Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / The aim of this study was to evaluate the efficacy of the flavonoid epigallocatechin-3-gallate (EGCG) in concentrations of 0.5%, 1% and 2% as an antimicrobial solution in artificially carious dentin, with 2% chlorhexidine and 0.9% saline solution as controls. Twenty-five slabs of human dentin (4 mm x 4 mm) were immersed for five days in Brain Heart Infusion broth (BHI-broth) inoculated at first day with Streptococcus mutans UA159 (Batch Culture Model). On the fifth day of the experiment, the blocks were randomly divided into five groups: group I - negative control - 0.9% saline solution, group II - positive control - 2% chlorhexidine, group III - 0.5% EGCG, group IV - 1% EGCG, group V - 2% EGCG. Each slab was subjected to 15 Âl of the tested solution for 60 seconds. After treatments, artificially carious dentin was removed from the dentin slabs and analyzed by counting colony forming units (CFUs). All experiments were performed in triplicate and the data obtained in CFUs mean values converted to log base-10. The statistical tests used were analysis of variance (ANOVA) followed by Tukey test. There was no statistical difference between EGCG concentrations and saline (p > 0.05). Furthermore, there is no statistical difference between EGCG concentrations (p > 0.05). However, there was statistically significant difference between chlorhexidine and the other groups (p < 0.05). From the data obtained in this study, is possible to conclude that the substance tested is not effective on elimination of pathogen S. mutans when used in a concentration of 0.5%, 1% and 2% in artificially carious dentin. / O objetivo do presente estudo foi avaliar a eficÃcia do flavonÃide epigalocatequina-3-galato (EGCG) nas concentraÃÃes de 0,5%, 1% e 2% como soluÃÃo antimicrobiana em dentina artificialmente cariada, tendo a clorexidina 2% e a soluÃÃo salina 0,9% como controles. Vinte e cinco blocos de dentina humana (4 mm x 4 mm) foram imersos por cinco dias em BHI-caldo inoculado com Streptococcus mutans UA159 no primeiro dia do experimento. No quinto dia do experimento, os blocos foram aleatoriamente distribuÃdos em cinco grupos: grupo I â controle negativo â soluÃÃo salina 0,9%; grupo II â controle positivo â clorexidina 2%; grupo III â EGCG 0,5%; grupo IV â EGCG 1%; grupo V - EGCG 2%. Cada bloco recebeu tratamento de 15 Âl da soluÃÃo testada, que permaneceu em contato com o bloco por 60 segundos. ApÃs os tratamentos, amostras dentinÃrias foram removidas com emprego de lÃmina de bisturi e foram analisadas a partir da contagem de UFCs (unidades formadoras de colÃnias). Os experimentos foram realizados em triplicata e os dados, obtidos em UFCs foram convertidos em log base-10. Os testes estatÃsticos empregados foram anÃlise de variÃncia (ANOVA), seguida de Teste de Tukey. NÃo houve diferenÃa estatÃstica entre as concentraÃÃes de EGCG empregadas e a soluÃÃo salina (p > 0,05). AlÃm disso, nÃo houve diferenÃa estatÃstica entre as concentraÃÃes de EGCG (p > 0,05). No entanto, houve diferenÃa estatisticamente significativa entre a clorexidina e os demais grupos (p < 0,05). Conclui-se, a partir dos dados encontrados, que a substÃncia investigada nÃo deve ser empregada em preparos cavitÃrios com a finalidade de eliminaÃÃo de patÃgenos, visto que nÃo se mostrou eficaz como antimicrobiano nas concentraÃÃes testadas.

No tratamento de lesões profundas de cárie, a Remoção Parcial de Dentina Cariada (RPDC) e restauração tem sido proposta como alternativa conservadora para evitar perda de tecido dentário e exposição pulpar. Existe uma hipótese de que uma seleção de bactérias ocorre abaixo de restaurações devido a um acesso limitado de nutrientes. No entanto, há falta de conhecimento sobre a diversidade e potencial de virulência das bactérias cariogênicas residuais seladas abaixo de restaurações sobre dentina cariada. O objetivo deste estudo foi caracterizar Streptococcus mutans e lactobacilos isolados de dentina cariada antes e após o estresse nutricional por selamento da cavidade. S. mutans e lactobacilos foram obtidos por cultivo da dentina cariada de lesões cavitadas de quatro e seis pacientes, respectivamente. Duas amostras de dentina cariada foram coletadas e cultivadas por paciente: uma antes e outra após três meses de selamento da cavidade. Colônias de S. mutans e lactobacilos preditos foram selecionadas, isoladas e analisadas por coloração de Gram. Genes “housekeeping” foram utilizados na identificação da espécie (gtfB para S. mutans e pheS/rpoA/groEL/16SrRNA para lactobacilos) e a técnica de AP-PCR foi utilizada para genotipagem. A análise fenotípica (produção de ácido e de tolerância ao ácido) foi realizada. Um total de 48 isolados representativos de S. mutans foram analisados (31 antes e 17 após estresse nutricional por meio do selamento). O número de genótipos diferentes de S. mutans encontrado foi de nove e seis antes e após selamento, respectivamente. Pelo menos um dos genótipos encontrados antes do selamento foi também encontrado na dentina após o estresse nutricional por meio do selamento. Em relação aos lactobacilos, analisou-se 86 cepas, 41 antes e 45 após estresse nutricional. L. paracasei e L. rhamnosus prevaleceram e apenas quatro isolados não pertenciam a estas espécies. Um total de 27 e 15 genótipos de lactobacilos diferentes foram encontrados antes e após selamento, respectivamente. Não houve diferença entre isolados de S. mutans e lactobacilos de dentina cariada antes e após o estresse nutricional na produção de ácido ou tolerância ao ácido. L. paracasei apresentaram menor valor de pH em 48h de crescimento. Em conclusão, a diversidade genotípica diminuiu após o estresse nutricional, mas a virulência de S. mutans e lactobacilos permaneceu a mesma. L. rhamnosus foi selecionado após o estresse nutricional. Algumas espécies de lactobacilos apareceram após o selamento, sugerindo pressão seletiva no sítio antes do selamento pela alta disponibilidade de nutrientes. Mais estudos avaliando outras características de virulência são necessários para entender melhor a cariogenicidade das cepas residuais seladas abaixo de restaurações e para compreender a resistência de L. rhamnosus a este sítio. / A hypothesis exists that a selection of bacteria occurs underneath restoration due to a limited access of nutrients. However, there is a lack of evidence regarding their role in the progression of carious process beneath restorations after Partial Dentin Caries Removal. It still unclear if the diversity and the virulence potential of the sealed bacteria remain the same after sealing. The aim of this study was to characterize Streptococcus mutans and Lactobacillus species isolated from caries dentin before and after starvation stress by cavity sealing. S. mutans and lactobacilli were obtained by culture of carious dentin from four and six patients, respectively. Two carious dentin samples were collected and cultured per patient: 1st before and 2nd after three months of cavity sealing. Presumptive S. mutans and lactobacilli were selected, isolated and analyzed by Gram staining. Housekeeping genes sequencing were used to the species identification (gtfB for S. mutans and pheS/rpoA/groEL/16SrRNA for lactobacilli) and Arbitrary Primer-PCR (AP-PCR) was used for genotyping. Phenotypic analysis (acid production and acid tolerance) was performed. A total of 48 representative S. mutans isolates were genotyped (31 before and 17 after the sealing). The number of different genotypes identified was nine and six before and after sealing, respectively. At least one of the genotypes found before the sealing was also found on dentin after the sealing in all patients. Regarding lactobacilli, it was analyzed 86 strains, 41 before and 45 after starvation stress by sealing. L. paracasei and L. rhamnosus prevailed and only four isolates did not belong to these species. A total of 27 and 15 different genotypes were found before and after sealing, respectively. There was no difference between isolates from carious dentin before and after starvation stress, neither regarding acid production or acid tolerance, although L. paracasei showed lower pH value in 48 h of growth. In conclusion, genotypic diversity of S. mutans decreased after starvation stress, but the virulence traits of S. mutans remained unchangeable. L. paracasei and L. rhamnosus were the most prevalent species of this genus, besides L. rhamnosus was selected after starvation stress. There was a decreased genotypic diversity of lactobacilli at the strains level and an increased diversity of species in sealed carious dentin. More studies evaluating other virulence traits are necessary to better understand the cariogenicity of the residual strains underneath restorations and to understand the resistance of L. rhamnosus to this site.

Orientadores: Jaime A. Cury, Hyun Koo / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-03T18:51:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Hayacibara_MitsueFujimaki_D.pdf: 743722 bytes, checksum: a03e5c389ce657201cdf9b2b48b9185b (MD5) Previous issue date: 2004 / Doutorado

Orientador: Reginaldo Bruno Gonçalves / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-03T16:11:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Klein_MarliseInez_M.pdf: 917669 bytes, checksum: d317b17fbe041f50859121aa604f6bed (MD5) Previous issue date: 2003 / Resumo: Os objetivos deste estudo foram avaliar, a partir do momento da colonização inicial da cavidade bucal de crianças por S. mutans e S. sobrinus, a diversidade e a estabilidade de genótipos destas espécies, assim como investigar a ocorrência de transmissão vertical de mãe para filho e/ou horizontal entre crianças que compartilham o mesmo ambiente. Os voluntários foram 16 pares mãe-filho, onde as crianças foram acompanhadas por 19,2 meses em média (menor e maior período de acompanhamento, foram, respectivamente 14,8 e 24,7 meses). Amostras foram coletadas bimestralmente de quatro sítios distintos: saliva, dorso da língua, rodete gengival e placa bacteriana (quando da presença de dentes). Amostras de saliva das mães foram coletada em uma única ocasião. As amostras foram cultivadas sob condições adequadas em meio de cultura MSB (mitis salivarius bacitracina). Em cada colheita foram isoladas colônias com morfologia típica, as quais foram identificadas pela técnica da reação em cadeia da polimerase (PCR). O perfil genético dos isolados identificados como S. mutans e S. sobrinus foi analisado pela técnica de reação em cadeia da polimerase usando primers arbitrários (AP-PCR), utilizando-se os primers arbitrários OPA-02 e OPA-13. Os resultados mostraram que no momento da aquisição, as crianças avaliadas estavam colonizadas por 1 a 4 genótipos distintos de S. mutans (n=16 crianças) e apenas 1 genótipo de S. sobrinus (n=12 crianças). Ocorreu transmissão vertical de S. mutans e de S. sobrinus em 13 e 5 dos 16 pares avaliados, respectivamente. Entretanto, não se detectou ocorrência de transmissão horizontal entre as crianças que compartilhavam o mesmo ambiente. Na avaliação longitudinal observou-se um aumento do número de genótipos que colonizavam a cavidade bucal das crianças, sendo que alguns genótipos de S. mutans e S. sobrinus permaneceram estáveis e outros, idênticos ou não aos da mãe, foram adquiridos. Concluí-se que ocorreu estabilidade e também rotatividade de genótipos de S. mutans e S. sobrinus na cavidade bucal de crianças durante o período avaliado; e que a principal fonte das espécies avaliadas foi a maternal, porém, rotas de transmissão alternativas parecem existir / Abstract: The aims of this study were to evaluate the genotypic diversity and stability of S. mutans and S. sobrinus strains isolated from children oral cavity at time of initial acquisition; and analyze the pattern of vertical transmission of these bacteria from mother to their child among children attending public nursery schools. The subjects were motherchild pairs, and the children were monitored through 19.2 mean months (the smaller and the higher follow-up examination time were 14.8 and 24.7 months, respectively). Samples of four different sites (saliva, tongue dorsum, gengiva, and dental plaque, if teeth were present) were collected bimonthly. Saliva samples from the mothers were collected once. The samples were isolated and cultivated in MSB medium (agar mitis salivarius with bacitracina). Typical morphotype colonies were isolated and submitted to amplification by the technique of polymerase chain reaction (PCR) for identification. The arbitrarily primed polymerase chain reaction (AP-PCR) method was performed with two arbitrary primers, OPA-02 and OPA-13, for the genotypic characterization of S. mutans and S. sobrinus. At the time of acquisition, the children harbored between 1 to 4 distinct genotypes of S. mutans (n=16 children) and only 1 genotype of S. sobrinus (n=12 children). The presence of matching genotypes of S. mutans and S. sobrinus in 13 and 5 from 16 mother-child pairs, respectively, suggested vertical transmission. No horizontal transmission has observed since no matching of S. mutans and/or S. sobrinus genotypes was observed between children attending the same nursery. This longitudinal study showed an increase in genotypic diversity in the oral cavity of children S. mutans and S. sobrinus genotypes, that were or not similar to the mothers have persisted during follow-up and newly strains were also acquired. In conclusion, S. mutans and S. sobrinus stability and turnover occur in children oral cavity during this study; and the major source of this microorganism was maternal, however alternative transmission sources may exist / Mestrado / Microbiologia e Imunologia / Mestre em Biologia Buco-Dental

Les bactéries sont continuellement exposées à un danger, la prédation par des bactériophages. Pour se défendre, elles ont développé une grande variété de mécanismes. Parmi ceux-ci, on retrouve CRISPR-Cas (« clustered regularly interspaced palindromic repeats »), un système adaptatif que possèdent environ 45% des bactéries. Une caractéristique unique du système CRISPR-Cas est qu’il constitue en quelque sorte la mémoire de l’hôte. Par exemple, le système peut emmagasiner des petits fragments d’un génome viral, appelés espaceurs, et les introduire dans son CRISPR. Cette mémoire lui permet de se défendre contre une réinfection par le même virus ou un virus hautement apparenté. Par contre, malgré que l’acquisition de nouveaux espaceurs semble fréquente dans la nature, ce phénomène n’est que très rarement observé en conditions de laboratoire. Néanmoins, quelques bactéries font exception à la règle et l’une d’entre elles est Streptococcus mutans. Dans le cadre de cette étude, l’interaction entre la souche S. mutans P42S et le bactériophage virulent M102AD a été analysée en détail. De plus, certaines applications potentielles du système CRISPR-Cas ont également été approfondies. Le premier objectif de cette thèse était de caractériser le système CRISPR-Cas de S. mutans P42S au niveau moléculaire et de déterminer son rôle dans les interactions phage-bactérie. Le deuxième objectif était d’établir le potentiel de la protéine Cas9 de S. mutans P42S (SmutCas9) comme nouvel outil d’édition génomique. S. mutans P42S possède un système CRISPR-Cas de type II-A. Bien que ce type de système soit probablement le plus étudié, celui de S. mutans P42S présente plusieurs caractéristiques uniques lui permettant de se démarquer. En effet, ce dernier reconnaît un PAM différent de ce qui était auparavant connu pour cette espèce bactérienne, l’acquisition simultanée de multiples espaceurs semble fréquente, ce qui est probablement dû au phénomène de « priming ». Malgré le rôle de CRISPR-Cas dans la défense antivirale, S. mutans P42S dispose d’autres mécanismes de défense contre les phages. Des cellules mutantes sont résistantes aux phages en empêchant l’adsorption de particules virales à la cellule ont notamment été observées. D'autres mécanismes sont assurément impliqués dans la défense antivirale de S. mutans. Finalement, SmutCas9 s’est montrée efficace dans l’édition de génomes viraux et elle apparaît comme une candidate à explorer pour cette application. / Bacteria are exposed to the constant threat of viral predation. To defend themselves, bacteria have developed a wide variety of different mechanisms. One of these mechanisms is CRISPR-Cas (clustered regularly interspaced palindromic repeats), an adaptive immune mechanism found in approximately 45% of bacteria. A unique feature of CRISPR-Cas systems compared to other antiviral defence mechanisms is that it has a memory. The system is capable of remembering previous viral encounters and protects the bacterial host from re-infection by the same or highly-related viruses. This memory is due to the acquisition of virus-derived genome fragments called spacers. Despite common acquisition of novel spacers in nature, and thereby the emergence of new immunity, acquisition of new spacers under laboratory conditions has been rarely observed. One of the few exceptions is Streptococcus mutans. In this study, the interactions between S. mutans strain P42S and its virulent bacteriophage M102AD are investigated in detail. In addition, possible applications of the CRISPR-Cas system are analysed. The first objective of this thesis was to characterise the CRISPR-Cas system of S. mutans P42S on the molecular level and to determine its role in antiviral defence. The second objective was to determine the potential of the Cas9 protein of S. mutans P42S (SmutCas9) in genome editing. S. mutans P42S possesses a type II-A CRISPR-Cas system. Although this is arguably the best studied system, the one found in the strain S. mutans P42S has several features that makes it stand out. It recognises a PAM different from what was known for this species, multiple spacer acquisitions are frequent, and this appears to be partially due to priming. Although CRISPR-Cas plays a role in antiviral defence, there are additional antiviral defence mechanisms that protect S. mutans against phages. Adsorption resistance is one of them, although additional unidentified antiviral defence mechanisms are likely involved. Finally, SmutCas9 has been shown functional in editing of viral genomes and appears to be a candidate for human genome editing.

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Trabajo de Investigación Requisito para optar al Título de Cirujano Dentista / Introducción: La caries secundaria es la principal causa de fracaso de restauraciones. No sólo se relaciona con algún defecto marginal, sino que también requiere de la formación de placa bacteriana con potencial cariogénico, siendo Streptococcus mutans (S. mutans) la especie bacteriana con mayor poder patogénico. Identificarlo y cuantificarlo directamente de placa bacteriana dental es fundamental para evitar futuras lesiones. Así surgen métodos para medir presencia de S. mutans en placa dental, siendo el más utilizado el Método de “Mondadientes o Toothpick”, el cual es un método simple, económico y viable de realizar en la consulta dental, con la desventaja de requerir conocimiento y tiempo de procesamiento de laboratorio alejando al clínico de realizar este importante examen complementario. Esta investigación tiene por objetivo principal, evaluar un método para la aislación y recuento de S. mutans denominado “Técnica de Cubeta”, y correlacionarlo con el Método del Mondadientes. Material y Método: Se seleccionaron 40 pacientes de la clínica de Operatoria 4to año de la Facultad de Odontología de la Universidad de Chile. En cada uno de ellos se tomó una muestra de placa bacteriana dental de un molar restaurado con Amalgama o Resina Compuesta, con el Método del Mondadientes y en su homólogo restaurado con el mismo material con la Técnica de Cubeta. Este método consiste en una impresión directa sobre las superficies oclusales de restauraciones, mediante una cubetilla de flúor cargada con agar TYCSB. Además se tomó muestras de saliva no estimulada como control de presencia de S. mutans en la boca de cada paciente. Las muestras de saliva y mondadientes fueron sembradas en agar TYCSB. Las cubetas y las placas sembradas se incubaron a 37°C por 48 horas, para posteriormente proceder al recuento bacteriano. 2 Resultados: La Técnica de Cubeta aisló Unidades Formadoras de Colonias (UFC)/cm de S.mutans en el 87,5% de las superficies obturadas. Posee una correlación positiva y significativa (r = 0,95) con el Método del Mondadientes. Se observó una diferencia significativa entre el recuento de S.mutans en restauraciones de Resina Compuesta y Amalgama mediante la Técnica de Cubeta y el Método del Mondadientes. Conclusiones: La Técnica de Cubeta es efectiva en aislamiento y recuento de S.mutans a partir de muestras de placa bacteriana dental en restauraciones de Amalgama y Resina Compuesta.

Trabajo de Investigación Requisito para optar al Título de Cirujano Dentista / Introducción En el biofilm dental se encuentran diversas bacterias, de las cuales Streptococcus mutans se considerada la de mayor potencial cariogénico. El objetivo del presente estudio es saber si la aplicación de sellante de resina en surcos profundos de dientes posteriores permanentes de pacientes adultos de alto riesgo cariogénico, disminuye el recuento de UFC/cm² de Streptococcus mutans sobre el área de surcos oclusales del diente. Materiales y métodos Se seleccionaron 38 pacientes (edad promedio 24 años) entre marzo y junio de 2013, de la clínica de Operatoria, Facultad de Odontología, Universidad de Chile,. En cada paciente, un operador tomó muestra de biofilm de la superficie oclusal de un diente posterior permanente con indicación de sellante, mediante técnica de cubeta (impresión de cara oclusal del diente usando cubetilla para flúor, cargada con medio de cultivo selectivo para Streptococcus mutans). Luego aplicó sellante en surcos del mismo diente. 30 días después tomó otra muestra con técnica de cubeta, sobre el sellante oclusal. Las muestras fueron procesadas en laboratorio de Microbiología Bucal, Departamento de Patología, Facultad de Odontología, Universidad de Chile. Un segundo operador realizó análisis estadístico. Resultados Se aislaron colonias de Streptococcus mutans desde muestras de biofilm obtenidas mediante la técnica de cubeta, según macromorfología y adherencia al agar. Se identificaron colonias haciendo pruebas bioquímicas (hidrólisis de Esculina y fermentación de Rafinosa y Melobiosa). Se cuantificaron UFC de Streptococcus mutans en área de surcos de superficies oclusales de dientes posteriores permanentes, antes (T0) y después (T1) de aplicar sellante. Usando programa ImageJ®, se sacó promedio del área oclusal de molares y premolares, y del área ocupada por sellante en dichos dientes: 10% de superficie oclusal de molares es ocupada por sellante, y 9% en premolares. Se convirtieron los datos, expresándolos 6 en cm². Comparando los resultados (test de Wilcoxon) se determinó que existe diferencia significativa (p<0.05) entre T0 (X=197,76 DS=199,42) y T1 (X=68,2 DS=102,54). Conclusión En adultos jóvenes con alto riesgo cariogénico, la aplicación de sellante de resina sin flúor en surcos de dientes posteriores permanentes sanos, contribuye a reducir la cantidad de UFC/cm² de Streptococcus mutans sobre el área de los surcos de los dientes tratados.

Orientador: Marlise Inêz Klein / Resumo: O objetivo foi avaliar quais são os mecanismos de Streptococcus mutans e de Candida albicans que contribuem para aumentar a patogenicidade do biofilme misto. Biofilmes mistos e simples das cepas S. mutans UA159 (Sm) e C. albicans SC5314 (Ca) foram formados sobre discos de hidroxiapatita com película salivar, na presença de sacarose. O pH do meio de cultura foi aferido em diversas fases de desenvolvimento do biofilme. Após 43h de crescimento, foram realizadas análises bioquímicas (peso seco, proteinas, composição da matriz extracelular) e de população microbiana. A estrutura dos biofilmes foi avaliada por microscopia confocal em 19 e 43h. A expressão de genes de vias metabólicas de ambas espécies foi verificada em 28h. Os dados foram avaliados por métodos estatísticos considerando α=0,05. Verificou-se diferença do pH do meio para os três biofilmes nos tempos 19, 27 e 43h (p<0,001; ANOVA dois critérios, Tukey). Biofilmes de Sm e misto foram mais ácidos em 19 e 43h, enquanto biofilmes de Ca mantiveram o pH neutro (p>0,05). As quantidades do peso seco e de proteínas de biofilme misto foram maiores comparadas aos biofilmes simples, e menores para Ca (p=0,001; ANOVA um critério). Não houve diferença na quantidade de exopolissacarídeos solúveis entre biofilmes Sm e misto, porém o biofilme Ca apresentou menor quantidade (p<0,001; Kruskal-Wallis, Dunn). Houve maior quantidade de exopolissacarídeos insolúveis em biofilme misto (p=0,002). Verificou-se mesmo comportamento populacional pa... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The objective was to evaluate the mechanisms of Streptococcus mutans and Candida albicans that contribute to increasing the pathogenicity of the mixed-species biofilm. Mixed and single-species biofilms of the strains S. mutans UA159 (Sm) and C. albicans SC5314 (Ca) were formed on saliva-coated hydroxyapatite discs in the presence of sucrose. The pH values of the culture media were verified at distinct developmental phases of biofilms. After 43h of growth, the biofilms were subjected to distinct assays biochemical (dry weight, proteins, the composition of extracellular matrix) and microbiological (colony forming units), analyzes. The biofilm's structure was verified via confocal microscopy at 19 and 43h. Gene expression of metabolic ways from both species was evaluated at 28h. The data were assessed by statistical methods (α=0,05). There was a difference in the media pH for the three biofilms at times 19, 27 and 43h (p<0,001; two-way ANOVA, Tukey). Sm and mixed-species biofilms were acidic at 19 and 43h, while Ca biofilms maintained a neutral pH (p>0,05). The amounts of dry weight and proteins were higher for mixed-species biofilm compared to singlespecies biofilms, being lower for Ca (p=0,001; one-way ANOVA). The quantity of soluble exopolysaccharides was similar for Sm and mixed-species biofilms but Ca presented a lower amount than those biofilms (p<0,001; Kruskal-Wallis, Dunn). There was a higher amount of insoluble exopolysaccharides in mixed-species biofilm (p=0,002). There was no difference in Sm population in single- and mixed-species biofilms (p=0,404; Mann Whitney); however, the mixed-species biofilm presents a higher population of Ca versus the single-species biofilm (p<0,001; t-Test). The threedimensional structure analysis showed larger microcolonies in mixed-species biofilms versus Sm biofilm, and absence of these structures in Ca biofilm...(Complete abstract electronic access below) / Mestre

Orientador: Marlus Chorilli / Banca: Helder Ferreira Teixeira / Banca: Maria Palmira Daflon Gremião / Resumo: A cárie dentária é um importante problema de saúde coletiva ainda prevalente no Brasil e no mundo. A sua etiologia está ligada principalmente a fatores que permitam condições favoráveis ao crescimento de bactérias, principalmente do Streptococcus mutans. Recentemente, um crescente interesse tem sido observado no estudo de peptídeos, como o p1025, análogo aos fragmentos 1025-1044 da adesina celular do S. mutans, responsável pela adesão e formação do biofilme dental. Sistemas líquido-cristalinos (SLC) de liberação de fármacos, pelo fato de aumentarem a estabilidade e a eficácia de fármacos, modulando a sua ação, podem ser potenciais carreadores de peptídeos. A potencialização da ação destes sistemas pode ser conseguida com a presença de substâncias bioadesivas, para prolongar sua permanência no ambiente bucal O objetivo deste trabalho foi desenvolver e caracterizar SLC bioadesivos contendo peptídeo p1025 e avaliar sua eficácia antimicrobiana e ação sobre o biofilme dental. Foram desenvolvidos SLC constituídos por álcool cetílico etoxilado 20 OE e propoxilado 5 OP como tensoativo (PRO), ácido oleico (AO) como fase oleosa e por 5 diferentes fases aquosas formadas por água (S1), dispersões de Policarbofil® (S2), Carbopol® 974P (S3), Hidroxietilcelulose (S4) e Quitosana (S5) a 0,5%. Foram selecionados três pontos dos sistemas S1, S2, S3 e S5 fixando-se a concentração do tensoativo em 40%. Esses sistemas foram caracterizados por microscopia de luz polarizada, espalhamento de raios-X de baixo ângulo, reologia, análise térmica, análise de textura e ensaios de bioadesão in vitro, que demonstraram que as microemulsões constituídas por dispersões aquosas de Carbopol® 974P formaram mesofases líquido-cristalinas com adição de água significativamente mais estruturadas e... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Dental caries is a significant public health problem still prevalent in Brazil and worldwide. The etiology is related to factors that enhance the growth of bacteria, mainly Streptococcus mutans. Recently, a great interest has been observed in studies of peptides such as peptide p1025, corresponding to residues 1025-1044 of the adhesin of S. mutans, responsible for adherence and formation of biofilm. According to the literature, solutions of this peptide inhibit by competition the bacterial biofilm adhesion to the tooth, preventing the colonization of S. mutans. Drug delivery systems, such as liquid crystalline systems (LCS) may be potential carriers of peptides because SLC can increase their stability and effectiveness. The potential action of these systems can be achieved with the presence of bioadhesive substances to prolong residence time at buccal cavity. The aim of this study was to develop and characterize bioadhesive SLC containing peptide p1025 and evaluate its antimicrobial efficacy and its action on the biofilm. It was developed five different SLC based on PPG-5-Ceteth-20 as surfactant, oleic acid as oil phase and five different aqueous phases based on water, dispersion of 0.5% Polycarbophil® (S1), Carbopol® (S2), hydroxyethylcellulose (S4) or chitosan (S5). It was selected three points of the systems S1, S2, S3 and S5 with 40% surfactant. These systems were characterized physicochemically by polarized light microscopy (MLP), SAXS, rheology, thermal analysis, TPA and in vitro bioadhesion, which showed that microemulsions composed of Carbopol® formed more structured and bioadhesive liquid crystalline mesophases with water than the other systems and it can high the retention time at buccal cavity. The incorporation of p1025 in this system demonstrated higher bioadhesive action and... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre