Submitted by Lúcia Brandão (lucia.elaine@live.com) on 2015-12-09T19:09:16Z No. of bitstreams: 1 Dissertacao - Tatiana do Nascimento Pedrosa.pdf: 4183067 bytes, checksum: b4d1e2566da171bad171597268e6c941 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2016-01-19T20:32:30Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertacao - Tatiana do Nascimento Pedrosa.pdf: 4183067 bytes, checksum: b4d1e2566da171bad171597268e6c941 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2016-01-19T20:33:36Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertacao - Tatiana do Nascimento Pedrosa.pdf: 4183067 bytes, checksum: b4d1e2566da171bad171597268e6c941 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-01-19T20:33:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao - Tatiana do Nascimento Pedrosa.pdf: 4183067 bytes, checksum: b4d1e2566da171bad171597268e6c941 (MD5) Previous issue date: 2013-02-25 / FAPEAM - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Amazonas / The continuous sun exposure is a major factor causing oxidative stress, stains and aging skin. The growth of the cosmetics market in the world, the growing interest of people for youthful skin, free of wrinkles and spots, has stimulated researchers to search for new assets for this purpose. Kojic acid is a well known and widely used depigmenting, mainly produced by fungi of the genus Aspergillus which has also been reported as an antioxidant and rejuvenating. However, kojic acid has disadvantages such as low stability and poor inhibition at low concentrations which encourages researchers to search for more active compounds or changes in the molecule in order to seek more active derivatives, stable and secure. Thus, this work aimed at studying the potential of nine Kojic acid derivatives synthesized by researchers at the Federal University of Pará - UFPA in order to obtain compounds with depigmenting activity, antioxidants and rejuvenating superior to those reported kojic acid. In this study we performed cytotoxicity assays, evaluation of antioxidant activity in vitro and enzyme in vitro inhibition of elastase, tyrosinase, collagenase and hyaluronidase. We evaluated the inhibition of tyrosinase activity and melanin production in B16F10 and alterations on tyrosinase gene expression. Of the nine derivatives studied, only three of them, kojato zinc, kojato copper (Cu-AK) and oleikojato copper (Cu-Ok), showed in vitro inhibitory activity on mushroom tyrosinase and were selected for the present study. The inhibition of tyrosinase in vitro kojato zinc (IC 50 - 30.4 ± 0.89µM) was higher than that presented by the kojic acid (IC50 - 60.2 ± 1.83µM) and its other derivatives Cu-AK (IC50 – 133.3 ± 6.59µM) and Cu-Ok (IC50 - 77.6 ± 4.31µM). These compounds were not cytotoxic to B16F10 cells and human dermal fibroblasts at 100 µM and showed no hemolytic potential at the concentration of 250 µM. The Kojic acid and derivatives, Cu-AK and Cu-Ok, were selected to evaluate the action on melanogenesis and enzymes that act on skin aging, as well as antioxidant activity. AK, AK-Cu and Cu-OK, apresenaram low antioxidant activity in the DPPH assay at 50 µg/mL, however, proved to be powerful metal chelating agents. In the studied concentration, 50 µg/mL, OK-Cu (76.0 ± 5.7%) showed chelating activity slightly higher than the AK (58.9 ± 5.63%) and AK-Cu (57.4 ± 5 24). The tyrosinase activity in B16F10 was strongly inhibited by Cu-AK (86.7%) and Cu- OK (92.5%), melanin production decreased by approximately 60.2% and 61.6% respectively. There were no changes in levels of gene expression of tyrosinase and there was no significant inhibition of other enzymes studied. Our results suggest that the action on melanogenesis observed for Cu-OK and Cu-AK occurs through inhibition of tyrosinase associated with an antioxidant mechanism. The compounds studied have great potential for use as cosmetic depigmenting agents. / A exposição solar contínua é um dos principais fatores causadores de estresse oxidativo, manchas e envelhecimento da pele.O crescimento do mercado de cosméticos no mundo, o interesse cada vez maior das pessoas por uma pele jovem, isenta de rugas e manchas, tem estimulado os pesquisadores na busca por novos ativos com este fim. O ácido kójico é um conhecido e bastante utilizado despigmentante, produzido principalmente por fungos do gênero Aspergillus que tem sido relatado também como antioxidante e rejuvenescedor. Entretanto, o ácido kójico apresenta desvantagens como baixa estabilidade e inibição insatisfatória em baixas concentrações o que estimula os pesquisadores na busca por compostos mais ativos ou modificações na molécula visando a busca de derivados mais ativos, estáveis e seguros. Nesse sentido, este trabalho teve como objetivo estudar o potencial de nove derivados do ácido kójico sintetizados por pesquisadores da Universidade Federal do Pará – UFPA, visando obter compostos com atividades despigmentantes, antioxidantes e rejuvenescedoras superiores às relatadas para o ácido kójico. No presente estudo foram realizados ensaios de citotoxicidade, avaliação da atividade antioxidante in vitro, inibição enzimática in vitro das enzimas elastase, tirosinase, colagenase e hialuronidase, inibição da atividade da tirosinase e da produção de melanina em células B16F10 e expressão gênica da tirosinase (Tyr). Dos nove derivados estudados, apenas três, kojato de zinco, kojato de cobre (Cu-AK) e oleikojato de cobre (Cu-Ok), apresentaram atividade inibitória in vitro sobre a tirosinase de cogumelo e foram selecionados para continuação deste trabalho. A inibição da tirosinase in vitrodo kojato de zinco (CI50 - 30,4 ± 0,89 µM) foi superior a apresentada pelo ácido kójico (CI 50 - 60,2 ± 1,83 µM) e seus outros derivados Cu-AK (CI50 - 133,3 ± 6,59 µM) e Cu-Ok (CI50 – 77,6 ± 4,31 µM). Estes compostos não foram citotóxicos em células B16F10 e fibroblastos de derme humana na concentração de 100 µM e não apresentaram potencial hemolítico em concentrações superiores a 250 µM. O Ácido kójico (AK) e os derivados, CuAK e Cu-Ok, foram selecionados para avaliação da ação sobre a melanogênese e enzimas que atuam no envelhecimento cutâneo, além da atividade antioxidante. AK, Cu-AK e Cu-OK, apresentaram atividade antioxidante inferior a 50 % no ensaio do DPPH a 50 µg/mL, no entanto, mostraram-se potentes agentes quelante de metais. Na concentração estudada, 50 µg/mL, Cu-OK(76,0 ± 5,7 %) apresentou atividade quelante levemente superior a do AK (58,9 ± 5,63 %) e Cu-AK (57,4 ± 5,24). A atividade da tirosinase em B16F10 foi fortemente inibida por Cu-AK (86,7 %) eCu-OK (92,5 %) a produção de melanina diminuiu em cerca de 60,2% e 61,6% respectivamente. Não houve alterações nos níveis de expressão gênica de tirosinase e não foi observada inibição significativa das demais enzimas estudadas. Nossos resultados sugerem que a ação sobre a melanogênese observada para Cu-AK eCu-OK ocorre através da inibição da tirosinase associada a um mecanismo antioxidante. Os compostos estudados apresentam grande potencial para uso cosmético como agentes despigmentantes.