Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 431139.pdf: 741234 bytes, checksum: e446f210f62619524c7d495c84e2265d (MD5) Previous issue date: 2011-03-31 / A estreptoquinase (SK) ? uma prote?na extracelular produzida por uma variedade de linhagens de Streptococcus beta-hemol?ticos, ? uma prote?na ativadora do plasmig?nio composta de 414 amino?cidos com uma massa molecular de aproximadamente 47 kDa. A SK forma um complexo equimolar com o plasminog?nio. Esse complexo resultante pode converter diretamente outra mol?cula de plasminog?nio em plasmina, a protease ativa que degrada a fibrina presente nos co?gulos sangu?neos. Esta enzima ? hoje amplamente usada como agente trombol?tico no tratamento do infarto agudo do mioc?rdio e outras desordens circulat?rias. A baixa produtividade da estreptoquinase a partir das c?lulas de Streptococcus e a patogenicidade deste microorganismo s?o as principais raz?es para a explora??o da tecnologia de DNA recombinante para produ??o desta importante prote?na. Escherichia coli ? o microorganismo mais comum utilizado para produ??o de prote?nas heter?logas e o m?todo de prefer?ncia para o aumento da concentra??o de prote?nas recombinantes proporcional ? densidade de c?lulas e produ??o de produtos espec?ficos da c?lula, ? a estrat?gia em bateladaalimentada. Sendo o Brasil totalmente dependente da importa??o de biof?rmacos, uma alternativa ? estreptoquinase seria a produ??o desse biof?rmaco por meio de t?cnicas de DNA recombinante com experimentos de superexpress?o e cultivo em biorreator, purifica??o e o ensaio de atividade da prote?na estreptoquinase recombinante. Neste trabalho foram realizados cultivos de estreptoquinase de Streptococcus dysgalactiae subsp. equisimilis grupo C (SKC) em biorreator atrav?s de t?cnicas de batelada alimentada, testando diferentes meios de alimenta??o, estrat?gias de alimenta??o e tempos de indu??o com IPTG. Ap?s definidas as melhores condi??es de cultivo a prote?na recombinante foi purificada e sua forma homog?nea foi utilizada para realiza??o dos ensaios de atividade biol?gica. A m?xima biomassa alcan?ada foi de 18,94 g/L em meio de cultura Luria - Bertani (LB) usando uma estrat?gia de alimenta??o linear na presen?a de glicose e MgSO4. Aproximadamente 21 mg de SKC homog?nea foram obtidas a partir de 2 g de c?lula ?mida usando um protocolo de purifica??o de tr?s etapas com duas colunas cromatogr?ficas. Quando comparada com o Padr?o Internacional no ensaio colorim?trico, a atividade espec?fica de SKC foi de aproximadamente 99%, mostrando que a SKC recombinante obteve uma atividade especifica muito similar ao padr?o

Made available in DSpace on 2014-12-17T14:25:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 AbdoFN_TESE.pdf: 1739510 bytes, checksum: 7f520b9c4a32fd74e279d017c0bdd143 (MD5) Previous issue date: 2014-03-31 / Foam was developed as a novel vehicle for streptokinase with the purpose of increasing the contact time and area between the fibrinolytic and the target thrombus, which would lead to a greater therapeutic efficacy at lower doses, decreasing the drug s potential to cause bleeding. Fibrinolytic foams were prepared using CO2 and human albumin (at different v:v ratios), as the gas and liquid phases, respectively, and streptokinase at a low total dose (100,000 IU) was used as fibrinolytic agent conveyed in 1 mL of foam and in isotonic saline solution. The foams were characterized as foam stability and apparent viscosity. The thrombolytic effect of the streptokinase foam was determined in vitro as thrombus lysis and the results were compared to those of a fibrinolytic solution (prepared using the same dose of streptokinase) and foam without the fibrinolytic. In vitro tests were conducted using fresh clots were weighed and placed in test tubes kept at 37 ? C. All the samples were injected intrathrombus using a multiperforated catheter. The results showed that both foam stability and apparent viscosity increased with the increase in the CO2:albumin solution ratio and therefore, the ratio of 3:1 was used for the incorporation of streptokinase. The results of thrombus lysis showed that the streptokinase foam presented the highest thrombolytic activity (44.78 ? 9.97%) when compared to those of the streptokinase solution (32.07 ? 3.41%) and the foam without the drug (19.2 ? 7.19%). We conclude that fibrinolytic foam showed statistically significant results regarding the enhancement of the lytic activity of streptokinase compared to the effect of the prepared saline solution, thus it can be a promising alternative in the treatment of thrombosis. However, in vivo studies are needed in order to corroborate the results obtained in vitro / Uma espuma foi desenvolvida como novo ve?culo para a estreptoquinase com vistas a aumentar a ?rea de contato e o tempo de perman?ncia junto ao trombo, de modo a se obter maior efici?ncia terap?utica em doses menores, diminuindo suas potenciais complica??es hemorr?gicas. A espuma fibrinol?tica foi preparada com CO2, albumina humana e estreptoquinase, em dispositivo desenvolvido para tal fim, com diferentes raz?es de fases g?s/l?quido. Ensaios de estabilidade e viscosidade aparente foram realizados para caracteriza??o das espumas e a escolha da mais est?vel. A estreptoquinase em dose total reduzida (100.000 UI) foi utilizada como fibrinol?tico veiculado em 1 mL de espuma e em solu??o salina isot?nica (0,9%). A espuma sem fibrinol?tico tamb?m foi utilizada como comparativo. Testes in vitro foram realizados utilizando-se co?gulos frescos, que foram pesados e colocados em tubos de ensaio mantidos a 37?C. As espumas com e sem fibrinol?tico e a solu??o fibrinol?tica foram testadas por aplica??o intraco?gulo em doses id?nticas atrav?s de cateter multiperfurado e pistola de inje??o. Os resultados in vitro evidenciaram atrav?s da diminui??o dos pesos dos co?gulos, que a espuma trombol?tica apresentou atividade l?tica de 44,78 ? 9,97%, enquanto as mesmas doses da estreptoquinase em solu??o salina isot?nica promoveram 32,07 ?3,41% de lise dos co?gulos. Na espuma sem fibrinol?tico a redu??o do trombo foi de 19,2 ? 7,19%. Conclui-se que a espuma fibrinol?tica apresentou resultados estatisticamente significativos no tocante ? potencializa??o da atividade l?tica da estreptoquinase, quando comparado ao efeito da solu??o preparada com solu??o salina, podendo ser uma alternativa promissora nos tratamentos das tromboses. Os dados obtidos sinalizam para necessidade de estudos in vivo para comprova??o dos obtidos nos in vitro