O presente estudo foi dividido em quatro etapas distintas. A primeira etapa teve por objetivo avaliar a liberação de xilitol na saliva de humanos ao longo do tempo após aplicação de verniz controle e contendo 10% e 20% de xilitol. Um estudo cruzado foi realizado pela aplicação de 32 mg de cada verniz sobre as superfícies vestibulares de todos os incisivos centrais de 10 voluntários. Amostras salivares foram coletadas no baseline e após 5 min, 10 min, 15 min, 30 min, 1 h, 1 h 30 min, 2 h, 4 h e 8 h da aplicação dos vernizes para posterior análise da concentração de xilitol na saliva. Um estudo clínico foi realizado na segunda etapa com o objetivo de verificar a influência do verniz contendo xilitol a 20% sobre a contagem de estreptococos do grupo mutans provenientes de biofilme dentário. Semanalmente, 32 mg de verniz controle (grupo G1) ou verniz contendo xilitol a 20% (grupo G2) foram aleatoriamente aplicados sobre as superfícies vestibulares dos incisivos centrais de 67 crianças. Após quatro semanas de procedimento, amostras de biofilme dentário foram coletadas do terço cervical de todos os dentes presentes na cavidade bucal e a contagem relativa e absoluta dos microrganismos foi determinada. A terceira etapa objetivou analisar a influência do xilitol sobre a ultra-estrutura de Streptococcus mutans ATCC 33478 e Streptococcus sobrinus ATCC 25175. Além disso, a capacidade do xilitol e do flúor em promover estresse celular em S. mutans UA 159 geneticamente modificados (deleção do gene vicK) foi determinada na quarta etapa. As concentrações de xilitol na saliva (F=5,228, p=0,024) em diferentes tempos de coleta (F=18,24, p<0,0001) foram estatisticamente diferentes após aplicação dos vernizes contendo 10% e 20% do açúcar (etapa 1). Na etapa 2, contagens absolutas inicial e final de estreptococos do grupo mutans (Teste-t, p=0,4192) e de estreptococos totais (Teste-t, p=0,3506) não foram significativamente diferentes nos indivíduos pertencentes ao grupo G2. No entanto, uma redução significativa na porcentagem relativa inicial e final de estreptococos do grupo mutans em relação aos estreptococos totais foi observada (Teste-t, p= 0,0095). Xilitol a 20% promoveu alterações na morfologia de S. mutans ATCC 33478 e S. sobrinus, ATCC 25175, resultando em paredes celulares mais difusas e menos definidas, cápsulas 24 polissacarídicas mais dispersas e irregulares em relação ao grupo controle (etapa 3). Os tratamentos envolvendo xilitol a 1,25% e 2,5% mostraram-se capazes de produzir maior estresse celular à S. mutans geneticamente modificados quando comparados aos tratamentos com NaF a 22,5 mM e 45 mM em todos os tempos analisados (ANOVA a um critério, Teste de Tukey, p<0,05). Portanto, o verniz contendo xilitol pode ser considerado um interessante veículo para a administração do açúcar, uma vez que demonstrou propiciar uma liberação mais lenta do poliol na cavidade bucal. Além disso, a significativa redução da contagem relativa de estreptococos do grupo mutans em relação aos estreptococos totais pode auxiliar na prevenção de cárie dentária. Este estudo também demonstrou a habilidade do xilitol em produzir alterações ultra-estruturais de S. mutans ATCC 33478 e S. sobrinus, ATCC 25175, além de ser capaz de produzir estresse celular em S. mutans UA159 com deleção do gene vicK. / This study was divided in four distinct stages. The first one aimed to assess the xylitol release in human saliva along time after application of control, 10% or 20% xylitol varnishes. A cross-over design study was performed by application of 32 mg of each varnish on buccal surfaces of all incisors of 10 volunteers. Salivary samples were collected to analyze the xylitol concentration in baseline and after 5 min, 10 min, 15 min, 30 min, 1 h, 1 h 30 min, 2 h, 4 h and 8 h from varnishes application. A clinical study was executed in the second stage aiming observe the influence of 20% xylitol varnish on mutans streptococci counts from dental plaque. Weekly, 32 mg of control varnish (group G1) or 20% xylitol varnish (group G2) were randomly applied on buccal surfaces of central incisors of 67 children. After 4 weeks of procedures, dental plaque samples were collected from cervical of all teeth and relative and absolute counts of microorganisms were determined. The third stage aimed to analyze the effect of xylitol on the ultrastructure of Streptococcus mutans ATCC 33478 and Streptococcus sobrinus ATCC 25175. Moreover, the capacity of xylitol and fluoride to promote cellular stress in S. mutans UA 159 knockout vick gene was determined in the fourth stage. Salivary xylitol concentrations (F=5,228, p=0,024) in different collection times (F=18,24, p<0,0001) were statistically different after 10% and 20% varnishes application (stage 1). In stage 2, initial and final absolute mutans streptococci (Teste-t, p=0,4192) and total streptococci counts (Teste-t, p=0,3506) did not differ significantly in volunteers from group G2. However, a significant reduction of initial and final relative mutans streptococci counts was observed in relation to total streptococci (Teste-t, p= 0,0095). 20% xylitol promoted alterations in morphology of S. mutans ATCC 33478 and S. sobrinus, ATCC 25175, resulting in more diffuse and less defined cellular wall, more dispersive and irregular polysaccharidic capsules in comparison to control group (stage 3). 1.25% and 2.5% xylitol treatments were able to produce higher cellular stress to genetically modified S. mutans when compared to 22.5 mM and 45 mM NaF treatments throughout the time (ANOVA, Tukeys test, p<0.05). Therefore, xylitol varnish can be regarded as interesting vehicle to administer the polyol because it achieved a slower xylitol release into the oral cavity. Furthermore, a significant reduction of relative mutans streptococci counts in relation to total streptococci can aid in prevention of dental caries. The present study also demonstrated the ability of xylitol in producing ultrastructural alterations in S. mutans ATCC 33478 and S. sobrinus, ATCC 25175, besides generating cellular stress to S. mutans UA159 knockout vicK gene.

O surgimento de resistência bacteriana aos tratamentos convencionais tem proporcionado o desenvolvimento de novas modalidades terapêuticas para o tratamento e/ou controle da cárie dentária. Nesse contexto, a utilização da terapia fotodinâmica (TFD) é sugerida como alternativa para a inativação de microrganismos patogênicos envolvidos na gênese da cárie. O objetivo do presente estudo foi avaliar in vitro o efeito antimicrobiano da terapia fotodinâmica (TFD) sobre três culturas de S. mutans: uma cepa padrão de S. mutans (ATCC 25175) e dois isolados clínicos (43513 e 47513) oriundos da saliva de crianças. O corante (C) azul de orto-toluidina (TBO) foi utilizado associado à iluminação com LEDs (L) no comprimento de onda vermelho. Estas suspensões foram transferidas para placas de 96 orifícios, tratadas com quatro concentrações de TBO (0,25; 2,5; 25 e 250 µg/mL) e expostas a quatro dosimetrias (12; 24; 36 e 48 J/cm2) constituindo o grupo C+L+ (TFD). Suspensões adicionais foram tratadas somente com as quatro concentrações de TBO (C+L-) ou apenas com as quatro dosimetrias (C-L+). Amostras não submetidas ao tratamento com a fonte de luz nem ao corante, constituíram a condição C-L- (controle positivo). Alíquotas de 100 µL de cada orifício foram transferidas para tubos de ensaio para se verificar a presença ou ausência de crescimento microbiológico. Adicionalmente, alíquotas de 25 µL do grupo correspondente a TFD (C+L+) foram semeadas em placas de Petri, as quais foram incubadas a 370C por 48 horas para posterior visualização de halos de inibição e/ou crescimento microbiológico correspondente a efetividade ou ineficiência da TFD, respectivamente. Com o intuito de confirmar os achados, essas mesmas amostras foram submetidas à análise pela microscopia confocal a laser. Os resultados demonstraram que a TFD, em determinadas condições experimentais, foi efetiva no controle do crescimento microbiológico das espécies de S. mutans usadas neste estudo. A concentração mínima de TBO necessária para a inativação in vitro das três culturas de S. mutans foi de 2,5 µg/mL associada à dosimetria mínima de 24 J/cm2 da fonte de luz LED utilizada no estudo. / The increase of bacterias resistance to conventional treatment resulted in the development of new therapeutic modalities for dental caries treatment and/or prevention. In this field, the use of photodynamic therapy (PDT) is suggested as an alternative for inactivation of patogenic microrganisms involved in the etiology of tooth decay. The aim of this study was to evaluate in vitro the antimicrobian effect of the photodynamic therapy (PDT) on bacteria suspensions of S. mutans (ATCC 25175) and two suspensions (43513 and 47513) from infants saliva. Toluidine blue O (TBO) (D) and a red light-emmiting diodes (LEDs) (L) were used in association. Samples were inserted into 96 well-plate and treated with four TBO concentrations (0.25; 2.5; 25 e 250 µg/mL) and exposed to four dosimetries (12; 24; 36 e 48 J/cm2) defining the D+L+ group (PDT). Additional samples were treated only with TBO (D+L-) or only with red LEDs (D-L+). The treatment without dye and none red LED constituted the D-L- condition (positive control). Aliquots from D+L+ (TFD group) were inserted in Petri dishes, which were incubated at 370C for 48 hours. Posterior analysis of microbiologic growth, corresponding to PDT effectivity, was conducted. These samples were also submitted to laser confocal microscopy analysis for microbiologic data confirmation. The results showed PDT effectiveness for S. mutans inactivation in particular conditions. It was demonstrated that PDT was efficient to kill S. mutans species in the presence of the TBO at 2.5 µg/mL (minimum concentration) associated to 24 J/cm2 dosimetry.

Orientador: Regina Maria Puppin Rontani / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-10-05T18:49:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Correr_AnaRosaCosta_D.pdf: 3218831 bytes, checksum: f30505368b581fed81781723b234fbd9 (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: O propósito deste estudo foi avaliar a influencia de diferentes tipos de substrato (Capitulo 1) e tratamento com etanol 100% (Capitulo 2) ou digluconato de clorexidina a 2% (CHX) (Capitulo 3) na resistência e longevidade da união compósito/dentina, apos diferentes períodos de armazenagem. Os dentes humanos hígidos foram divididos em 3 grupos, de acordo com o substrato dentinario: (Sd) dentina hígida, (Ci) dentina infectada (manutenção da carie) e (Ca) dentina afetada (remoção parcial de carie). As superfícies oclusais de terceiros molares hígidos foram removidas com disco diamantado dupla face sob refrigeração, a fim de expor a superfície plana dentinaria hígida, a qual foi submetida ao desenvolvimento da lesão de carie artificial com S. mutans. Brocas esféricas foram usadas para remover parcialmente o tecido cariado pigmentado, ate que permanecesse apenas a dentina levemente corada (Ca). Em seguida, os dentes foram novamente subdivididos, de acordo com o tratamento da superfície: Grupo Controle (Ct) - nenhum tratamento (Capitulo 1); Ct e (Et) - aplicação de etanol 100% (Capitulo 2); e, Ct e (CHX) - aplicação de digluconato de clorexidina a 2% (Capitulo 3). O substrato foi condicionado com acido fosfórico a 35% por 15 s, lavado por 30 s e seco com leve jato de ar. CHX ou Et foram aplicados apos o condicionamento acido. O sistema adesivo Adper Single Bond 2 (3M ESPE) foi aplicado de acordo com as recomendações do fabricante e fotoativado por 20 s com a fonte de aparelho de luz XL 2500. Sobre a superfície de união foram inseridos incrementos de 2 mm do compósito Z350 (3M ESPE), polimerizados usando a fonte de luz XL 2500 por 40 s, ate confeccionar um bloco com 6 mm de altura. As amostras foram armazenadas em água destilada a 37o C por 24 horas. Apos, os dentes foram seccionados perpendicularmente a área de união, de modo a obter palitos com área de secção transversal de 1mm2. Os palitos foram armazenadas em três períodos: 24 horas, 6 meses e 1 ano. Em seguida, as amostras foram submetidas ao ensaio de resistência de união a microtração usando a maquina de ensaio EZ test (EZS, Shimadzu) a velocidade de 0,5 mm/minuto. Os dados foram submetidos a Analise de Variância e ao teste de Tukey HSD (?=0,05). A união em Sd mostrou valores de resistência de união significativamente maior quando comparado a Ca e Ci. As amostras armazenadas nos períodos de 6 meses e 1 ano resultou na diminuição da resistência de união, independente do tipo de substrato e/ou tratamento. O etanol não foi efetivo em melhorar a resistência de união para os três substratos de dentina avaliados. A clorexidina não influenciou na resistência de união nos períodos de armazenagem avaliados, independente dos substratos / Abstract: The aim of this study was to evaluate the effect of 2% chlorhexidine digluconate (CHX) and 100% ethanol wet-bonding (Et) on the degradation of the adhesive system bond strength in sound or artificial caries-affected/infected dentin after different storage times under microtensile test (_TBS). The sound teeth were divided into 3 groups, according to dentin substrates: sound dentin, caries-infected dentin (maintained of caries) and caries-affected dentin (partial removal of caries). Non-carious human third molars had their occlusal enamel removed with a slow speed diamond saw, under copious water-cooling to expose a flat-surfaced sound dentin, which was submitted to the microbiological challenge (S. mutans) for the development of artificial caries. Spherical drill was used to remove soft pigmented carious tissue till hard and slightly pigmented dentin remains (Ca). After, the teeth will be assigned into 3 subgroups according to surface treatment: water wet- bonding (Ct) (Chapter 1); Ct and 100% ethanol application (Et) (Chapter 2); and, Ct and chlorhexidine digluconate 2% application (CHX) (Chapter 3). The substrate will was etched with 35% phosphoric acid gel for 15 s, rinsed for 30 s with tap water and dried with oil/water-free air. The CHX or Et was applied for 60 s, just after etching with 35% phosphoric acid gel. The adhesive system Adper Single Bond 2 (3M ESPE) was applied according to the manufacturer's instruction and polymerized for 10 s by a light-curing unit XL 2500. The bonded surfaces were coupled with a composite resin Filtek Z350 (3M ESPE) applied in 2 mm increments and polymerized using a curing unit XL 2500 (3M ESPE) for 40 s for each increment and to build 6 mm thick block. The restored teeth were stored in distilled water at 37o C for 24 h. After this period, the restored teeth were longitudinally sectioned across the bonded interface to produce a series of 1.0mm2 beams. The specimens were then submitted to three storage periods: 24 hours, 6 months, or 1 year. Afterwards, the storage periods, the specimens were submitted to a microtensile bond strength (_TBS) using EZ test machine (EZS, Shimadzu) at a crosshead speed of 0.5 mm/min until failure. Data were submitted to ANOVA and Tukey's HSD test (?=0.05). The bonding with sound dentin showed _TBS values significant higher when compared to caries-affected and caries-infected dentin. The 6 months and 1 year storage periods resulted in decreased bond strengths for all dentin conditions and/or treatment. The ethanol was not effective to improve the _TBS for the three dentin substrates evaluated. The CHX did not affect the 24- hour, 6 and 12 months _TBS, independent of the tested dentin substrates / Doutorado / Materiais Dentarios / Doutora em Materiais Dentários

Orientadora: Cristiane Duque / Banca: Ana Claudia Okamoto / Banca: Marcelle Danelon / Banca: Natália Leal Vizoto / Banca: Thiago Cruvinel da Silva / Resumo: Streptococcus mutans é conhecido por sua capacidade de aderir, colonizar e formar biofilme nas superfícies dentárias. Para sobreviver na cavidade bucal, S. mutans coordena a expressão de vários genes em resposta aos fatores ambientais, como na presença de agentes antimicrobianos. Os objetivos deste estudo foram: 1) avaliar a influência de concentrações subinibitórias (sub-MIC) de fluoreto de sódio (NaF) e digluconato de clorexidina (Chx) sobre o crescimento planctônico; 2) avaliar a influência desses antimicrobianos em concentrações sub-MIC na formação de biofilme das cepas de S. mutans; 3) avaliar a expressão dos genes covR e vicR de cepas de S. mutans expostas aos sub-MIC de Chx e NaF. Cepas de S. mutans padrão (ATCC 25175 e UA159) e isolada de criança com cárie precoce da infância (3FV2) foram reativadas em BHI caldo e expostas a Chx e NaF para determinação da MIC e MBC. A partir desses valores, curvas de crescimento foram obtidas para as cepas de S. mutans expostas a concentrações sub-MIC de Chx (0,25 x MIC a 0,75 x MIC) e NaF (0,125 x MIC a 0,75 x MIC). Ensaios de biofilme foram realizados para as cepas de S. mutans expostas ou não aos sub-MIC dos agentes antimicrobianos (0,25 x MIC; 0,5 x MIC e 0,75 x MIC). A expressão dos genes covR e vicR foram avaliadas por PCR quantitativo para as cepas de S. mutans em condições planctônicas expostas a 0,125/0,25/0,5 x MIC de NaF e Chx. Os dados obtidos foram submetidos à análise estatística considerando p≤0,05. Os resultados mostra... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Streptococcus mutans is known for its ability to adhere, colonize and form biofilm on dental surfaces. To survive in the oral cavity, S. mutans coordinates the expression of several genes in respon se to environmental factors, such as in the presence of antimicrobial agents. The objectives of this study were: 1); to evaluate the influence of subinhibitory concentrations (sub - MIC) of chlorhexidine (Chx) and sodium fluoride (NaF) on planktonic growth 2) to evaluate the influence of sub - MIC of these agents on biofilm formation of S. mutans strains; 3) to evaluate the expression of the covR and vicR genes of S. mutans strains exposed to sub - MIC of Chx and NaF. Standard strains of S. mutans (ATCC 25175 or UA159) and clinical strain isolated from child with caries (3FV2) were reactivated in BHI broth and exposed to Chx and NaF for determination of MIC and MBC. From these values, growth curves were obtained for S. mutans strains exposed to sub - MIC concentrations of Chx (0.25 x MIC to 0.75 x MIC) and NaF (0.125 x MIC to 0.75 x MIC). Biofilm assays were performed for S. mutans strains exposed or not to the sub - MIC of antimicrobial agents (0.25, 0.5 and 0.75 x MIC). Expression of covR and vicR gen es were evaluated by quantitative PCR for strains of S. mutans under plankton conditions exposed to 0.125 / 0.25 / 0.5 x MIC of NaF and Chx. The data were submitted to statistical analysis considering p≤0.05. The results showed that Chx and NaF sub - MIC aff ected planktonic growth of S. mutans strains in a dose - dependent manner. Sub - MIC of Chx only affect the biofilm formation for ATCC 25175, and, NaF values above 0.5 x MIC caused reduction of the biofilm growth for all tested strains, in a dose - dependent m anner, except for ATCC 25175, which was also affected by all concentrations evaluated. Gradual sub - MIC concentrations (Complete abstract electronic access below) / Doutor

Thesis (doctoral)--Göteborgs Universitet, 1982. / Extra t.p. with thesis statement inserted. Includes the author's published papers. Includes bibliographical references.

Thesis (Ph. D.)--Indiana University School of Dentistry, 1998. / eContent provider-neutral record in process. Description based on print version record. Includes bibliographical references.

Thesis (doctoral)--Göteborgs Universitet, 1982. / Extra t.p. with thesis statement inserted. Includes the author's published papers. Includes bibliographical references.

Thesis (doctoral)--Karolinska Institutet, Stockholm, 1988. / Extra t.p. with thesis statement inserted. Includes bibliographical references.

Thesis (doctoral)--Göteborgs Universitet, 1982. / Extra t.p. with thesis statement inserted. Includes the author's published papers. Includes bibliographical references.

Thesis (doctoral)--University of Göteborg, 1991. / Extra t.p. with thesis statement inserted. Includes bibliographical references.