Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2017-01-20T12:06:27Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 799545 bytes, checksum: 5ca2a80673e383fad0641efed7febc4c (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-20T12:06:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 799545 bytes, checksum: 5ca2a80673e383fad0641efed7febc4c (MD5) Previous issue date: 2016-11-24 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Plantas submetidas a estresse possuem complexos mecanismos de defesa, que resultam na expressão de proteínas relacionadas à defesa ou a um estado de adaptação. Esta mudança ocorre com a participação de fatores de ranscrição, proteínas que regulam a transcrição de determinandos genes. A família Whirly compreende fatores de transcrição que possuem a capacidade de se ligar ao ssDNA e apresentam-se na forma de tetrameros. Esta família tem papel na proteção ao DNA e formação de nucleóides em cloroplastos e mitocôndrias. Outra característica importante é o transporte das proteínas Whirly do cloroplasto para núcleo, em um processo conhecido como sinalização retrógrada, que está relacionado à resposta a estresses como excesso de luz e ataque por patogenos. Em soja não há, ate o momento, nenhum estudo sobre esta importante família. Assim este trabalho visa o estudo desta família em soja, e tras no capítulo 1uma revisão sobre a familia Whirly com ênfase a resposta a estresses bióticos. No capitulo dois a família Whirly de soja é descrita e a expressão de GmWHY1A é analisada durante resfriamento e após infecção por Phakopsora pachyrhizi. A família Whirly em soja é composta por 18 membros, codificados por sete loci. Os membros foram nomeados com base na similaridade com proteínas Whirly de Arabidospsis thaliana e em análises in silico. Foram divididos em três grupos: 1- com localização predita para o croloplasto; 2- preditas como mitocondriais, e 4- formado por proteínas com localização indeterminada. Cada gene teve sua expressão mensurada em raízes, caule, cotilédones, folhas e trifólios. GmWHY1A foi escolhido para estudos posteriores pelas suas características de expressão e pela similaridade com AtWNHY1. GmWHY1foi reprimido após tratamento com etefon e foi positivamente regulado apos tratamento com Acido salicílico e jasmonato. Durante o estresse por frio e após a infecção por Phakopsora pachyrhizi, GMWHY1A foi reprimido. Tomados em conjunto esses dados sugerem que a expressão de Whirly pode ser regulada através do contato com o fungo. / When submitted to stress, plants triggers complex defense pathways that result in expression of defense-related proteins. This change occurs with the participation of transcription factors, proteins that regulates the transcription of specific genes. The Whirly family comprises transcription factors which have the ability to bind single-stranded DNA and remains as tetramers. This family has a role in DNA protection and formation of nucleoids in chloroplasts and mitochondria. Another important feature is the transport of the Whirly proteins from chloroplast to nucleus in a process known as retrograde signaling, which is related to the response to stresses such as high light and pathogen contact. So far there is no study of this important family in soybean. Thus, this work aims to study this family in soybean. The chapter 1 is a review on the Whirly family with emphasis on biotic stress response. In chapter two, the soybean Whirly family is described and the expression of GmWHY1A is analyzed during chilling stress and after infection by Phakopsora pachyrhizi. The Whirly family in soybean comprises 18 members, coded by seven loci. Members were named based on its similarity to Whirly proteins of Arabidospsis thaliana and in silico analyses. They were divided into three groups: 1- with chloroplast predicted location; 2 - predicted as mitochondrial, and 4 - formed by proteins with undetermined location. Each gene had its expression measured in roots, stem, cotyledons, leaves and trifoliate leaves. GmWHY1A was chosen for further studies for its expression characteristics and its similarity to AtWNHY1. GmWHY1 was repressed after treatment with ethephon and was upregulated following treatment with salicylic acid and jasmonic acid. During chilling stress and after infection by Phakopsora pachyrhizi, GMWHY1A was suppressed. Taken together, these data suggest that Whirly expression can be regulated by contact with this fungus.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2017-10-18T15:38:40Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 16418727 bytes, checksum: 1e4d06e6842f6d8fd2819d47448b314d (MD5) / Made available in DSpace on 2017-10-18T15:38:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 16418727 bytes, checksum: 1e4d06e6842f6d8fd2819d47448b314d (MD5) Previous issue date: 1999-10-25 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Durante a construção de um mapa de RFLP de soja, na DuPont (EUA), as sondas analisadas foram, em sua maioria, monomórflcas, porém algumas se mostraram altamente polimórticas (A1-10, A2-08, A45-10, ASS-09 e A75-10). A fim de melhor caracterizar esse padrão hipervariável, essas sondas foram seqúenciadas. Duas delas (Al-10 e A2-08) não apresentaram similaridade relevante com nenhuma sequência do “GenBank”; entretanto, uma característica marcante dessas sondas foi a sua riqueza em sequências A:T. As outras três sondas continham sequências homólogas a genes que codificam proteínas de resistência a doenças. Devido ao padrão de hibridização extremamente polimorflco revelado pela sonda A45-10, foram desenhados “primers” flanqueando essa sonda para amplincar regiões homólogas em diversos genótipos de soja, para que esse perfil de amplificação pudesse ser utilizado como “tingerprint”. Os produtos de amplificação obtidos, na faixa de 1,5 a 2,0 kb, foram capazes de identificar os diferentes genótipos analisados. A partir de uma biblioteca genômica da variedade de soja FT-Cristalina, foram isolados quatro clones, usando-se a sonda ASB-09. Um deles, o clone CR44, continha um inserto de aproximadamente 16 kb. Dois fragmentos de EcoRl e Pstl do clone CR44, que hibridizaram com a sonda A53-09, foram subclonados e seqúenciados. Esses dois fragmentos formaram um contíguo, denominado GR, de 4.198 pb. A comparação da sequência de aminoácidos predita com outras existentes no “GenBank” indicou uma homologia entre GR e a proteína “Cf-2.1-Iike” de Arabidopsis tha/iana, proteína de resistência a doenças homóloga à Cf-2/Cf-5 de Hordeum vulgare e outras proteínas de resistência de Lycopersicon. Além disso, foi identificada uma ORF de 789 nucleotídios, que codiôca uma proteína de 262 aminoácidos com domínios LRRs, uma das características estruturais da maioria das proteínas de resistência. Um RT-PCR foi feito para detectar transcritos homólogos a A53-09, A75-1O e A45-10, usando-se “primers” que flanqueavam a região de maior similaridade com genes de resistência. Em amostras de RNA extraídas de folhas, raízes e haste foi detectada a presença de transcritos, usando-se os “primers” derivados de ASB-09, o que indicou que A53-09 não é expresso de modo órgão-específico. Os produtos de amplificação presentes nos três órgãos foram seqúenciados e alinhados perfeitamente com a ORF de 789 nucleotídios. Para A75-10, foi detectada a presença de várias bandas, nos três órgãos examinados, indicando que, possivelmente, os “primers” estariam pareando com mais de um transcrito. Para A45-10, não foi detectada a presença de nenhum transcrito nos três órgãos analisados. / During the construction of one soybean RFLP map at DuPont (USA), the majority of the probes analyzed were monomorphic, however, a few of them were highly polymorphic (A1-10, A2-08, A45-10, ASB-09, and A75-10). To better understand the hypervariable pattern revealed by these probes, they were sequenced. Two of them (A1-1O and A2-08) did not present any similarities with sequences deposited in the GenBank. Their main feature was that they were highly A:T rich. The other three probes contained sequences homologous to known disease resistance genes in plants. Due to the hypervariable pattern revealed by probe A45-10, primers flanking this probe were designed and used to amplify the corresponding region in several soybean genotypes. The amplification products, in the range of 1.5 to 2 kb, allowed the identification of each of the different genotypes analyzed. Probe ASB-09 was used to screen a genomic library prepared with DNA from cultivar FT-Cristalina. Four clones were isolated. One of them, clone CR44 of approximately 16 kb, was further analyzed. Restriction of this clone with EcoRl and Pstl revealed two bands hybrizing with probe A53-09. These were subcloned and sequenced. The two fragments partially overlapped and formed a config of 4,198 bp designated GR. Blast analyses of GR with sequences deposited in the GenBank showed that it potentially encode a protein homologous to “Cf-2.1-Iike” protein of Arabidopsis tha/iana, to disease resistance protein homologous to Cf-2le-5 of Hordeum vulgare and to disease resistance proteins of Lycopersicon. An open-reading frame of 789 nucleotídes was identified in GR. It potentially encode a sequence of 262 amino acid residues with LRR motifs, a structural characteristic of most disease resistance proteins described so far. RT-PCR was performed with primers flanking the regions homologous to disease resistance genes present in probes ASB-09, A75-10, and A45-10. RNA samples extracted from leaves, roots, and stems contained transcripts which were amplitied with primers derived from probe ASB-09, indicating that expression of ASB-09 is not organ-specific. The amplification products from the three organs were sequenced and presented perfect homology with part of the 789 bp ORF present in A53-09. The primers derived from A75-10 amplifled several bands with different sizes in the three organs analyzed indicating that more than one transcript homologous to A75-10 was present in the different organs. The primers derived from A45-1O did not detect any transcripts in the organs analyzed. / CPF do autor não encontrado