que ocorrem neste período. Diversos trabalhos têm sugerido a ação sinérgica do FSH e do IGF-1 na esteroidogênese, através da estimulação das mesmas vias metabólicas, porém com grande variabilidade dos resultados entre as espécies. Neste trabalho, as células do cumulus foram coletadas durante o procedimento de FIV na Clínica Proser, e posteriormente cultivadas em meio DMEM modificado, na concentração final de 5x104 células/poço. Para ambos experimentos as células foram cultivadas em incubadora por 24h antes dos tratamentos específicos de cada grupo. Para o transporte de [14C]MeAIB foram feitos 3 grupos: 1) grupo controle; 2) grupo FSH; 3) grupo IGF-1+FSH. Todos os grupos foram cultivados por 24h em meio DMEM, sendo acrescido 25ng/mL de IGF-1 ao grupo IGF-1+FSH. Posteriormente, as células foram incubadas à 37ºC por 45 min em meio HBSS acrescido de 0,2 μCi/mL de [14C]MeAIB por amostra. Foi adicionado ao meio de incubação 75 mIU/ml de FSH nos grupos FSH e IGF-1+FSH. A reação foi encerrada com colocação das placas em gelo e o meio foi retirado da placa e congelado. As células foram lavadas com HBSS à 4ºC e 0,5 mL/poço de água foi adicionado antes de serem congeladas à -20°C. Para a contagem do radioativo, as células foram descongeladas, sonicadas e centrifugadas à 800g por 10min. Alíquotas de 100 μL foram retiradas de todas as amostras (meio interno e externo) e colocadas em 1,5mL de liquido de cintilação para a mensuração da radioatividade em espectrômetro de cintilação líquida LKB beta modelo 1215. A dosagem de proteína das amostras foi realizada segundo o método de Lowry. Os resultados foram expressos pela relação entre radioatividade das células e a radioatividade do meio de incubação. Para a dosagem de 17ß-estradiol as células foram cultivadas nas mesmas condições conforme o experimento anterior. Após 24 horas de cultivo, as células foram divididas em quatro grupos: 1)grupo controle: somente o meio de cultivo; 2) grupo FSH: foi adicionado 75mUI de FSH ao meio; 3) grupo IGF-1: foi adicionado na concentração de 25ng IGF-1/mL ao meio; 4) grupo FSH+IGF-1: foi adicionado FSH (75mUI/mL) e IGF-1 (25ng/mL) ao meio. Ao final de 24h de cultivo, o meio foi congelado à -20ºC. O meio foi diluído na proporção 1:10 no meio tampão do kit. Posteriormente, a mensuração do 17ß-estradiol foi feita por Elisa, utilizando-se o kit comercial 17ß-estradiol EIA kit. Foram utilizados os seguintes itens para correlação com os parâmetros experimentais: a idade e o número de oócitos MII que foram submetidos à ICSI. Para a análise estatística foram feitos os testes: ANOVA de uma via seguido de pósteste de Bonferroni, Shapiro-Wilk para avaliação da distribuição dos dados, Kruskal-Wallis e coefeciente de correlação de Pearson’s. As diferenças foram consideradas significativas quando P<0,05. Foi encontrado uma forte correlação negativa entre o número de oócitos MII e o transporte de [14C]MeAIB (n=5; P=0,03). Não foi encontrado correlação entre o transporte de [14C]MeAIB com a idade das pacientes, sendo o valore de P> 0,05. A incubação com FSH (75 mUI/mL) e o cultivo com IGF-1 (25ng/mL) durante 24h não estimularam o transporte de [14C]MeAIB nas células do cumulus humanas (n=5; P=0,620). O cultivo com a adição de FSH, IGF-1 ou ambos por 24h não aumentou a secreção de 17ß-estradiol (pg/mL) no meio de cultura, comparado ao grupo controle (n= 7; P = 0,855). Em relação à concentração de 17ßestradiol nas células do cumulus não tratadas, não foi encontrado nenhuma correlação entre os parâmetros avaliados de idade e número de oócitos MII (n=7) P> 0,05. Podemos concluir que o sistema A de transporte de aminoácidos está presente em células do cumulus humanas, sendo que a taxa basal é inversamente proporcional ao número de oócitos MII coletados. Provavelmente, o IGF-1 não ocasiona um aumento direto na expressão do FSHR, uma vez que quando adicionado ao meio de cutivo não estimulou os parâmetros analizados comparados aos grupos com somente FSH. Além disso, quando adicionado IGF-1 sozinho ao meio de cultura das células do cumulus, nenhuma alteração na produção de 17ß-estradiol foi observada, sugerindo que o IGF-1 não tenha um efeito direto na esteroidogênese destas células. Portanto, embora existam diversos trabalhos que tem auxiliado na compreensão da interação entre o IGF-1 e o FSH na diferenciação celular durante a foliculogênese, ainda faltam pontos cruciais neste processo em células humanas. Da mesma forma, são necessários mais estudos que caracterizem as células do cumulus, bem como a sua interação com o oócito, para que possamos aplicar estes conhecimentos com a finalidade de melhorar as taxas de MIV oocitária. / Oocyte and the cumulus cells have a bi-directional communication through projections that cross the zona pellucida, being fundamental for the transport of amino acids necessary for gamete growth and maturation. Oocyte plays a dominant role in establishing the heterogeneity of the granulosa cells found in preovulatory follicles by preventing the differentiation of the cumulus granulosa cells. Thus, culturing cumulus cells from preovulatory follicles is a suitable approach to study granulosa cell differentiation as well as the hormonal interactions that occur in folliculogenesis. Several studies have suggested the synergic action of FSH and IGF-1 in steroidogenesis, through the stimulation of the same metabolic pathways, but with great variability of results among species. We evaluate the basal transport and the transport stimulated by FSH [14C]MeAIB in human cumulus cells, observing whether the addition of IGF-I to the culture medium alters this parameter. Cumulus cells were collected during the IVF procedures at Proser Assisted Reproduction Center, and cultured in modified DMEM, at a final concentration of 5x104 cells/well. For both experiments, cells were cultured in an incubator for 24h before the specific treatment of each experimental group. For the transport of [14C]MeAIB 3 groups were made: 1) control group; 2) FSH group; 3) IGF-1 + FSH group. All groups were further cultured for 24h. Twenty five mg/mL of IGF-1 were added to the to the culture medium of the IGF-1 + FSH group. Cells were incubated at 37°C for 45 min in HBSS medium plus 0,2 μCi/mL of [14C] MeAIB per sample, wherein FSH and FSH + IGF-1 groups had 75 mIU/mL of FSH added to the incubation medium. The reaction was terminated by placing the plates on ice and the medium was removed from the plate and freezed. Cells were washed with HBSS at 4°C and 0.5 mL/well of water were added before being frozen at -20°C. For radioactive counting, cells were thawed, sonicated and centrifuged at 800g for 10min. Aliquots of 100 uL were taken from all samples (internal and external medium) and placed in 1.5 mL of scintillation liquid for measurement of radioactivity in a liquid scintillation spectrometer LKB beta 1215 model. Protein dosage of the samples was performed according to the method of Lowry. Results were expressed by the ratio between the radioactivity of cells and the radioactivity of the incubation medium. For the 17ß-estradiol dosage, cells were cultured under the same conditions as the previous experiment. After 24 hours of culture, the cells were divided into four groups: control group = only the culture medium; FSH group = it was added 75mUI of FSH to the medium; IGF-1 group = it was added IGF-1 at a concentration of 25ng/mL to the medium; FSH + IGF-1 group = it was added FSH (75mUI/mL) and IGF-1 (25ng/mL) to the medium. After of 24 hours of cultivation, the medium was frozen at -20°C. The medium was diluted in a 1:10 ratio in the kit buffer medium. Afterwards, measurement of 17ß-estradiol was made by ELISA using a 17ß-estradiol EIA commercial kit. The following items were used for correlation with the experimental parameters: the age of the patients and the number of MII oocytes that underwent ICSI. For statistical analysis two tests were used: One-way ANOVA followed by Bonferroni post-test, Shapiro-Wilk for evaluation of data distribution, Kruskal-Wallis and Pearson's correlation coefficient. Differences were considered significant when P <0.05. A strong negative correlation was found between the number of MII oocytes and the transport of [14C]MeAIB (n = 5; p = 0.03). No correlation was observed between the transport of [14C]MeAIB and the age of patients (P>0.05). The incubation with FSH (75 mIU/mL) and the cultivation with IGF-1 (25ng/mL) for 24 hours did not stimulate the transport of [14C]MeAIB in human cumulus cells (n = 5; P = 0.620). The culture with the addition of FSH, IGF-1, or both for 24 hours did not increase the secretion of 17ß-estradiol (pg/mL) in the culture medium compared to the control group (n = 7; P = 0.855). Regarding the 17ß-estradiol concentration in the untreated cumulus cells, it was not found any correlation between the evaluated parameters of age and number of MII oocytes (n = 7) P>0.05. We conclude that the A system amino acid transport is present in human cumulus cells, and that the basal rate is inversely proportional to the number of MII collected oocytes. Probably, IGF-1 does not cause a direct increase in FSHR expression, once when added to the culture medium it did not stimulate the parameters analyzed compared to the groups with FSH alone. Moreover, when IGF-1 is added alone to the culture medium of cumulus cells, no change in 17ß-estradiol production was observed, suggesting that IGF-1 has not a direct effect on these cells steroidogenesis. Therefore, although there are several studies that have assisted in understanding the interaction between IGF-1 and FSH in cell differentiation during folliculogenesis, there are still crucial unknown points in this process in human cells. Likewise, more studies are needed to characterize the cumulus cells, as well as their interaction with the oocyte, so we can apply this knowledge to improve oocyte IVM rates.
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Estudo comparativo de parÃmetros elÃtricos na absorÃÃo de substratos Na+/H+-dependentes em epitÃlio jejunal e ileal de coelho em cÃmaras de ussing / Comparative study of electric parameters in the substratum absorption Na+/H+-dependentes in epitÃlio jejunal and ileal de coelho in Chambers of UssingEduardo Augusto Torres da Silva 29 May 2002 (has links)
CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / Cholera is a disease that became endemic in Brazil Northeastern after the pandemic initiated in Peru in 1991. Choleratoxin causes a potent intestinal secretion effect, resulting in significant loss of hydro-electrolyte balance and hypovolemic lock in patients with cholera. We postulate that the administration of substrates, such as amino acids and di-peptide-based glutamine, may increase intestinal sodium and water absorption, resulting in partial decrease of hydro-electrolyte loss in this disease. The aim of this work is to study the phar-macodinamic of Na+ and/or H+-dependent substrates in the rabbit normal small bowel and in the pre-treated with choleratoxin. The administration of substrates with sodium-dependent absorption could, partially, counterbalance the water and electrolyte losses. Others substrates such as di- and tri-peptides presenting mechanisms of proton-dependent absorption also reveal similar properties. The above facts encouraged the development of this comparative study about the ef-fect of cholera toxin on jejunum and ileum absorptive functions. The proximal jejunum and distal ileum loops were isolated in vivo and injected with 5 ml of cholera toxin (1 mg/ml) in saline (experimental group) or equal volume of saline alone (control group). After 1 hour of toxin incubation, the jejunum and ileum loops were excised, freed of their serosa membrane and opened. The fragments were mounted in perfusion chambers with temperature and oxygen control. The mucosal side was perfused with glucose-free physiological solution (substituted by manitol) and the serosas side by physiological solution with glucose. After stabilization, substrates from 1x10-5 to 1.7x10-3 M were cumulatively added. The electric parameters of short circuit current (icc), transepitelial potential difference (VTE) and transepitelial resistance (RTE) were measured in Ussing chambers be-fore and during the period of substrate addition. It was observed that: 1) the presence of cholera toxin increased significantly those parameters, except for RTE, in ileum fragments; 2) the addition of substrates presenting sodium-dependent absorption onto cholera toxin pre-incubated fragments always provoked an increase of RTE larger than that observed with control fragments. The same oc-curred with VTE, except for reduction of icc; and 3) the di-peptide alanyl-glutamine did not alter the RTE but increased significantly the icc both in normal and pre-incubated preparations. These results indicate a probable link between the transport mechanisms of Na+-dependent substrates and the regulatory mechanisms of the paracellular resistance, phenomena not observed in H+-dependent substrate absorption. / A cÃlera à uma doenÃa que se tornou endÃmica no Nordeste do Brasil apÃs a pandemia iniciada no Peru em 1991. A toxina do Vibrio cholerae (TC) causa potente aÃÃo secretÃria no intestino delgado, podendo levar a desequilÃbrio hidro-eletrolÃtico e choque hipovolÃmico nos pacientes com cÃlera. Postulamos que a administraÃÃo de substratos, tais como aminoÃcidos e di-peptÃdeos à base de glutamina, possa aumentar a absorÃÃo de sÃdio e Ãgua no intestino, reduzindo parcialmente as perdas hidro-eletrolÃticas na doenÃa. Este trabalho tem como objetivo estudar a farmacodinÃmica da absorÃÃo de substratos Na+ e/ou H+-dependentes no intestino delgado de coelho normal e naquele prÃ-tratado com a TC. A administraÃÃo de substratos com mecanismos de absorÃÃo Na+-dependentes pode contrabalanÃar parcialmente as perdas hÃdricas e eletrolÃticas. Outros substratos, tais como os di- e tri-peptÃdeos, que apresen-tam mecanismos de absorÃÃo prÃton-dependentes, tambÃm possuem propriedades se-melhantes. Estas reflexÃes nos levaram a estudar os efeitos da toxina de cÃlera sobre os parÃmetros elÃtricos de dois segmentos intestinais (jejuno e Ãleo). AlÃas de jejuno proximal e de Ãleo distal foram isoladas in vivo e injetadas com 5 ml de toxina de cÃle-ra (1 mg/ml) em soluÃÃo fisiolÃgica (grupo experimental) ou igual volume de soluÃÃo fisiolÃgica (grupo controle). ApÃs 1 hora de incubaÃÃo com a toxina, as alÃas foram retiradas, dissecadas da membrana serosa e abertas. Os fragmentos planos foram mon-tados em cÃmaras de perfusÃo com temperatura e oxigenaÃÃo controladas. O lado mu-coso foi perfundido por soluÃÃo sem glicose (substituÃda por manitol), enquanto que o lado seroso por soluÃÃo glicosada. ApÃs estabilizaÃÃo, foram adicionados cumulativa-mente substratos em concentraÃÃes que variam de 1x10-5 a 1,7x10-3 M. Os parÃmetros elÃtricos corrente de curto-circuito (icc), diferenÃa de potencial transepitelial (VTE) e resistÃncia transepitelial (RTE) foram medidos em cÃmaras de Ussing, antes e durante o perÃodo de adiÃÃo de substratos. Foi observado que: 1) a toxina de cÃlera aumentou significativamente estes parÃmetros, com exceÃÃo da RTE, nos fragmentos de Ãleo; 2) a adiÃÃo de substratos de absorÃÃo Na+-dependentes nos fragmentos prÃ-incubados com toxina de cÃlera sempre provocou um aumento da RTE significativamente maior do que aquele observado nos fragmentos controle, o mesmo ocorrendo com relaÃÃo à VTE, mas com reduÃÃo da icc; e 3) o di-peptÃdeo alanil-glutamina nÃo causou alteraÃÃo na RTE, mas aumentou significativamente a icc tanto nas preparaÃÃes normais como nas prÃ-incubadas. Esses resultados indicam uma possÃvel ligaÃÃo entre os mecanismos de transporte de substratos Na+-dependentes e os mecanismos reguladores da resistÃncia paracelular, fenÃmeno nÃo observado na absorÃÃo do substrato H+-dependente.
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Percepção da sociedade e dos especialistas sobre os benefícios dos sistemas de transporte público urbano sobre trilhos / Society and specialists perception about the generated profits with urban public rail transportation systemsBaria, Igor 25 September 2009 (has links)
Os objetivos deste trabalho são dois: avaliar a percepção da sociedade e dos especialistas em transporte sobre os benefícios alcançados com a implantação de sistemas de transporte público urbano sobre trilhos e verificar se a percepção dos especialistas é alinhada com a percepção da sociedade. O trabalho foi desenvolvido a partir de uma pesquisa bibliográfica para identificação dos benefícios do transporte público sobre trilhos. Após definidos os benefícios foi aplicada uma pesquisa, de caráter exploratório, utilizando a escala de Likert, à sociedade, mais especificamente a alunos de graduação de cursos universitários na região metropolitana de São Paulo num total de 433 respondentes, distribuídos em 7 locais distintos. Em seguida foi realizada uma pesquisa junto a especialistas em transporte, com utilização de uma planilha para avaliação dos benefícios com base no Método de Análise Hierárquica - MAH. Na pesquisa com especialistas obteve-se 34 planilhas distribuídas em 4 grupos distintos. Os resultados mostram que a sociedade e os especialistas possuem uma percepção bastante positiva dos benefícios gerados pela implantação de sistemas de transporte público urbano sobre trilhos, havendo, no entanto, diferenças sensíveis nas avaliações, que refletem na ordem de importância dos benefícios. / The objectives of this work are, over all, two: evaluate the society´s and transportation specialists the perception on the benefits, reached with the implantation of urban public transport on tracks systems and to verify if the perception of the specialists is aligned up with the perception of the society. The work was developed from a bibliographical research that had the goal to identify the benefits of the public transport on tracks. After defined the benefits the research was applied to the society using the Likert´s scale, in exploratory way, more specifically the graduation´s pupils of university courses in the metropolitan region of São Paulo in a total of 433 respondents, distributed in seven distinct places. After that was carried through a research next to transportation´s specialists, with the resource of a spread sheet for evaluation of the benefits on the basis of the Analytic Hierarchical Process - AHP. About the research with specialists, one got 34 spread sheets distributed in four distinct groups. The results show that the society and the specialists possess a sufficiently positive perception about the benefits generated for the implantation of urban public transport on tracks systems, having, however, sensible differences in the evaluations, that they reflect in the order of the benefits importance.
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