Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 432089.pdf: 1649266 bytes, checksum: 3e3046dcd0a44006a99c0bdc29d77364 (MD5) Previous issue date: 2011-03-23 / Nos tempos atuais, os m?todos mais utilizados no diagn?stico da Tuberculose (TB) promovem um atraso inaceit?vel na libera??o dos resultados, um elevado n?mero de resultados falso-negativo e muitos n?o s?o sens?veis para formas paucibacilares da doen?a. Este fato se torna cr?tico uma vez que pacientes infectados continuam n?o tratados na comunidade aumentando a probabilidade de transmiss?o da doen?a e agravo da epidemia, o que corrobora a necessidade de aprimoramento ou desenvolvimento de novas metodologias. Diante deste fato, propusemos implementar um diagn?stico de DNA quantitativo para tuberculose paucibacilar, permitindo uma r?pida identifica??o e quantifica??o de bacilos vi?veis do Mycobacterium tuberculsosis (Mt) em amostras biol?gicas com o aux?lio da PCR em Tempo Real (R-T PCR). A regi?o interg?nica do gene inhA-mabA, possui c?pia ?nica no genoma do Mt e devido ? sua import?ncia na bioss?ntese de ?cidos mic?licos, foi escolhida como regi?o alvo para o desenho de primers e sondas espec?ficos acoplados a fluor?foros (TaqMan). A constru??o de padr?es de DNA sint?ticos do Mt serviram como refer?ncia para a quantifica??o absoluta dos ?cidos nucleicos, com alvo na regi?o interg?nica descrita acima. Eles foram amplificados do DNA gen?mico do Mt utilizando primers espec?ficos, clonados e o DNA plasmidial foi purificado e quantificado para o desenvolvimento de uma curva padr?o. Ap?s a morte celular o DNA pode permanecer ?ntegro; assim, m?todos de diagn?stico molecular podem superestimar o n?mero real de c?lulas vi?veis em uma amostra. Culturas de Mt H37Rv foram tratadas com diferentes concentra??es de EMA e PMA, intercalantes de DNA que se ligam no DNA de c?lulas mortas tornan-do o insol?vel e desta forma impedindo a sua amplifica??o. A concentra??o de 100OM de PMA foi escolhida para tratar amostras de escarro de pacientes em tratamento, ou com suspeita de TB. Nosso m?todo de diagn?stico mostrou uma alta sensibilidade (96,1%) quando comparado a amostras de escarro com baciloscopia positiva e se mostrou 47% mais sens?vel que a colora??o Ziehl-Neelsen para amostras com baciloscopia negativa