Made available in DSpace on 2014-06-12T18:04:34Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo6199_1.pdf: 10094196 bytes, checksum: 4aa11f8ba64139d59c8d3fd9eefe303f (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2007 / Os genes de resistência (R) respondem pela primeira interação entre planta e patógeno, sendo responsáveis pela ativação ou não de mecanismos de resistência em plantas. Este trabalho analisou genes R em sequências expressas de eucalipto, cana-de-açúcar e feijão-caupi, geradas através de bibliotecas produzidas a partir de diferentes tecidos em várias fases de desenvolvimento. Depois da análise in silico foi possível a identificação de todas as classes de genes de resistência em eucalipto, com destaque para a classe NBS-LRR (Nucleotide Binding Site; Sítio de Ligação de Nucleotídeo - Leucine Rich Repeats; Repetições Ricas em Leucina) (50% das 208 sequências candidatas que apresentaram domínios completos) e em cana-de-açúcar, com destaque para a classe KINASE (46% das 196 sequências candidatas que apresentaram domínios completos). No feijão-caupi o número de seqüências disponíveis foi escasso, observando-se maior abundância da classe NBS-LRR (80% das 38 sequências candidatas), entretanto estiveram ausentes as classes KINASE e LRR-KINASE. Observaram-se genes R em cana e eucalipto em todos os tecidos analisados, em diferentes níveis de expressão sob condições não induzidas. Quando analisados através de alinhamentos múltiplos os genes R apresentaram maior semelhança entre espécies pertencentes à mesma família, geralmente agrupando mono e dicotiledôneas em clados distintos, sugerindo que tenham surgido antes da separação entre essas classes. Os resultados do presente estudo têm potencial para colaborar com o desenvolvimento de marcadores moleculares para o melhoramento, para o entendimento da abundância e diversidade e evolução destes genes, com ênfase das espécies estudadas, bem como para identificação dos genes R em outras culturas de interesse econômico

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2017-05-11T16:26:55Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 586343 bytes, checksum: 12f3ff8364bb8a6ecd1ecdbde832b873 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-11T16:26:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 586343 bytes, checksum: 12f3ff8364bb8a6ecd1ecdbde832b873 (MD5) Previous issue date: 2002-11-11 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A análise do genoma de variedades de soja por hibridização com sondas RFLP (Random Fragment Length Polymorphism) revelou um grande número de bandas monomórficas e de algumas bandas polimórficas de pequeno número de cópias, sendo estas últimas utilizadas normalmente na construção de mapas de ligação. Dentre as sondas que apresentaram polimorfismo, algumas revelaram um grande número de bandas de DNA que eram altamente polimórficas entre diferentes cultivares, mapeando regiões hipervariáveis do genoma. Neste presente trabalho um fragmento de 295 pb (A5309-295), oriundo da amplificação de uma destas sondas (A53-09) com “primers” específicos e que apresenta homologia com genes de resistência a doenças em plantas, foi utilizado para escrutinar uma biblioteca de cDNA de soja. Quatro clones positivos foram obtidos e denominados A5309-28, A5309-41, A5309-48 e A5309-54 foram isolados. Estes clones, com 1,4, 1,7, 2,0 e 1,6 kb, respectivamente, foram seqüenciados e as seqüências de aminoácidos predita de cada um dos clones foram comparadas com outras depositadas no “GenBanK”. O clone A5309-28 apresentou homologia com uma proteína de interação com bomba de prótons de Arabidopsis viiithaliana, e poderia atuar na resposta de defesa das plantas. Durante a resposta de defesa estas enzimas mediam o influxo de prótons através da membrana após a elicitação celular, levando à alcalinização do meio extracelular e acidificação do citosol. Estes são passos importantes durante a durante a resposta de defesa. O clone A5309- 41 apresentou homologia com um transportador de membrana dependente de ATP (transportador ABC) de Populus nigra. Estes transportadores estão freqüentemente envolvidos nos processos de detoxificação durante a resposta de resistência. O clone A5309-48 apresentou homologia com uma proteína lipoxigenase expressa em folhas de tabaco após indução por jasmonato, e poderia participar na resposta de resistência por gerar moléculas sinalizadoras como ácido jasmônico, metil-jasmonato ou peróxidos lipídicos, oriundas da peroxidação lipídica, ou ainda pela formação de metabólitos secundários que podem inibir a proliferação do patógeno. O clone A5309-54 apresentou homologia com a proteína cinase PK12, membro da família LAMMER cinases, expressa em folhas de tabaco após indução por etileno. Para determinar se os quatro clones são expressos, “primers” que flanqueiam regiões específicas de cada clone foram construídos e utilizados em um RT-PCR (reverse transcription PCR). Em todos os órgãos analisados (raiz, caule, folha e semente) existem seqüências transcritas similares aos clones isolados neste trabalho. A homologia entre a o fragmento utilizado como sonda (A5309-295) e os quatro clones positivos foi analisada pelo alinhamento entre suas seqüências de nucletídeos. Todos os quatro clones apresentaram homologia superior a 30% quando comparados com a sonda A5309-295. A seqüência predita de aminoácidos do fragmento utilizado como sonda (A5309-295) contém uma ORF de 56 aminoácidos e apresenta dois sítios conservados: um sítio de meristoilação, indicando uma provável localização de membrana, e um sítio de fosforilação por uma proteína cinase caseína II. Todos os clones isolados também apresentam um sítio de fosforilação por uma proteína cinase C e por uma proteína cinase caseína. Exceto o clone A5309-28, todos os outros isolados também apresentam sítio de meristoilação. A5309-28 apresenta ainda uma região rica em lisina, enquanto o clone A5309-48 um domínio transmembrana. A potencial presença de tais domínios nas seqüências preditas de aminoácidos dos clones positivos e do fragmento utilizado como sonda (A5309-295), indica uma provável presença de regiões similares tanto na seqüência ixprotéica, como de DNA, que permitam a interação dessas proteínas com a membrana plasmática, além de justificar o isolamento dos clones do banco de cDNA. / Analysis of the cultivated soybean genome by hybridization with RFLP (Random Fragment Length Polymorphism) probes revealed a great number of monomorphic, and some polymorphic loci, with a low copy number in the genome. The latter can be used for the construction of linkage maps. There is also another class of probes that reveals hypervariable and high copy number regions. In this work a fragment of 295 base pairs (A5309-295), part of probe A53-09, which has been shown to be homologous to plant disease resistance genes, was used to screen a soybean cDNA library. Four positive clones named A5309-28, A5309-41, A5309-48 and A5309-54 were isolated. These clones, with 1.4, 1.7, 2.0, and 1.6 kilobase pairs, respectively, were sequenced and the corresponding deduced amino acid sequences were compared to those deposited in the GenBank. Clone A5309-28 was homologous to a proton ATPase from Arabidopsis thaliana, and it could participate in the defense response in the plant. During the defense response these enzymes mediate the influx of protons across the membrane leading to the alcalinization of the extracellular medium and acidification of the cytosol. These are important steps during the defense response. Clone A5309-41 was homologous to an ATP-dependent membrane transporter (ABC transporter) from Populus nigra. These transporters are often involved in the detoxication process during the resistance response. Clone A5309-48 was homologous to the lipoxygenase (LOX) enzyme which is expressed in tobacco leaves after induction by jasmonate. These enzymes also participate in the resistance response by taking part on a route leading the production of jasmonic acid, methyl jasmonate or lipid peroxides, or by producing secondary metabolites that may inhibit the pathogen proliferation. Clone A5309-54 was homologous to the protein kinase PK12, a member of the LAMMER family, which is expressed in tobacco leaves induced by ethylene. To determine if the four clones isolated were expressed, primers flanking specific parts of each clone were designed and used in reverse transcription PCR (RT-PCR) reactions. In all organs tested (root, stem, leaves, and seeds) expressed sequences were detected. The sequence relationship between the 295 bp fragment (probe A5309-295), and the four positive clones was analyzed and homologies greater than 30% were found. The clone from which the probe A5309-295 was isolated contains an ORF that potentially codes for an amino acid sequence with 56 residues with two conserved sites: one for myristoylation, which is indicative of membrane localization, and a phosphorylation site for protein kinase C and casein kinase. All four clones, with the exception of clone A5309-28, also presented the myristoylation site. In addition, clone A5309-28 presented a lysine rich region, and clone A5309-48 presented a transmembrane domain. The presence of these domains in the predicted amino acid sequences of the positive clones and of probe A5309-295 indicates that these putative proteins can interact with the plasma membrane, and the presence of these common domains could also help to explain why these clones hybridized with this specific probe. / Dissertação importada do Alexandria

Made available in DSpace on 2016-08-29T15:37:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_9114_Dissertação Final Paula Mikaely_Henrique_Vieira(CD).pdf: 2468557 bytes, checksum: 9d698d07e6ad30f4bb1f4c69045263c7 (MD5) Previous issue date: 2015-07-27 / Ao longo da evolução as plantas desenvolveram um sofisticado mecanismo de defesa contra o ataque de fitopatógenos, conhecido como defesa pós-formada. Este sistema compreende uma complexa rede de sinalização bioquímica comandada por genes de resistência, os genes R. A identificação destes genes em culturas de interesse agronômico como a soja e o eucalipto amplia a base genética da resistência, o que torna as plantas menos vulneráveis aos ataques de patógenos. Os genes R codificam proteínas com domínios conservados. A presença desses domínios permite o uso de técnicas de PCR visando o isolamento do DNA e a clonagem de sequências análogas de genes de resistência (RGA) mediante o uso de oligonucleotídeos degenerados específicos para as regiões conservadas. Objetivou-se neste trabalho: 1) avaliar a presença de fragmentos associados à resistência a Ceratocystis fimbriata em genótipos de eucalipto; 2) mensurar a diversidade entre genótipos de eucalipto; 3) Identificar fragmentos relacionados à resistência aos nematóides Heterodera glycines e Meloidogyne spp em genótipos de soja e; 4) realizar uma análise comparativa dos dados obtidos por RGAs com marcadores SSR que contemplam QTLs de resistência. As análises de agrupamento realizadas com dados de RGA e SSR permitiram distinguir grupos de genótipos resistentes e suscetíveis a C. fimbriata e revelou a diversidade existente entre os indivíduos estudados, o gráfico de Heatmap permitiu identificar fragmentos associados à resistência à C. fimbriata em cultivares de eucalipto. Os marcadores RGAs aplicados em soja foram eficientes em discriminar genótipos de soja resistentes e suscetíveis aos nematóides em estudo, sendo importante associar a estes o uso de marcadores SSR por serem potentes em amplificar e discriminar genótipos quanto a raça especificidade do patógeno.

Submitted by ROBERTA LUIZA VIDAL null (robertalvidal@gmail.com) on 2018-01-24T18:28:24Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_Roberta_Luiza_Vidal.pdf: 1450601 bytes, checksum: edd16eed2fa6fd6a4838da64795991c7 (MD5) / Approved for entry into archive by Karina Gimenes Fernandes null (karinagi@fcav.unesp.br) on 2018-01-26T11:14:58Z (GMT) No. of bitstreams: 1 vidal_rl_me_jabo.pdf: 1409244 bytes, checksum: 56ecd2ad1616f277b1725ec6899dbc3e (MD5) / Made available in DSpace on 2018-01-26T11:14:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 vidal_rl_me_jabo.pdf: 1409244 bytes, checksum: 56ecd2ad1616f277b1725ec6899dbc3e (MD5) Previous issue date: 2018-01-16 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Devido ao potencial danoso e existência de inúmeras raças de míldio da alface (Bremia lactucae Regel), vários países realizam a identificação e monitoramento destas raças através do uso de cultivares diferenciadoras de alface. A identificação de resistência a outras doenças importantes nestas cultivares seria de grande valia para o melhoramento da alface, permitindo a seleção simultânea para doenças. Dentre os patógenos de solo, destacam-se os nematoides de galha (Meloidogyne spp.) por seus danos e dificuldade de controle. O presente trabalho teve como objetivo avaliar a resposta das cultivares diferenciadoras de míldio (C-Set) à M. javanica e M. incognita. O experimento foi conduzido em delineamento inteiramente casualizado, com oito repetições e população inicial de 1.000 ovos e juvenis. As avaliações foram realizadas pelos critérios fator de reprodução e índice de reprodução, 75 dias após a inoculação. Os dados foram submetidos à análise de variância e as médias comparadas pelo teste de Scott-Knott a 5% de probabilidade. Todos as cultivares são suscetíveis a M. incognita. As cultivares Argelès, Kibrille, Balesta, Colorado, Design, Bartoli e NunDm15 são classificados como resistentes a M. javanica pelo fator de reprodução e podem ser explorados para seleção simultânea ao míldio e a esta espécie de nematoide. / Due to the harmful potential and existence of numerous races of lettuce downy mildew (Bremia lactucae Regel), several countries perform the identification and monitoring of these races through the use of differential lettuce cultivars. The identification of resistance to other important diseases in these cultivars would be of great value for the lettuce’s breeding, allowing the simultaneous selection for diseases. Among the soil pathogens, the most important are the root-knot nematodes (Meloidogyne spp.) due to their damage and difficulty of control. In the present work it was evaluated the response of these differential cultivars (C-Set) to M. javanica and M. incognita. The experiment was conducted in a completely randomized design, with eight replications and initial population of 1.000 eggs and juveniles. The evaluations were performed by the criteria of reproduction factor and reproduction index, 75 days after inoculation. Data were submitted to analysis of variance and the means were compared by Scott-Knott test at 5% probability. All cultivars are susceptible to M. incognita. The cultivars Argelès, Kibrille, Balesta, Colorado, Design, Bartoli and NunDm15 are classified as resistant to M. javanica by the reproduction factor and can be exploited for simultaneous selection to mildew and this species of nematode.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2017-10-18T15:38:40Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 16418727 bytes, checksum: 1e4d06e6842f6d8fd2819d47448b314d (MD5) / Made available in DSpace on 2017-10-18T15:38:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 16418727 bytes, checksum: 1e4d06e6842f6d8fd2819d47448b314d (MD5) Previous issue date: 1999-10-25 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Durante a construção de um mapa de RFLP de soja, na DuPont (EUA), as sondas analisadas foram, em sua maioria, monomórflcas, porém algumas se mostraram altamente polimórticas (A1-10, A2-08, A45-10, ASS-09 e A75-10). A fim de melhor caracterizar esse padrão hipervariável, essas sondas foram seqúenciadas. Duas delas (Al-10 e A2-08) não apresentaram similaridade relevante com nenhuma sequência do “GenBank”; entretanto, uma característica marcante dessas sondas foi a sua riqueza em sequências A:T. As outras três sondas continham sequências homólogas a genes que codificam proteínas de resistência a doenças. Devido ao padrão de hibridização extremamente polimorflco revelado pela sonda A45-10, foram desenhados “primers” flanqueando essa sonda para amplincar regiões homólogas em diversos genótipos de soja, para que esse perfil de amplificação pudesse ser utilizado como “tingerprint”. Os produtos de amplificação obtidos, na faixa de 1,5 a 2,0 kb, foram capazes de identificar os diferentes genótipos analisados. A partir de uma biblioteca genômica da variedade de soja FT-Cristalina, foram isolados quatro clones, usando-se a sonda ASB-09. Um deles, o clone CR44, continha um inserto de aproximadamente 16 kb. Dois fragmentos de EcoRl e Pstl do clone CR44, que hibridizaram com a sonda A53-09, foram subclonados e seqúenciados. Esses dois fragmentos formaram um contíguo, denominado GR, de 4.198 pb. A comparação da sequência de aminoácidos predita com outras existentes no “GenBank” indicou uma homologia entre GR e a proteína “Cf-2.1-Iike” de Arabidopsis tha/iana, proteína de resistência a doenças homóloga à Cf-2/Cf-5 de Hordeum vulgare e outras proteínas de resistência de Lycopersicon. Além disso, foi identificada uma ORF de 789 nucleotídios, que codiôca uma proteína de 262 aminoácidos com domínios LRRs, uma das características estruturais da maioria das proteínas de resistência. Um RT-PCR foi feito para detectar transcritos homólogos a A53-09, A75-1O e A45-10, usando-se “primers” que flanqueavam a região de maior similaridade com genes de resistência. Em amostras de RNA extraídas de folhas, raízes e haste foi detectada a presença de transcritos, usando-se os “primers” derivados de ASB-09, o que indicou que A53-09 não é expresso de modo órgão-específico. Os produtos de amplificação presentes nos três órgãos foram seqúenciados e alinhados perfeitamente com a ORF de 789 nucleotídios. Para A75-10, foi detectada a presença de várias bandas, nos três órgãos examinados, indicando que, possivelmente, os “primers” estariam pareando com mais de um transcrito. Para A45-10, não foi detectada a presença de nenhum transcrito nos três órgãos analisados. / During the construction of one soybean RFLP map at DuPont (USA), the majority of the probes analyzed were monomorphic, however, a few of them were highly polymorphic (A1-10, A2-08, A45-10, ASB-09, and A75-10). To better understand the hypervariable pattern revealed by these probes, they were sequenced. Two of them (A1-1O and A2-08) did not present any similarities with sequences deposited in the GenBank. Their main feature was that they were highly A:T rich. The other three probes contained sequences homologous to known disease resistance genes in plants. Due to the hypervariable pattern revealed by probe A45-10, primers flanking this probe were designed and used to amplify the corresponding region in several soybean genotypes. The amplification products, in the range of 1.5 to 2 kb, allowed the identification of each of the different genotypes analyzed. Probe ASB-09 was used to screen a genomic library prepared with DNA from cultivar FT-Cristalina. Four clones were isolated. One of them, clone CR44 of approximately 16 kb, was further analyzed. Restriction of this clone with EcoRl and Pstl revealed two bands hybrizing with probe A53-09. These were subcloned and sequenced. The two fragments partially overlapped and formed a config of 4,198 bp designated GR. Blast analyses of GR with sequences deposited in the GenBank showed that it potentially encode a protein homologous to “Cf-2.1-Iike” protein of Arabidopsis tha/iana, to disease resistance protein homologous to Cf-2le-5 of Hordeum vulgare and to disease resistance proteins of Lycopersicon. An open-reading frame of 789 nucleotídes was identified in GR. It potentially encode a sequence of 262 amino acid residues with LRR motifs, a structural characteristic of most disease resistance proteins described so far. RT-PCR was performed with primers flanking the regions homologous to disease resistance genes present in probes ASB-09, A75-10, and A45-10. RNA samples extracted from leaves, roots, and stems contained transcripts which were amplitied with primers derived from probe ASB-09, indicating that expression of ASB-09 is not organ-specific. The amplification products from the three organs were sequenced and presented perfect homology with part of the 789 bp ORF present in A53-09. The primers derived from A75-10 amplifled several bands with different sizes in the three organs analyzed indicating that more than one transcript homologous to A75-10 was present in the different organs. The primers derived from A45-1O did not detect any transcripts in the organs analyzed. / CPF do autor não encontrado

Introdução. A introdução dos antimicrobianos na prática clínica no século XX foi um grande avanço para a medicina. Entretanto, seu uso indiscriminado, tanto na medicina (humana e animal) quanto na agricultura e pecuária, possibilitou a seleção e disseminação de microrganismos resistentes. A transferência genética horizontal é um dos principais mecanismos responsáveis pela disseminação de genes que codificam resistência aos antimicrobianos, pois possibilita a transmissão da resistência de uma célula bacteriana (comensal ou patogênica) para outra. Genes codificadores de resistência a antimicrobianos de importância clínica são encontrados em microrganismos de origem ambiental, clínica e alimentar. Objetivo. O objetivo do presente estudo foi detectar genes que codificam resistência aos antibióticos -lactâmicos, Tetraciclinas e Quinolonas, em amostras de carne de frango, visando estudar a ocorrência da resistência antimicrobiana nesse produto considerado um alimento comum na dieta do homem. Materiais e Métodos. Foram utilizadas 30 amostras de carne de frango. Após a inoculação da carne de frango em caldo Luria 0,5 por cento , o DNA total das bactérias cultivadas nesse meio foi extraído por choque térmico e utilizado na pesquisa de genes de resistência pela técnica de PCR seguida de eletroforese em gel de agarose. Foi também realizada a pesquisa de Coliformes Termotolerantes por meio da técnica dos tubos múltiplos para estimar a qualidade higiênico sanitária das amostras. Resultados: Oito (26,7 por cento ) amostras apresentaram um ou mais genes codificadores de resistência à antimicrobianos -Lactâmicos, 28 (93,3 por cento ) amostras apresentaram um ou mais genes codificadores de resistência às Tetraciclinas e 28 (93,3 por cento ) amostras apresentaram um ou mais genes codificadores de resistência às Quinolonas. Conclusões: A realização deste estudo contribuiu com informações a respeito da circulação de genes de resistência na carne de frango e alerta as autoridades de Saúde Pública do Brasil quanto à disseminação da resistência bacteriana e a necessidade de mais estudos a respeito desse problema, já que esses são raros ou inexistentes no País. / Introduction. The introduction of antibiotics in clinical practice in the twentieth century was a breakthrough for medicine. However, their indiscriminate use in both medicine (human and animal) as in agriculture and livestock, enabled the selection and spread of resistant microorganisms. Horizontal gene transfer is a major mechanism responsible for the spread of genes encoding antimicrobial resistance, since it allows the transmission of resistance from one bacteria to another. Genes encoding resistance to antimicrobials of clinical importance are found in microorganisms present in food, environment and clinical sources. Objective. The aim of this study was to detect genes encoding resistance to -lactam antibiotics, tetracyclines and quinolones in meat samples from chicken samples, to study the occurrence of antimicrobial resistance in this product considered a common food in human diet. Materials and Methods. Thirty samples of chicken were used. After inoculation of chicken meat in Luria broth 0.5 per cent , the total DNA of the bacteria cultured was extracted by heat shock and used to search resistance genes by PCR followed by agarose gel electrophoresis. The search for thermotolerant coliforms was also conducted using the technique of multiple tubes in order to estimate the sanitary quality of the samples. Results: Eight (26,7 per cent ) of the samples had one or more genes encoding for resistance to -lactam antimicrobials, 28 (93,3 per cent ) had one or more genes encoding resistance to tetracyclines and 27 (93,3 per cent ) samples had one or more genes encoding resistance to quinolones. Conclusions: This study contributes to the scientific community and sanitary agencies, bringing information regarding the occurrence and distribution of resistance genes in chicken, alerting the Public Health authorities in Brazil about the spread of bacterial resistance and the need for more studies in this field, as these are rare or nonexistent in the country.

IIntrodução A utilização excessiva de antimicrobianos na medicina humana, veterinária e agricultura resultou no aparecimento da resistência bacteriana. Este fenômeno gera problemas de saúde pública que podem resultar na reemergência de doenças infecciosas. O uso de antibióticos, principalmente de forma profilática, tornou-se prática na aquicultura, como ocorre no Brasil, onde a regulamentação para o uso de medicamentos veterinários é ineficiente. Além disso, há evidências da transferência de organismos resistentes para humanos por meio do consumo de produtos de origem animal, quando, durante a fase de criação e produção destes foram administrados antibióticos. Objetivo Pesquisar a ocorrência de genes de resistência a antibióticos em filés de tilápia comercializados em supermercados do município de São Paulo SP. Material e Métodos Foram coletadas 10 amostras de filé de tilápia e realizada a pesquisa de coliformes termotolerantes como indicadores das condições higiênico-sanitárias do alimento. Em seguida, as amostras foram inoculadas em Caldo Lúria 0,5 por cento e o DNA total das bactérias cultivadas nesse meio foi extraído por meio de choque térmico para pesquisa de genes de resistência aos antibióticos -lactâmicos e tetraciclinas pela PCR. Os genes identificados pela PCR foram confirmados pelo sequenciamento. Resultados Em 100 por cento das amostras analisadas o resultado para coliformes termotolerantes foi < 3 NMP.g-1. Na pesquisa de genes de resistência a -lactâmicos, o gene blaOXY-5 foi detectado em 90 por cento das amostras, blaTEM-1b em 20 por cento , blaLEN-16 em 10 por cento , blaSHV-28 em 10 por cento , blaKPC-2 em 20 por cento , blaMOX-6 em 10 por cento e blaCphA em 60 por cento . Os genes de resistência a tetraciclinas identificados foram tetB em 10 por cento das amostras, tetC em 20 por cento , tetD em 80 por cento , tetE em 50 por cento , tetG em 60 por cento , tetO e tetS em 10 por cento cada e tetW em 20 por cento . Conclusões Em 90 por cento das amostras foi identificada a presença de genes de resistência aos antibióticos -lactâmicos e tetraciclinas, demonstrando uma grande circulação de resistência bacteriana na aquicultura e verificando a necessidade de legislação e fiscalização mais atuantes no controle do uso de antibióticos na aquicultura / IIntroduction The excessive use of antimicrobials in human medicine, veterinary medicine and agriculture has resulted in the emergence of bacterial resistance. This phenomenon creates public health problems that may result in the re-emergence of infectious diseases. The use of antibiotics, mainly prophylactically, has become a practice in aquaculture, including Brazil, where the legislation for the use of veterinary drugs is inefficient. Furthermore, there is evidence of transmission of resistant organisms to humans through consumption of animal products, especially when the antibiotics have been administered during the raising and production of these animals. Objective To search for the occurrence of antibiotics resistance genes in tilapia fillets commercialized in supermarkets in São Paulo city - SP. Material and Methods 10 tilapia fillet samples were collected and submitted to fecal coliform search as an indicator of the sanitary conditions of the food. Then, the samples were inoculated into Luria broth 0,5 per cent and the total DNA was extracted from growing bacteria by thermal shock for the search of resistance genes to -lactam and tetracyclines antibiotics by PCR. The genes identified by PCR were confirmed by sequencing. Results In 100 per cent of samples the result was < 3 NMP.g-1 for fecal coliform organisms. In the study of -lactam resistance genes, blaOXY-5 gene was detected in 90 per cent of samples, blaTEM-1b in 20 per cent , blaLEN-16 in 10 per cent , blaSHV-28 in 10 per cent , blaKPC-2 in 20 per cent , blaMOX-6 in 10 per cent and blaCphA in 60 per cent . The tetracyclines resistance genes identified were tetB in 10 per cent of samples, tetC in 20 per cent , tetD in 80 per cent , tetE in 50 per cent , tetG in 60 per cent , tetO and tetS in 10 per cent each and tetW in 20 per cent . Conclusions 90 per cent of the samples showed the presence of -lactam and tetracyclines resistance genes, demonstrating a high circulation of bacterial resistance in aquaculture and verifying the need for more active law and surveillance in controlling the use of antibiotics in aquaculture.

INTRODUÇÃO: As Aeromonas são bactérias distribuídas predominantemente em meio aquático. São consideradas patógeno emergente, podendo causar doenças em peixes como também no homem. Os problemas mais comuns são a gastrenterite no homem e morte em peixes. OBJETIVO: Este estudo foi desenvolvido para comparar a identificação fenotípica com a genotípica, e também para conhecer o perfil de resistência aos antibióticos em Aeromonas caviae, A. aquariorum, e A. sanarellii isoladas do ambiente aquático e a presença de genes de virulência e resistência. MATERIAL E MÉTODOS: O DNA das 24 cepas em estudo foi extraído por choque térmico e purificado utilizando CTAB. Foram realizadas as PCRs para a detecção dos genes de virulência e dos genes de resistência, após a realização do antibiograma. RESULTADOS: Foram identificadas 4 A. caviae das quais 3(75,0 por cento) apresentaram pelo menos um dos genes act, ast ou alt. Das 3 A. aquariorum, 1(33,3 por cento) apresentaram positividade para os genes act e ast. Entre os 5 isolados de A. sanarellii 1(50,0 por cento) possuíam os genes alt e ast. Seis isolados não foram posicionados taxonomicamente entre as espécies descritas de Aeromonas, e dentre essas um exemplar apresentou o gene alt. Em relação às enzimas MBL e AmpC foram obtidos respectivamente: 3(100 por cento) e 3(100 por cento) em A. aquariorum; 2(50,0 por cento) e 4(100 por cento) em A. caviae; 3(75,0 por cento) e 5(100 por cento) em Aeromonas spp.; 1(20 por cento) e 5(100 por cento) A. sanarellii; Nenhum isolado apresentou resultado positivo, no teste fenotípico, para a produção de ESBL. Com a realização da PCR foi detectada a presença de 5 amostras com gene tipo blaMOX, 21blaCPHA , 17 tipo blaTEM e 2 cepH. CONCLUSÃO: Os resultados sugerem que os isolados podem servir potencialmente como reservatórios de resistência aos antimicrobianos e ainda, que os isolados podem ser considerados patógeno emergentes e significativos para a saúde pública / INTRODUCTION: Aeromonas spp. is predominantly distributed in the aquatic environment. They are regarded as emerging pathogen, causing disease in fish but also in man. The most common problems are gastroenteritis in humans and death in fish. OBJECTIVE: This study was designed to compare phenotypic with genotypic identification, and also to know the profile of antibiotic resistance in Aeromonas caviae, A. aquariorum, and A. sanarellii isolated from aquatic environment and the presence of virulence genes and resistance. MATERIAL AND METHODS: DNA from 24 strains under study was extracted by thermal shock and purified using CTAB. PCR reactions were performed for the detection of virulence and resistance genes, after the completion of the antibiotic resistance test. RESULTS: We identified four A. caviae from which 3(75.0per cent) had at least one of the genes act, ast or alt. From 3 A. aquariorum, 1(33.3per cent) was positive for the genes act and ast. Among the five isolated A. sanarellii, 1(50.0per cent) had the alt and ast genes Six isolates were not positioned within taxonomically described species of Aeromonas, and among these only one strain presented the alt gene. Regarding the MBL and AmpC it was obtained respectively: 3(100per cent) and 3(100per cent) isolates from A. aquariorum; 2(50.0per cent) and 4(100per cent) isolates from A. caviae; 4(66.7per cent) and 3(50.0per cent) isolates from Aeromonas spp.; and 1(20per cent) and 5 (100per cent) isolates from A. sanarellii. None of the isolates showed positive results in the phenotypic test for ESBL production. The PCR reaction detected the presence of 5 strains with blaMOX-like gene; 21 with blaCPHA gene; 17 with blaTEM-like gene and 2 with cepH gene. CONCLUSION: These findings suggest that the isolates may serve as potential reservoirs of antimicrobial resistance and also that the isolates could be considered emerging pathogens of public health significance

INTRODUÇÃO: As Aeromonas são bactérias distribuídas predominantemente em meio aquático. São consideradas patógeno emergente, podendo causar doenças em peixes como também no homem. Os problemas mais comuns são a gastrenterite no homem e morte em peixes. OBJETIVO: Este estudo foi desenvolvido para comparar a identificação fenotípica com a genotípica, e também para conhecer o perfil de resistência aos antibióticos em Aeromonas caviae, A. aquariorum, e A. sanarellii isoladas do ambiente aquático e a presença de genes de virulência e resistência. MATERIAL E MÉTODOS: O DNA das 24 cepas em estudo foi extraído por choque térmico e purificado utilizando CTAB. Foram realizadas as PCRs para a detecção dos genes de virulência e dos genes de resistência, após a realização do antibiograma. RESULTADOS: Foram identificadas 4 A. caviae das quais 3(75,0 por cento) apresentaram pelo menos um dos genes act, ast ou alt. Das 3 A. aquariorum, 1(33,3 por cento) apresentaram positividade para os genes act e ast. Entre os 5 isolados de A. sanarellii 1(50,0 por cento) possuíam os genes alt e ast. Seis isolados não foram posicionados taxonomicamente entre as espécies descritas de Aeromonas, e dentre essas um exemplar apresentou o gene alt. Em relação às enzimas MBL e AmpC foram obtidos respectivamente: 3(100 por cento) e 3(100 por cento) em A. aquariorum; 2(50,0 por cento) e 4(100 por cento) em A. caviae; 3(75,0 por cento) e 5(100 por cento) em Aeromonas spp.; 1(20 por cento) e 5(100 por cento) A. sanarellii; Nenhum isolado apresentou resultado positivo, no teste fenotípico, para a produção de ESBL. Com a realização da PCR foi detectada a presença de 5 amostras com gene tipo blaMOX, 21blaCPHA , 17 tipo blaTEM e 2 cepH. CONCLUSÃO: Os resultados sugerem que os isolados podem servir potencialmente como reservatórios de resistência aos antimicrobianos e ainda, que os isolados podem ser considerados patógeno emergentes e significativos para a saúde pública / INTRODUCTION: Aeromonas spp. is predominantly distributed in the aquatic environment. They are regarded as emerging pathogen, causing disease in fish but also in man. The most common problems are gastroenteritis in humans and death in fish. OBJECTIVE: This study was designed to compare phenotypic with genotypic identification, and also to know the profile of antibiotic resistance in Aeromonas caviae, A. aquariorum, and A. sanarellii isolated from aquatic environment and the presence of virulence genes and resistance. MATERIAL AND METHODS: DNA from 24 strains under study was extracted by thermal shock and purified using CTAB. PCR reactions were performed for the detection of virulence and resistance genes, after the completion of the antibiotic resistance test. RESULTS: We identified four A. caviae from which 3(75.0per cent) had at least one of the genes act, ast or alt. From 3 A. aquariorum, 1(33.3per cent) was positive for the genes act and ast. Among the five isolated A. sanarellii, 1(50.0per cent) had the alt and ast genes Six isolates were not positioned within taxonomically described species of Aeromonas, and among these only one strain presented the alt gene. Regarding the MBL and AmpC it was obtained respectively: 3(100per cent) and 3(100per cent) isolates from A. aquariorum; 2(50.0per cent) and 4(100per cent) isolates from A. caviae; 4(66.7per cent) and 3(50.0per cent) isolates from Aeromonas spp.; and 1(20per cent) and 5 (100per cent) isolates from A. sanarellii. None of the isolates showed positive results in the phenotypic test for ESBL production. The PCR reaction detected the presence of 5 strains with blaMOX-like gene; 21 with blaCPHA gene; 17 with blaTEM-like gene and 2 with cepH gene. CONCLUSION: These findings suggest that the isolates may serve as potential reservoirs of antimicrobial resistance and also that the isolates could be considered emerging pathogens of public health significance

IIntrodução A utilização excessiva de antimicrobianos na medicina humana, veterinária e agricultura resultou no aparecimento da resistência bacteriana. Este fenômeno gera problemas de saúde pública que podem resultar na reemergência de doenças infecciosas. O uso de antibióticos, principalmente de forma profilática, tornou-se prática na aquicultura, como ocorre no Brasil, onde a regulamentação para o uso de medicamentos veterinários é ineficiente. Além disso, há evidências da transferência de organismos resistentes para humanos por meio do consumo de produtos de origem animal, quando, durante a fase de criação e produção destes foram administrados antibióticos. Objetivo Pesquisar a ocorrência de genes de resistência a antibióticos em filés de tilápia comercializados em supermercados do município de São Paulo SP. Material e Métodos Foram coletadas 10 amostras de filé de tilápia e realizada a pesquisa de coliformes termotolerantes como indicadores das condições higiênico-sanitárias do alimento. Em seguida, as amostras foram inoculadas em Caldo Lúria 0,5 por cento e o DNA total das bactérias cultivadas nesse meio foi extraído por meio de choque térmico para pesquisa de genes de resistência aos antibióticos -lactâmicos e tetraciclinas pela PCR. Os genes identificados pela PCR foram confirmados pelo sequenciamento. Resultados Em 100 por cento das amostras analisadas o resultado para coliformes termotolerantes foi < 3 NMP.g-1. Na pesquisa de genes de resistência a -lactâmicos, o gene blaOXY-5 foi detectado em 90 por cento das amostras, blaTEM-1b em 20 por cento , blaLEN-16 em 10 por cento , blaSHV-28 em 10 por cento , blaKPC-2 em 20 por cento , blaMOX-6 em 10 por cento e blaCphA em 60 por cento . Os genes de resistência a tetraciclinas identificados foram tetB em 10 por cento das amostras, tetC em 20 por cento , tetD em 80 por cento , tetE em 50 por cento , tetG em 60 por cento , tetO e tetS em 10 por cento cada e tetW em 20 por cento . Conclusões Em 90 por cento das amostras foi identificada a presença de genes de resistência aos antibióticos -lactâmicos e tetraciclinas, demonstrando uma grande circulação de resistência bacteriana na aquicultura e verificando a necessidade de legislação e fiscalização mais atuantes no controle do uso de antibióticos na aquicultura / IIntroduction The excessive use of antimicrobials in human medicine, veterinary medicine and agriculture has resulted in the emergence of bacterial resistance. This phenomenon creates public health problems that may result in the re-emergence of infectious diseases. The use of antibiotics, mainly prophylactically, has become a practice in aquaculture, including Brazil, where the legislation for the use of veterinary drugs is inefficient. Furthermore, there is evidence of transmission of resistant organisms to humans through consumption of animal products, especially when the antibiotics have been administered during the raising and production of these animals. Objective To search for the occurrence of antibiotics resistance genes in tilapia fillets commercialized in supermarkets in São Paulo city - SP. Material and Methods 10 tilapia fillet samples were collected and submitted to fecal coliform search as an indicator of the sanitary conditions of the food. Then, the samples were inoculated into Luria broth 0,5 per cent and the total DNA was extracted from growing bacteria by thermal shock for the search of resistance genes to -lactam and tetracyclines antibiotics by PCR. The genes identified by PCR were confirmed by sequencing. Results In 100 per cent of samples the result was < 3 NMP.g-1 for fecal coliform organisms. In the study of -lactam resistance genes, blaOXY-5 gene was detected in 90 per cent of samples, blaTEM-1b in 20 per cent , blaLEN-16 in 10 per cent , blaSHV-28 in 10 per cent , blaKPC-2 in 20 per cent , blaMOX-6 in 10 per cent and blaCphA in 60 per cent . The tetracyclines resistance genes identified were tetB in 10 per cent of samples, tetC in 20 per cent , tetD in 80 per cent , tetE in 50 per cent , tetG in 60 per cent , tetO and tetS in 10 per cent each and tetW in 20 per cent . Conclusions 90 per cent of the samples showed the presence of -lactam and tetracyclines resistance genes, demonstrating a high circulation of bacterial resistance in aquaculture and verifying the need for more active law and surveillance in controlling the use of antibiotics in aquaculture.