Comparou-se a eficácia da baciloscopia in natura e pós concentração (Coloração Ziehl Neelsen) e cultura tradicional e automatizada MA de amostras de escarro ou saliva/muco para a detecção do Complexo M. tuberculosis (MTB) em Centro de Referencia Ambulatorial para Tuberculose na Cidade de São Paulo. A identificação do grupo MTB baseou-se no crescimento em meio com Ácido para nitrobenzóico, e visualização do fator corda. Do total de 374 amostras, 228 eram de pacientes sob diagnóstico inicial e 146 em tratamento. 83 amostras eram saliva/muco. Destas, sete foram positivas à baciloscopia, 03 (3,6%) no material concentrado e uma (1,2%) in natura (p=0.5 McNemar Test). Cinco amostras (6%) positivas na cultura pelo método tradicional e 07 (8,4%) p=0.5 pelo MA. As amostras de escarro eram 74 foram positivas na baciloscopia, sendo 34 (11,7%) in natura e 45 (15,5%) no material concentrado, p=0.001. No método tradicional 56 (19,2%) e 67 (23%) pelo MA p=0.001. Independente da característica da amostra a baciloscopia pós concentração e a cultura pelo MA foram mais sensíveis. / Effectiveness of bacilloscopy were compared in natura and pos-concentrated (Ziehl Neelsen staining), and tradicional and automated culture-AM of sputum or saliva/mucus samples for detection of M. tuberculosis complex (MTB) in Ambulatory Reference Center in the city of São Paulo. Identification of MTB group was based on growth in medium with para nitrobenzoic acid, and cord factor visualization. From the total 374 samples, 228 were from patients under initial diagnostic and 146 in treatment. 83 samples were saliva/mucus. Seven of these were bacilloscopy positive, 03 (3.6%) in concentrated material and one (1.2%) in natura (p=.500ª McNemar Test). Five samples (6%) positive for culture by traditional method and 07 (8.4%) p=0.5 for AM. For sputum 74 were bacilloscopy positive, being 34 (11.7%) in in natura and 45 in concentrated material, p=0.001. In traditional method, 56 (19.2%) and 67 (23%) for AM, p=0.001. Independently of sample characteristics, pos-concentrated bacilloscopy and culture by AM were more effectiveness.

A leptospirose é uma zoonose de importância mundial causada por bactérias do gênero Leptospira. No Brasil, a maioria dos casos é causada por L. interrogans sorovar Copenhageni. O objetivo destre trabalho foi identificar adesinas de leptospira pela técnica de Phage display. Bibliotecas com fragmentos genômicos resultaram na idendificação de ligantes de leptospira com afinidade por tecidos de hamster. Uma varredura dessas bibliotecas contra heparan sulfato proteoglicano (HSPG) identificou como ligantes as proteínas LigA e LigB. Proteínas recombinantes foram produzidas e submetidas à ligação às células de mamíferos e aos componentes de matriz extracelular. LigB recombinante foi capaz de se ligar ao HSPG, à heparina e às células de mamíferos. HSPG e heparina foram capazes de reduzir significativamente a interação dessa proteína com as células. Estes resultados evidenciam o papel de proteínas da leptospira na sua interação com o hospedeiro e ilustram a possibilidade do uso da técnica de phage display para identificar possíveis adesinas. / Leptospirosis is a worldwide important zoonosis caused by bacteria of the genus Leptospira. In Brazil, most cases is caused by L. interrogans serovar Copenhageni. Our goal was to identify leptospiras adhesins by phage display technique. Libraries of genomic fragments resulted in the identification of ligands with affinity for leptospiras hamster tissues. Screening these libraries against heparan sulfate proteoglycan (HSPG) identified the proteins LigA and LigB. Recombinant proteins were produced and subjected to binding to mammalian cells and extracellular matrix components. LigB recombinant was able to bind to HSPG, heparin and mammalian cells. HSPG and heparin were able to significantly reduce the interaction of this protein with cells. These results highlight the role of leptospiras proteins in its interaction with the host and illustrate the possibility of the use of phage display technique to identify potential adhesins.

Comparou-se a eficácia da baciloscopia in natura e pós concentração (Coloração Ziehl Neelsen) e cultura tradicional e automatizada MA de amostras de escarro ou saliva/muco para a detecção do Complexo M. tuberculosis (MTB) em Centro de Referencia Ambulatorial para Tuberculose na Cidade de São Paulo. A identificação do grupo MTB baseou-se no crescimento em meio com Ácido para nitrobenzóico, e visualização do fator corda. Do total de 374 amostras, 228 eram de pacientes sob diagnóstico inicial e 146 em tratamento. 83 amostras eram saliva/muco. Destas, sete foram positivas à baciloscopia, 03 (3,6%) no material concentrado e uma (1,2%) in natura (p=0.5 McNemar Test). Cinco amostras (6%) positivas na cultura pelo método tradicional e 07 (8,4%) p=0.5 pelo MA. As amostras de escarro eram 74 foram positivas na baciloscopia, sendo 34 (11,7%) in natura e 45 (15,5%) no material concentrado, p=0.001. No método tradicional 56 (19,2%) e 67 (23%) pelo MA p=0.001. Independente da característica da amostra a baciloscopia pós concentração e a cultura pelo MA foram mais sensíveis. / Effectiveness of bacilloscopy were compared in natura and pos-concentrated (Ziehl Neelsen staining), and tradicional and automated culture-AM of sputum or saliva/mucus samples for detection of M. tuberculosis complex (MTB) in Ambulatory Reference Center in the city of São Paulo. Identification of MTB group was based on growth in medium with para nitrobenzoic acid, and cord factor visualization. From the total 374 samples, 228 were from patients under initial diagnostic and 146 in treatment. 83 samples were saliva/mucus. Seven of these were bacilloscopy positive, 03 (3.6%) in concentrated material and one (1.2%) in natura (p=.500ª McNemar Test). Five samples (6%) positive for culture by traditional method and 07 (8.4%) p=0.5 for AM. For sputum 74 were bacilloscopy positive, being 34 (11.7%) in in natura and 45 in concentrated material, p=0.001. In traditional method, 56 (19.2%) and 67 (23%) for AM, p=0.001. Independently of sample characteristics, pos-concentrated bacilloscopy and culture by AM were more effectiveness.

A leptospirose é uma zoonose de importância mundial causada por bactérias do gênero Leptospira. No Brasil, a maioria dos casos é causada por L. interrogans sorovar Copenhageni. O objetivo destre trabalho foi identificar adesinas de leptospira pela técnica de Phage display. Bibliotecas com fragmentos genômicos resultaram na idendificação de ligantes de leptospira com afinidade por tecidos de hamster. Uma varredura dessas bibliotecas contra heparan sulfato proteoglicano (HSPG) identificou como ligantes as proteínas LigA e LigB. Proteínas recombinantes foram produzidas e submetidas à ligação às células de mamíferos e aos componentes de matriz extracelular. LigB recombinante foi capaz de se ligar ao HSPG, à heparina e às células de mamíferos. HSPG e heparina foram capazes de reduzir significativamente a interação dessa proteína com as células. Estes resultados evidenciam o papel de proteínas da leptospira na sua interação com o hospedeiro e ilustram a possibilidade do uso da técnica de phage display para identificar possíveis adesinas. / Leptospirosis is a worldwide important zoonosis caused by bacteria of the genus Leptospira. In Brazil, most cases is caused by L. interrogans serovar Copenhageni. Our goal was to identify leptospiras adhesins by phage display technique. Libraries of genomic fragments resulted in the identification of ligands with affinity for leptospiras hamster tissues. Screening these libraries against heparan sulfate proteoglycan (HSPG) identified the proteins LigA and LigB. Recombinant proteins were produced and subjected to binding to mammalian cells and extracellular matrix components. LigB recombinant was able to bind to HSPG, heparin and mammalian cells. HSPG and heparin were able to significantly reduce the interaction of this protein with cells. These results highlight the role of leptospiras proteins in its interaction with the host and illustrate the possibility of the use of phage display technique to identify potential adhesins.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:25:37Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-05-22Bitstream added on 2014-06-13T19:12:39Z : No. of bitstreams: 1 ribeiro_d_me_araca.pdf: 985135 bytes, checksum: 3aa44a75a9180f7b89be1f30675f165b (MD5) / A Linfadenite Caseosa (LC) é uma doença crônica contagiosa, causada pela Corynebacterium pseudotuberculosis que acomete ovinos e caprinos acarretando perdas econômicas importantes. O diagnóstico é baseado no cultivo e identificação bioquímica, no entanto a fase subclínica e/ou visceral requerem métodos alternativos para sua detecção. Apesar dos métodos de diagnóstico já existentes, raramente pesquisas investigaram a utilização de material proveniente de punção aspirativa por agulha fina (PAAF) de linfonodo de ovinos aplicadas a outras técnicas de diagnóstico. O presente trabalho objetivou avaliar a sensibilidade e especificidade de métodos de diagnóstico para LC em ovinos sintomáticos (n=26) e assintomáticos (n=129), utilizando material colhido através de PAAF de linfonodo. As técnicas basearam-se na amplificação por PCR do gene alvo pld (fosfolipase D), no cultivo bacteriano associado a identificação bioquímica, no citodiagnóstico, bem como na pesquisa do agente etiológico. O teste sorológico por ELISA indireto foi adaptado para a espécie ovina. As amostras clínicas recuperadas da PAAF forneceram material adequado e suficiente para realização dos testes propostos, implementando a rotina do diagnóstico para LC. Dentre os métodos testados, o ELISA e a PCR foram os que apresentaram maior sensibilidade (92%). A maior especificidade foi verificada no cultivo bacteriano (98%), seguido do exame citológico (94%). / Caseous Lymphadenitis (CL) is considered a cronic contagious disease caused by Corynebacterium pseudotuberculosis affecting sheep and goats causing economical losses. The diagnostic is based on microorganism culture and respective identification. However no clinical and/ or visceral cases need alternative methods for detection. In spite of a range of diagnostic methods, few studies demonstrate the usefulness of fine-needle aspiration biopsy (FNAB) method. The aim of this study was to evaluate the sensitivity and specificity of diagnostic methods for CL in symptomatic (n=26) and asymptomatic (n=129) sheeps, using specimes collected from lymph nodes by FNAB assay. These techniques were performed using PCR targeting the pld gene (phospholipase D), on biochemical identification and culture, cytodiagnostic searching the aetiological agent. The serologic test of ELISA method was also applied in all ovine sera. Clinical samples recovered in FNAB given suitable and enough samples to perform the identification of C. pseudotuberculosis, implementing CL diagnostics. Among all techniques used here, ELISA and PCR demonstrated higher sensitivity (92%), whereas microorganism culture (98%) and cytodiagnostic (94%) presented higher specificity.