Submitted by Nathália Faria da Silva (nathaliafsilva.ufv@gmail.com) on 2017-07-27T14:38:19Z No. of bitstreams: 1 texto completo.PDF: 1644273 bytes, checksum: c8b636cbf0fc55b1e32f92cfa9cb1ad6 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-27T14:38:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.PDF: 1644273 bytes, checksum: c8b636cbf0fc55b1e32f92cfa9cb1ad6 (MD5) Previous issue date: 2001-08-31 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A propagação dos Citrus pode se dar: através da cultura de células e tecido e através da propagação vegetativa clássica, com métodos de estaquia, mergulhia e enxertia, sendo este último o que apresenta maior interesse comercial. Dentre os hipobiotos atualmente mais utilizados, destaca-se a tangerineira ‘Cleópatra’ (Citrus reshni Hort. ex. Tan), devido as suas características agronômicas. Desta forma, este trabalho teve como objetivo geral, a pontualização de um eficiente protocolo organogênico de células, tecido e órgãos, uma vez que o cultivo in vitro de células e tecidos constitui uma estratégia de extraordinária importância para solucionar problemas não apenas no âmbito da propagação, como também do melhoramento genético clássico e do melhoramento genético não convencional, notadamente das plantas lenhosas perenes, como são os citros. Sementes de tangerineira ‘Cleópatra’ ( Citrus reshni Hort. ex. Tan) obtidas de frutos de plantas de 16 anos de idade, foram utilizadas como explantes, visando a obtenção do maior número possível de plântulas axênicas, normais e vigorosas. Após 50 dias de incubação no escuro em meio MS (Murashige & Skogg, 1962) na ausência de vitaminas, foram avaliados o número de tubos contaminados; porcentagem de sementes germinadas; número de plântulas e raízes por semente; comprimento do epicótilo e das plântulas; e vigor destas. O melhor resultado foi obtido ao se utilizar as concentrações de HclO a 0,50% v/v por 30 minutos para a primeira desinfestação e a de 1,00% v/v por 5 minutos para a Segunda desinfestação. As plântulas, obtidas de acordo com o protocolo descrito acima, tiveram o epicótilo seccionado em cinco segmentos, os quais foram utilizados para avaliação da influência de BAP e ANA em distintas condições de incubação (luz, escuro e escuro/luz). Após 50 dias em incubação em -1 meio MS, suplementado com três concentrações de ANA (0,00; 0,10 e 1,00 mg.L ) e quatro-1 de BAP (0,00; 0,50; 1,00 e 3,00 mg.L ) e pelas combinações entre estas, foram avaliados no extremo distal e proximal, dos referidos explantes, o número de gemas, brotos e o tamanho dos calos formados. O processo organogênico ocorreu, tanto por organogênese direta (extremo distal), quanto por indireta (extremo proximal). Na organogênese direta, uma maior formação de gemas foi obtida quando BAP foi adicionado ao meio na concentração de 0,50 -1 mg.L , sob incubação em escuro/luz; e a posterior brotação destas ocorreu de forma mais efetiva em meio com 1,60 mg.L -1 de BAP, sob incubação em luz. Para a organogênese indireta, a incubação dos explantes no escuro foi a mais efetiva em todas as etapas, entretanto, as necessidades requeridas, quanto à natureza do regulador de crescimento e da concentração destes, variaram. Para o processo calogênico foram necessárias combinações específicas entre ANA e BAP, para cada explante, enquanto, para a formação de gemas e brotos a adição de 0,50 mg.L -1 de BAP ao meio de cultivo promoveu de uma forma geral os melhores resultados. Visando a avaliação da influência de AIB, ANA e 2,4D no processo de enraizamento adventício in vitro, foram utilizados como explantes, ápices de plântulas axênicas (protocolo descrito anteriormente). Nesta etapa, o meio MS foi suplementado com 4 concentrações de AIB e de ANA (0,00; 0,50; 1,00 e 1,50 mg.L -1 ), e a combinação de AIB e -1 ANA na concentração de 0,50 mg.L , para ambos reguladores de crescimento, sendo que para esta combinação também foram adicionadas duas diferentes concentrações de 2,4D -1 (0,20 e 0,40 mg.L ). Após 50 dias de incubação, foram avaliados: o número de ápices enraizados, o número de raízes por plântulas, o comprimento de raízes, ápices com formação -1 de calos e o vigor das plântulas. A combinação de AIB e ANA a 0,50 mg.L para ambos, e -1 ANA na concentração de 0,50 mg.L , foram os tratamentos que apresentaram melhores resultados. / The propagation of the Citrus can occur: by culture of cells and tissue and by the classic vegetative propagation, using methods of cutting, budding and grafting, the last method mentioned represents, comercially, the most interesting. Among the rootstock more utilized today. The mandarin tree "Cleópatra"( Citrus reshni Hort. ex. Tan) is pointed out due to it's agronomical features. Thus, this work had as a general objective, the pointing of an efficient organogenic protocol of cells, tissues and organs, once that the cultivation in vitro of cells and tissues constitutes a strategy of an extreme importance in solving problems, not only in a propagation aspect as well as in the classic and non-conventional genetic improvement, notedly from the hardwood plants, as the Citrus are. Seeds from the "Cleópatra" tangerine tree ( Citrus reshni Hort. ex. Tan) obtained from the fruits of sixteen year -old plants, were utilezed as explants, with the objective of obtaining the highest number possible of normal and vigorous axenic plantules. After fifty days of incubation in the dark in a MS mean (Murashige & Skoog, 1962)in the absense of vitamins, the number of contaminated tubes; percentage of germinated seeds; number of plantules and roots per seed; length of the epicotile and plantules and their strength. The best result was obtained while using the concentrations of HClO to 0.50%v/v during thirty minutes for the first desinfectation and of 1,00%v/v during five minutes for the second desinfectation. The plantules obtained according to the protocol described above had the epicotile seccionated in five segments, that were utilized for evaluating the influence of BAP and ANA in distinct incubation conditions (light, dark, and light/dark). After fifty days of incubation n i a MS mean, suplemented with three concentrations of ANA (0,00; 0,10 and 1,00 -1 -1 mg.L ) and four of BAP (0,00;0,50;1,00 and 3,00 mg.L ) and by combinations betweens them, the number of buds, shoots, and the size of the formed callus were evaluated in the extreme apical and basal of the reffered explants. The organogenic process occurred by directorganogenesis (extreme apical) as well as indirect (extreme basal). In the direct organogenesis a higher formation of buds was obtained when BAP was added to the mean in the concentration -1 of 0,50 mg.L , under incubation in the dark-light; and their posterior shoottting occurred in a more effective form, with 1,60 mg.L -1 of BAP, under light incubation. For the indirect organogenesis, the incubation of the explants in the dark was the most effective in all stages, however, the required necessities varied, in relation to the nature of the growth regulator and their concentrations. For the callogenic process, specific combinations were necessary between ANA and BAP, to each of the explants, while that the formation of buds and soots, an addition -1 of 0,50 mg.L of BAP to the mean of cultivation promoted in a general way the best results. Aiming the evaluation of the influence of AIB, ANA and 2,4D in the process of adventious rooting in vitro, the apex of axenic plantules (previouly described protocol) were used. In that stage the MS mean was suplemented with four concentrations of AIB and of ANA (0,00; 0,50; -1 - 1,00 and 1,50 mg.L ), and the combination of AIB and ANA in the concentration of 0,50 mg.L , for both growth regulator, and two different concentrations of 2,4D (0,20 and 0,40 mg.L -1 ) were also added. After fifty days of incubation, the number of rooted apexes, roots per plantules, root length, apexes with formation of callus and the plantule's vigour were evaluated. -1 The combination of AIB and ANA to 0,50 mg.L for both, and ANA in the concentration of -1 0,50 mg.L , were the treatments that presented the best results.