Resumo: O objetivo deste trabalho foi estabelecer um protocolo de micropropagacao para Pinus taeda, pelas tecnicas de organogenese direta e multiplicacao de gemas axilares. Sementes de familias selecionadas (F27 e B05) e de pomar comercial, fornecidas pela empresa Battistella Florestal (Rio Negrinho ¡V SC) foram submetidas a tratamento de estratificacao (5¢XC „b 1¢XC durante 25 dias) para a superacao da dormencia. Brotacoes apicais obtidas de plantulas com cinco ou dez dias de germinacao foram as fontes de explantes. Para a inducao da formacao de brotacoes adventicias e/ou axilares, foram utilizados meio de cultura WV5 com 0, 11, 22 ou 44 ƒÝM de 6-benzilaminopurina (BAP) combinada com 0,05 ƒÝM de acido naftaleno acetico (ANA) e meio de cultura WPM com 11 a 44,0 ƒÝM de BAP e 0; 0,5 ou 0,75 ƒÝM de ANA durante 14 dias, e subcultivo para meio sem reguladores e WPM. Para a tecnica de multiplicacao de brotacoes axilares, utilizaram-se brotacoes apicais (0,5 a 2,0 cm de comprimento) e segmentos nodais (1,0 a 4,0 cm de comprimento), em meios de cultura WV5 e GDm, acrescidos de concentracoes de 0,1 a 4,0 ƒÝM de BAP, e cultivo durante quatro e oito semanas. Brotacoes de 1,5 cm de comprimento foram submetidas a inducao ao enraizamento, por nove dias em meios GDm/2, WV5/2, WV3/2 ou em agar-agua, com 2,68 ƒÝM de ANA e 0,44 ƒÝM de BAP seguida de subcultivo em meio de cultura sem reguladores. A aclimatizacao de mudas foi feita diretamente em casa de vegetacao ou com periodo previo em sala de crescimento. Os melhores resultados para a inducao de brotacoes multiplas foram obtidos com explantes de cinco dias de idade, cultivados em meio de cultura WV5, 44,0 ƒÝM de BAP e 0,05 ƒÝM de ANA, obtendo-se 50% de explantes com brotacoes e numero medio de 4,8 brotacoes por explante. Para a multiplicacao de gemas axilares, segmentos nodais de 1,0 cm de comprimento, inoculados em meio WV5 contendo 2,5 ƒÝM de BAP foram os mais eficientes, com 90% de explantes com brotacoes e 4,0 brotacoes por explante em media. Com brotacoes apicais, observou-se maior porcentagem de alongamento (286,5%) em meio WV5 sem reguladores, com explantes de 0,5 cm de comprimento. A melhor duracao do subcultivo foi de oito semanas. O genotipo influenciou os resultados de germinacao, inducao e multiplicacao de brotacoes, sendo que as melhores respostas ocorreram com a familia F27, seguido da B05 e genotipos do pomar comercial. O meio de cultura WV5 permitiu a manutencao prolongada das culturas in vitro, as quais apresentaram vigor durante dois anos. Para inducao de raizes, recomenda-se a formulacao de agar-agua, acrescida de 2,68 ƒÝM de ANA e 0,44 ƒÝM de BAP durante nove dias, seguida de transferencia para meio GDm/2, sem reguladores para o desenvolvimento de raizes (55,6% de enraizamento). A sobrevivencia das mudas aclimatizadas foi de 85% apos 40 dias, sendo os 20 primeiros dias em sala de crescimento e os dias posteriores em casa de vegetacao. Concluiu-se que foi estabelecido um protocolo de micropropagacao para P. taeda.

Submitted by Amanda Silva (amanda.osilva2@ufpe.br) on 2015-03-12T12:13:21Z No. of bitstreams: 2 DISSERTAÇÃO Cleópatra Regina da Silva.pdf: 5645597 bytes, checksum: 25cfef292bd205e3f421c75a0e457285 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-12T12:13:21Z (GMT). No. of bitstreams: 2 DISSERTAÇÃO Cleópatra Regina da Silva.pdf: 5645597 bytes, checksum: 25cfef292bd205e3f421c75a0e457285 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2014 / CNPq; CAPES; FACEPE / O ácido úsnico é um dibenzofurano produzido por algumas espécies de liquens e possui várias propriedades farmacológicas, tais como: antiviral, antimicrobiana, antiinflamatória e antitumoral. Embora essa substância liquênica apresente estas propriedades a sua utilização em terapia está limitada pela sua hepatotoxicidade. O período de gestação é uma das fases mais sensíveis do ciclo reprodutivo. Durante este período, a maioria dos agentes atravessa facilmente a placenta e, portanto, pode-se considerar que a exposição materna a química se artificial ou naturalmente produzido, pode resultar em efeitos adversos no organismo passivo. Ensaios pré-clinicos sobre o ciclo reprodutivo são necessários para novas moléculas, pois determinam situações que podem ocasionar potenciais riscos para a reprodução humana de ordem maior, menor ou igual àquelas visualizadas em modelos experimentais. Esse estudo teve o objetivo de investigar o potencial toxicológico do ácido úsnico purificado de Cladonia substellata (ATHI) em ratas Wistar durante o período da organogênese. 18 fêmeas foram submetidas ao estudo do ciclo estral no intuito de se determinar o período fértil. Em seguida as ratas foram pareadas com 9 machos (2:1), após a confirmação da gestação, foram distribuídas aleatoriamente nos grupos controle (n=6), tratado I (n=6) e tratado II (n=6). As fêmeas do grupo controle receberam solução fisiológica e as dos grupos tratados receberam o ácido úsnico purificado nas doses de 15 mg/kg e 25 mg/kg, respectivamente. Ao 20° dia as fêmeas foram sacrificadas por overdose de anestésico Urethame (1,25 g/kg). O peso dos fetos e suas placentas foram mensurados e em seguida foi retirado o fígado para análise histológica. As implantações foram identificadas por Lugol. Nas fêmeas tratadas com o ácido úsnico purificado nas doses de 15 e 25 mg/kg o número de reabsorções foi maior 3,5 ± 0,5 e 5 ± 1, respectivamente quando comparada com o grupo controle 1,1 ± 0,4. Foi observada uma redução no número de feto viáveis 10 ± 1,03 e 8 ± 1,4 nas fêmeas tratadas com o acido úsnico purificado nas doses de 15 e 25 mg/kg, respectivamente quando comparado com o grupo controle 12 ± 0,51 e redução no peso corporal dos fetos onde o controle apresentou 5,7 ± 0,3 e 4,1 ± 0,1 e 3,5 ± 0,1 para os tratamentos com 15 e 25 mg/kg, respectivamente. Na dose de 25 mg/kg os fetos apresentaram alterações morfológicas como exposição do globo ocular, presença de uma massa celular na região superior do feto e atrofia dos membros superiores e inferiores, porém essas alterações não foram observadas na dose de 15 mg/kg. O peso médio dos fígados de fetos das fêmeas tratadas com ácido úsnico purificado a 15 mg/kg foi evidenciado uma leve redução 0,34 ± 0,02g quando comparado ao grupo controle 0,5 ± 0,02g. Por outro lado uma relevante diminuição 0,2 ± 0,05g foi observado no grupo tratado na dose de 25 mg/kg. Na análise histológica do fígado do grupo de fetos das fêmeas tratados com ácido úsnico purificado na dose de 15 mg/kg foi observado uma leve redução não significativa na quantidade de megacariócitos comparado ao grupo controle, já para a dose de 25 mg/kg os megacariócitos apresentaram uma redução significativa por campo analisado, quando comparado ao grupo controle. A histomorfometria do fígado da prole em relação ao número total de hepatócitos quando administrado a dose de 15 mg/kg não mostrou alteração significativa na média de células quando comparado ao grupo controle, no entanto a dose de 25 mg/kg foi visualizado um aumento significativo no número médio de hepatócitos. O modelo experimental utilizado no presente estudo demonstrou que o composto apresentou toxicidade no período da organogênese onde a dose mais tóxica foi a de 25 mg/kg. A dose de 15 mg/kg é uma candidata a novos estudos experimentais. Estes estudos revelam a importância de se avaliar os efeitos tóxicos de substâncias naturais a fim de elucidar os cuidados na sua utilização ou indicação com potencial fármaco.

A espécie Stylosanthes guianensis, importante forrageira para as regiões tropicais do globo, vem se estabelecendo a partir da década de 80 como um sistema modelo em potencial, para a tecnologia da cultura de tecidos na família Leguminosae (MEIJER & SZABADOS, 1990). No presente estudo, avaliou-se o potencial morfogenético in vitro de uma cultivar pertencente a esta espécie, a IRI 1022, em relação aos fatores genótipo e meio de cultura, mais especificamente, a reguladores de crescimento. A indução de calos foi obtida a partir de explantes foliares da cv IRI 1022 colocados em meios basais MS suplementados com combinações dos fitorreguladores NAA e BAP, nas concentrações 0,0; 0,1; 0,4; 1,0 e 2,0 mg/l, sob fotoperíodo de 16 horas luz e temperaturas entre 25 a 28°C. Entre estas combinações foram selecionadas favoravelmente, aquelas capazes de promover fases de calo mais prolongadas e ainda a regeneração de partes aéreas nestes calos durante o período de indução de 30 dias. Calos induzidos nestas condições foram transferidos após 30 dias para meios de regeneração, isto é, meios MS suplementados apenas com BAP, onde a concentração 2,0 mg/l, mostrou-se a mais satisfatória. Brotos regenerados foram alongados em meio MS com as concentrações de sais reduzidas à metade e a um quarto, e concentração de BAP também reduzida ou ausente. A implementação do enraizamento em brotos alongados se deu em meio MS reduzido à metade e a um quarto, e suplementado com 0,2 mg/l de IBA. As maiores taxas de sobrevivência de plantas regeneradas in vitro se deu sob condições elevadas de umidade relativa, luminosidade e temperatura. Plantas SC1 (regenerantes primários) avaliadas preliminarmente, apresentaram variações quanto a alguns aspectos vegetativo e reprodutivo; progênies destas plantas por sua vez, quando submetidas a cultura, demonstraram variabilidade para o caráter regeneração. A indução de calos e a organogênese de partes aéreas nestes, foram igualmente avaliadas a nível estrutural. Os eventos chaves que levam a indução de calos em explantes foliares da cultivar IRI 1022, ocorrem entre o segundo e o terceiro dias de cultura; a desdiferenciação e a proliferação celulares têm início nas regiões de ferimento do expl ante, notadamente a nível da nervura principal, em células do parênquima e da bainha do feixe vascular. No quinto dia de cultura, já é evidente a nível da morfologia externa, o início de formação de calo. Em torno do décimo dia de cultura já se observa a presença de meristemóides. Trinta dias após a inoculação do explante, são evidentes as gemas caulinaes. O processo de regeneração ocorre por organogênese, com os brotos desenvolvendo na superfície dos calos. / Since the 80's decade, Stylosanthes guianensis, an important forage species for world tropical regions, has been established as a potential model system for tissue culture in the Leguminosae family (MEIJER & SZABADOS, 1990). In the present study, S. guianensis cultivar IRI 1022 in vitro morphogenetic potential was evaluated; genotype and culture media, specifically, growth regulators was studied. Cal1i induction was obtained from IRI 1022 leaves explants placed on the MS (MURASHIGE & SKOOG, 1962) basal medium supplemented with combinations of NAA and BAP at. 0.0, 0.1, 0.4, 1.0 and 2.0 mgl-1 concentrations. Cultures were maintained at 25 to 28°C, under 16 hs light regime. Plant growth regulator combinations able to promote extended call us phase and shoot regeneration in a 30 days period were selected. The derived calli were then transferred auxin free MS regeneration media; 2.0 mgl-1 BAP was the more satisfactory concentration for shoot regeneration. Shoots were elongated in half-and-quarter- strength MS medium, free of hormones or supplemented with reduced BAP concentration. Rooting was induced in the same basal medium supplemented with 0,2 mgl-1 IBA. Regenerated plantlets, when transferred to the soil, showed greater survival rates under high humidity, 1ight and temperature conditions. SC1 plants (primary regenerants) showed some variations related with morphological and reproductive aspects; progenies of SC1 plants showed variabi1ity in in vitro regenerative in abi1ity. Histological analyses of calli induction and shoot regeneration processes were performed. Leaf explants derived calli were induced by hystological events that. occur between the second and the third day of culture; dedifferentiation and cellular proliferation begin in regions closed to lesions caused by explant excision, mainly at the central vein, involving both, cel1 of the vascular parenchyma and sheath of the bundle. On the fifth day of culture calli began to be evident at the level of external morphology. After the tenth day of culture meristemoids can be observed. After thirty days of explants inoculation shoot buds are evident. Regeneration process occurs by organogenesis, with shoot development on calli surfaces.

Submitted by Nathália Faria da Silva (nathaliafsilva.ufv@gmail.com) on 2017-07-27T14:38:19Z No. of bitstreams: 1 texto completo.PDF: 1644273 bytes, checksum: c8b636cbf0fc55b1e32f92cfa9cb1ad6 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-27T14:38:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.PDF: 1644273 bytes, checksum: c8b636cbf0fc55b1e32f92cfa9cb1ad6 (MD5) Previous issue date: 2001-08-31 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A propagação dos Citrus pode se dar: através da cultura de células e tecido e através da propagação vegetativa clássica, com métodos de estaquia, mergulhia e enxertia, sendo este último o que apresenta maior interesse comercial. Dentre os hipobiotos atualmente mais utilizados, destaca-se a tangerineira ‘Cleópatra’ (Citrus reshni Hort. ex. Tan), devido as suas características agronômicas. Desta forma, este trabalho teve como objetivo geral, a pontualização de um eficiente protocolo organogênico de células, tecido e órgãos, uma vez que o cultivo in vitro de células e tecidos constitui uma estratégia de extraordinária importância para solucionar problemas não apenas no âmbito da propagação, como também do melhoramento genético clássico e do melhoramento genético não convencional, notadamente das plantas lenhosas perenes, como são os citros. Sementes de tangerineira ‘Cleópatra’ ( Citrus reshni Hort. ex. Tan) obtidas de frutos de plantas de 16 anos de idade, foram utilizadas como explantes, visando a obtenção do maior número possível de plântulas axênicas, normais e vigorosas. Após 50 dias de incubação no escuro em meio MS (Murashige & Skogg, 1962) na ausência de vitaminas, foram avaliados o número de tubos contaminados; porcentagem de sementes germinadas; número de plântulas e raízes por semente; comprimento do epicótilo e das plântulas; e vigor destas. O melhor resultado foi obtido ao se utilizar as concentrações de HclO a 0,50% v/v por 30 minutos para a primeira desinfestação e a de 1,00% v/v por 5 minutos para a Segunda desinfestação. As plântulas, obtidas de acordo com o protocolo descrito acima, tiveram o epicótilo seccionado em cinco segmentos, os quais foram utilizados para avaliação da influência de BAP e ANA em distintas condições de incubação (luz, escuro e escuro/luz). Após 50 dias em incubação em -1 meio MS, suplementado com três concentrações de ANA (0,00; 0,10 e 1,00 mg.L ) e quatro-1 de BAP (0,00; 0,50; 1,00 e 3,00 mg.L ) e pelas combinações entre estas, foram avaliados no extremo distal e proximal, dos referidos explantes, o número de gemas, brotos e o tamanho dos calos formados. O processo organogênico ocorreu, tanto por organogênese direta (extremo distal), quanto por indireta (extremo proximal). Na organogênese direta, uma maior formação de gemas foi obtida quando BAP foi adicionado ao meio na concentração de 0,50 -1 mg.L , sob incubação em escuro/luz; e a posterior brotação destas ocorreu de forma mais efetiva em meio com 1,60 mg.L -1 de BAP, sob incubação em luz. Para a organogênese indireta, a incubação dos explantes no escuro foi a mais efetiva em todas as etapas, entretanto, as necessidades requeridas, quanto à natureza do regulador de crescimento e da concentração destes, variaram. Para o processo calogênico foram necessárias combinações específicas entre ANA e BAP, para cada explante, enquanto, para a formação de gemas e brotos a adição de 0,50 mg.L -1 de BAP ao meio de cultivo promoveu de uma forma geral os melhores resultados. Visando a avaliação da influência de AIB, ANA e 2,4D no processo de enraizamento adventício in vitro, foram utilizados como explantes, ápices de plântulas axênicas (protocolo descrito anteriormente). Nesta etapa, o meio MS foi suplementado com 4 concentrações de AIB e de ANA (0,00; 0,50; 1,00 e 1,50 mg.L -1 ), e a combinação de AIB e -1 ANA na concentração de 0,50 mg.L , para ambos reguladores de crescimento, sendo que para esta combinação também foram adicionadas duas diferentes concentrações de 2,4D -1 (0,20 e 0,40 mg.L ). Após 50 dias de incubação, foram avaliados: o número de ápices enraizados, o número de raízes por plântulas, o comprimento de raízes, ápices com formação -1 de calos e o vigor das plântulas. A combinação de AIB e ANA a 0,50 mg.L para ambos, e -1 ANA na concentração de 0,50 mg.L , foram os tratamentos que apresentaram melhores resultados. / The propagation of the Citrus can occur: by culture of cells and tissue and by the classic vegetative propagation, using methods of cutting, budding and grafting, the last method mentioned represents, comercially, the most interesting. Among the rootstock more utilized today. The mandarin tree "Cleópatra"( Citrus reshni Hort. ex. Tan) is pointed out due to it's agronomical features. Thus, this work had as a general objective, the pointing of an efficient organogenic protocol of cells, tissues and organs, once that the cultivation in vitro of cells and tissues constitutes a strategy of an extreme importance in solving problems, not only in a propagation aspect as well as in the classic and non-conventional genetic improvement, notedly from the hardwood plants, as the Citrus are. Seeds from the "Cleópatra" tangerine tree ( Citrus reshni Hort. ex. Tan) obtained from the fruits of sixteen year -old plants, were utilezed as explants, with the objective of obtaining the highest number possible of normal and vigorous axenic plantules. After fifty days of incubation in the dark in a MS mean (Murashige & Skoog, 1962)in the absense of vitamins, the number of contaminated tubes; percentage of germinated seeds; number of plantules and roots per seed; length of the epicotile and plantules and their strength. The best result was obtained while using the concentrations of HClO to 0.50%v/v during thirty minutes for the first desinfectation and of 1,00%v/v during five minutes for the second desinfectation. The plantules obtained according to the protocol described above had the epicotile seccionated in five segments, that were utilized for evaluating the influence of BAP and ANA in distinct incubation conditions (light, dark, and light/dark). After fifty days of incubation n i a MS mean, suplemented with three concentrations of ANA (0,00; 0,10 and 1,00 -1 -1 mg.L ) and four of BAP (0,00;0,50;1,00 and 3,00 mg.L ) and by combinations betweens them, the number of buds, shoots, and the size of the formed callus were evaluated in the extreme apical and basal of the reffered explants. The organogenic process occurred by directorganogenesis (extreme apical) as well as indirect (extreme basal). In the direct organogenesis a higher formation of buds was obtained when BAP was added to the mean in the concentration -1 of 0,50 mg.L , under incubation in the dark-light; and their posterior shoottting occurred in a more effective form, with 1,60 mg.L -1 of BAP, under light incubation. For the indirect organogenesis, the incubation of the explants in the dark was the most effective in all stages, however, the required necessities varied, in relation to the nature of the growth regulator and their concentrations. For the callogenic process, specific combinations were necessary between ANA and BAP, to each of the explants, while that the formation of buds and soots, an addition -1 of 0,50 mg.L of BAP to the mean of cultivation promoted in a general way the best results. Aiming the evaluation of the influence of AIB, ANA and 2,4D in the process of adventious rooting in vitro, the apex of axenic plantules (previouly described protocol) were used. In that stage the MS mean was suplemented with four concentrations of AIB and of ANA (0,00; 0,50; -1 - 1,00 and 1,50 mg.L ), and the combination of AIB and ANA in the concentration of 0,50 mg.L , for both growth regulator, and two different concentrations of 2,4D (0,20 and 0,40 mg.L -1 ) were also added. After fifty days of incubation, the number of rooted apexes, roots per plantules, root length, apexes with formation of callus and the plantule's vigour were evaluated. -1 The combination of AIB and ANA to 0,50 mg.L for both, and ANA in the concentration of -1 0,50 mg.L , were the treatments that presented the best results.

Dentre os fatores relacionados à capacidade superior de regeneração in vitro de Solanum peruvianum, está a presença do alelo dominante Rg1. O gene RG1, envolvido na formação de gemas caulinares a partir de raízes e outros explantes, foi mapeado no cromossomo 3 entre os genes BETA-CAROTENE HYDROXYLASE (CrtR-b) e PHYTOENE SYNTHASE (PSY1). Variações alélicas também são conhecidas para genes CrtR-b e PSY1. white flower (wf) é o alelo de CrtR-b que produz pétalas brancas e yellow flesh (r) é o alelo de PSY1 que produz frutos amarelos. Os alelos wf e Rg1 com r foram introgredidos na cultivar Micro-Tom (Solanum lycopersicum L). Através da transferência sequencial de explantes de SIM para MB e de RIM para SIM, verificou-se que MT-Rg1 reduz o tempo necessário para a indução de gemas em um dia (6 dias em SIM para MT), devido a redução no tempo necessário para a aquisição de competência em um dia (2 dias para MT). Foram obtidos 30 possiveis recombinantes advindos do cruzamento Rg1/rg1 Wf/wf x rg1/rg1 wf/wf, baseados nas características de pétala branca (efeito do alelo wf) e maior ramificação (efeito do alelo Rg1). Todos os possíveis recombinantes foram testados in vitro quanto à capacidade de formar gemas caulinares em SIM e raízes em RIM. Com isso, 7 linhagens recombinantes foram confirmadas e utilizadas para o mapeamento fino da região na qual o gene RG1 está localizado no cromossomo 3. Para o mapeamento foram testados marcadores do tipo CAPS e SCAR, sendo utilizado o DNA genômico extraído de S. pennellii, S. peruvianum, Micro- MsK, MT, MT-Rg1, MT-wf e das 7 linhagens recombinantes, constatando-se que alguns marcadores moleculares desenhados para S. pennellii podem ser utilizados para S. peruvianum. Estas análises também evidenciaram que o segmento de introgressão de MT-Rg1 está entre o marcador P5 e o gene CrtR-b, totalizando 136 genes, entre os quais GRAS 10 destacou-se como principal candidato para a função gênica de Rg1. Complementarmente, foi realizada a análise de RNA-Seq (plataforma SOLiD) para a identificação de genes diferencialmente expressos entre MT e MT-Rg1. Com isso, observou-se que existem mais genes regulados negativamente do que positivamente durante a aquisição de competência. Devido ao grande número de genes diferencialmente expressos, alguns parâmetros foram utilizados para classificar os genes que poderiam ser quantificados por qRT-PCR em um experimento de regeneração in vitro. Entre os 361 genes classificados, 5 foram selecionados para a quantificação de sua expressão. Destes 5 genes, GRAS 10 e Serine/threonine protein phosphatase 7 foram os que apresentaram-se mais positivamente expressos e aparentemente são os que estão mais intimamente ligados a fase de aquisição de competência. Como existem muitos genes GRAS, foi feita uma árvore filogenética para posicioná-lo e identificar genes homólogos a ele. Com base na análise filogenética foi possível identificar o gene GRAS 10 como homológo ao gene SCL8 já identificado em Arabidopsis. Porém, pouco se sabe a respeito de SCL8. Desse modo, ainda é necessário confirmar a identidade do gene RG1, o que possibilitará a compreensão do processo de aquisição de competência. / The dominat allele Rg1 is related to the greater in vitro regeneration capacity of Solanum peruvianum L. The Rg1 gene is required for shoot formation from roots and others explants and was mapped on chromosome 3 between BETA-CAROTENE HYDROXYLASE (CrtR-b) and PHYTOENE SYNTHASE (PSY1) genes. Allelic variants are also known for the genes CrtR-b and PSY1. white flower (wf) is the allele of CrtR-b that produces white petals and yellow flesh (r) is the allele of PSY1 that produces yellow fruits. The alleles wf and Rg1 with r were introgressed into the Micro-Tom cultivar (Solanum lycopersicum L). Through the sequential transfer of explants from SIM to BM and RIM to SIM, we found that MT-Rg1 reduces the time required for the induction of shoots in one day (6 days on SIM for MT), due the reduction of the time required for competence acquisition in one day (2 days to MT). It was obtained 30 putative recombinants from crossing Rg1/rg1 Wf/wf x rg1/rg1 wf/wf. The recombinant lines were scored based on the presence of white petals (wf allele\'s effect) and increased shoot branching (Rg1 allele\'s effect). All putative recombinant lines were tested in vitro for their capability to form shoots in SIM and roots in RIM. Thus, 7 recombinant lines were selected and used to fine mapping the region where RG1 gene is located. CAPS and SCAR markers designed to S. pennellii were tested to fine-mapping, using as template genomic DNA samples from S. pennellii, S. peruvianum, Micro-MsK, MT, MT-Rg1, MT-wf and the 7 recombinant lines. These results confirmed that the molecular markers designed for S. pennellii can be successfully used for S. peruvianum. These analyzes also suggest that the introgressed segment of MT-Rg1 is located between the P5 marker and the CrtR-b gene. Within this region, there are 136 genes, including the GRAS 10 gene whichis the main candidate to RG1 gene function. In addition, we performed RNA-Seq analysis (SOLiD platform) to identify genes differentially expressed in MT and MT-Rg1. It was observed more down-regulated than up-regulated genes in the competence acquisition stage. Due to the large number of differentially expressed genes, some parameters were used for selection of genes that would have their expression validated by qRT-PCR in an in vitro regeneration test. Five genes among 361 genes differentialy expressed were selected to test their expression. Of these 5 genes, GRAS 10 and Serine / threonine protein phosphatase 7 were the most up-regulate genes and showed to be closely related to the stage of competence acquisition. Since there are many GRAS genes, we performed a phylogenetic analysis to identify homologous genes. Based on the phylogenetic analysis, GRAS 10 was identified as homologous to SCL8, a gene already identified in Arabidopsis. However, little is known about SCL8. Thus, it is still necessary to confirm the RG1 gene identity. This approach will provide a better understanding of competence acquisition process.

O emprego da cultura de tecidos, órgãos ou plantas In vitro tem sido largamente utilizado como técnica de micropropagação com finalidade de estudar os vários fatores envolvidos no crescimento e desenvolvimento vegetal. O objetivo do presente trabalho foi estudar as condições fisiológicas relacionadas a diferentes respostas organogenéticas de natureza vegetativa e reprodutiva em plantas de Dendrobium Second Love (Orchidaceae) cultivadas in vitro. Foi possível analisar através da técnica de micropropagação de incubação de tais plantas no escuro as variações no potencial organogenético de seus segmentos caulinares apical e subapical em formar explantes para a regeneração de novas plantas in vitro e as decorrente variações morfológicas das plantas assim regeneradas. A referida técnica foi também empregada com a incubação dessas plantas no claro para gerar material suficiente ao estudo do envolvimento do TDZ, Z, ZR, iP, iPR na indução de seu brotamento e de sua floração. Foi possível assim a análise das variações tanto dos teores endógenos de açúcares solúveis quanto de etileno decorrentes da aplicação dessas citocininas, bem como aferir a influência da duração do tratamento e da idade da planta. Os resultados mostraram que a idade de incubação das plantas no escuro e no claro é importante não apenas para gerar novas plantas como também para induzir o seu brotamento e o florescimento. Sucessivas etapas de padronização evidenciaram que a causa principal da variação no potencial organogenético dos explantes utilizados derivou da região de origem da planta estiolada, bem como da idade do próprio tecido, sendo que um menor tempo de incubação no escuro levou a um aumento na porcentagem de regeneração das plantas, da mesma forma que um menor período de escuro tornou as plantas mais homogêneas em relação ao tamanho. Dentre as condições estudadas, todas as citocininas induziram brotamento, porém em relação ao florescimento apenas o TDZ mostrou-se eficaz. Pôde-se ainda verificar que um período de exposição de 10 dias no TDZ induziu as plantas à floração. Os níveis de açúcares solúveis dos brotos submetidos aos tratamentos com Z, ZR, iP, iPR e TDZ mostrou-se mais elevado naqueles tratados com TDZ sugerindo uma maior utilização de açúcares nas plantas induzidas a floração. Em relação ao acúmulo de etileno dentro dos frascos verificou-se, por fim, que as plantas tratadas com TDZ induziram maior acúmulo de etileno em relação às plantas controle. / In vitro tissues, organs or plants culture has been widely used as a micropropagation technique aiming to study a number of factors involved in vegetable growth and development. In the present study, we evaluated the physiological conditions related to different vegetative or reproductive organogenetic responses in in vitro Dendrobium Second Love (Orchidaceae) plants. We evaluated the organogenetic potential of the shoot segments in inducing explants for the regeneration of new in vitro plants and their morphological changes. This technique was also micropropagated with light incubation of the plants in order to provide enough material for the study of the participation of TDZ, Z, ZR, iP, iPR in the induction of their budding and its flowering. Thus, it was possible to analyze the endogenous levels of soluble sugars, ethylene concentration, following the application of these cytokinins, as well as evaluated the effect of treatment duration and the plant age. The results showed that the plant incubation age is not only important to generate new plants, but also to induce its budding and flowering, irrespective of the dark/light condition. Successives tests showed that the main reason for changes in the organogenetic potential of the explants was due to the etiolated plant region, as well the tissue age. In this sense, lower dark incubation length led to an increase in the percentage of plants regeneration, and to more homogeneous plant sizes. Among the studied conditions, all cytokinins induced budding, however concerning flowering only TDZ was effective. It was also verified that a 10-day exposure to TDZ can induce plants to flowering. The level of soluble sugars in the buds submitted to the treatment with Z, ZR, iP, iPR and TDZ was higher in the ones treated with TDZ, suggesting a higher sugar use in the plants induced flowering. Regarding the ethylene accumulation in the flasks, it was observed that plants treated with TDZ induced higher ethylene accumulation when compared to control plants.

Diversos estudos têm demonstrado o envolvimento benéfico da utilização do aminoácido glutamina em meios de cultura, favorecendo a organogênese dos tecidos vegetais cultivados. Sabe-se que as fontes de nitrogênio podem influenciar na produção endógena de fitormônios, entretanto o papel exato da glutamina ainda não está bem estabelecido. Em Ananas comosus (L.) Merr., a adição de glutamina ao meio de cultura exerceu efeito promotor sobre a taxa de organogênese e o vigor do crescimento das gemas caulinares a partir de bases foliares. Além da glutamina, discute-se se o estresse resultante da explantação também poderia estar envolvido com a indução do processo organogenético, acarretando na produção de espécies reativas de oxigênio e na alteração do estado redox endógeno. Esse estresse para ser benéfico, entretanto, deveria estar restrito a certo limite. O presente trabalho visou compreender o efeito favorável da glutamina na organogênese adventícia em bases foliares de abacaxizeiro cultivadas in vitro. O envolvimento da glutamina com uma possível diminuição do estresse oxidativo durante o período de indução da organogênese também foi abordado. Para tanto, buscou-se correlacionar a influência do suprimento de glutamina no meio de cultura com os teores endógenos de peróxido de hidrogênio, glutationa e ascorbato. O estado redox da glutationa e do ascorbato durante o período de indução da organogênese adventícia também foi analisado. Além disso, foram analisadas as atividades de duas enzimas antioxidantes nesses explantes foliares, a superóxido dismutase e a catalase. Tentativamente, a glutationa foi adicionada ao meio de cultura, contendo ou não glutamina, visando conhecer o efeito desse antioxidante no processo organogenético. Os resultados mostraram que a glutationa substituiu, mas não intensificou, o efeito benéfico da glutamina sobre a taxa de organogênese das bases foliares de abacaxizeiro. Esse antioxidante não substituiu o efeito positivo do aminoácido no ganho de massas fresca e seca dos eixos caulinares formados, no entanto atuou favoravelmente na formação de um maior número de gemas adventícias por explante inoculado. Ao que parece, o cultivo in vitro das bases foliares gerou um estresse oxidativo nesses tecidos logo no início do período de cultivo, a julgar pela alta concentração de H2O2 detectada nas primeiras 24 horas. Entretanto, essa possível condição estressante foi controlada ao longo do período de cultivo, retornando a uma homeostase do tecido e conferindo condição para que as células se reprogramassem para seguir a uma rota de organogênese caulinar. A glutamina pareceu favorecer a manutenção de um estado redox reduzido tanto de ASC quanto de GSH durante o período em que houve o possível estresse oxidativo. Os resultados das atividades das enzimas antioxidantes sugeriram que a CAT pode ter sido responsável pela regulação do conteúdo endógeno de H2O2, já que a SOD não apresentou alterações expressivas ao longo do período de indução da organogênese tanto em SIM quanto em SIMGln. Em conjunto, os resultados sugerem que o estresse oxidativo causado pelo cultivo in vitro pode ter gerado uma sinalização importante para que a organogênese se inicie, sendo que a glutamina exerceria um papel de manter o estado redox dos tecidos foliares reduzido no momento da maior concentração de H2O2 endógeno. / A positive influence of glutamine on organogenesis of in vitro cultured plant tissues has been demonstrated by several studies. It is well known that the endogenous synthesis of phytohormones can be influenced by nitrogen sources, although it is not completely established in which way glutamine acts in this process. The addition of this amino acid to the culture medium has enhanced the organogenesis rate and resulted in a better vigor of the shoots that were originated from the leaf bases of Ananas comosus (L.) Merr. cultured in in vitro conditions. It is also suggested that the tissue excision may result in a stressful condition by increasing the production of reactive oxygen species and changing the endogenous redox state, which might be involved in the induction of organogenic process. However, this stress should be beneficial only if restricted. The aim of this work was to comprehend the positive influence of glutamine on the in vitro adventitious organogenesis of pineapple leaf bases. It was also attempted to determine whether the glutamine would be involved on a possible oxidative stress decrease during the organogenesis induction. In order to answer these questions, we tried to correlate the presence of glutamine in the culture medium and the endogenous hydrogen peroxide, glutathione, ascorbate levels. The redox state of these antioxidants is also analyzed during the induction of adventitious shoot organogenesis. Moreover, two antioxidants enzymes activities are quantified in the leaf explants: catalase and superoxide dismutase. The glutathione influence on the process was also investigated, considering the glutamine presence or not. It was done in order to establish the effect of this antioxidant in the organogenic process. The results showed that glutathione could replace, but not enhance, the positive effect of glutamine on the organogenesis rate of pineapple leaf bases. This antioxidant did not substitute the positive effect presented by the glutamine on the acquisition of fresh and dry masses by the new shoots. On the other hand, glutathione enhanced the number of adventitious buds per explant. Apparently, the excision of the leaf bases and its subsequent cultivation in the induction culture medium resulted in the tissue oxidative stress early in the first 24 hours of incubation. This could be inferred by the high H2O2 concentrations detected during this period. However, this possible stressful condition was controlled during the culture period, leading to the return of the homeostasis of the tissue and allowing the cells to become determined to shoot organogenesis. During the probable period of oxidative stress, glutamine seemed to maintain the reduced redox state on both ASC and GSH. The results of the antioxidant enzymes activities suggested that CAT may have been responsible for the regulation of the endogenous H2O2 levels, while SOD did not showed significant changes during the induction of organogenesis of leaf bases cultivated either in SIM or SIMGln. Taken together, the results obtained in this work suggest that the oxidative stress caused by the excision of the leaf tissues and its in vitro cultivation may be an important signal to the induction of the leaf organogenesis. Furthermore, the glutamine may have a role in the maintenance of the reduced redox state when higher levels of endogenous H2O2 are present in the tissues.

Dentre os fatores relacionados à capacidade superior de regeneração in vitro de Solanum peruvianum, está a presença do alelo dominante Rg1. O gene RG1, envolvido na formação de gemas caulinares a partir de raízes e outros explantes, foi mapeado no cromossomo 3 entre os genes BETA-CAROTENE HYDROXYLASE (CrtR-b) e PHYTOENE SYNTHASE (PSY1). Variações alélicas também são conhecidas para genes CrtR-b e PSY1. white flower (wf) é o alelo de CrtR-b que produz pétalas brancas e yellow flesh (r) é o alelo de PSY1 que produz frutos amarelos. Os alelos wf e Rg1 com r foram introgredidos na cultivar Micro-Tom (Solanum lycopersicum L). Através da transferência sequencial de explantes de SIM para MB e de RIM para SIM, verificou-se que MT-Rg1 reduz o tempo necessário para a indução de gemas em um dia (6 dias em SIM para MT), devido a redução no tempo necessário para a aquisição de competência em um dia (2 dias para MT). Foram obtidos 30 possiveis recombinantes advindos do cruzamento Rg1/rg1 Wf/wf x rg1/rg1 wf/wf, baseados nas características de pétala branca (efeito do alelo wf) e maior ramificação (efeito do alelo Rg1). Todos os possíveis recombinantes foram testados in vitro quanto à capacidade de formar gemas caulinares em SIM e raízes em RIM. Com isso, 7 linhagens recombinantes foram confirmadas e utilizadas para o mapeamento fino da região na qual o gene RG1 está localizado no cromossomo 3. Para o mapeamento foram testados marcadores do tipo CAPS e SCAR, sendo utilizado o DNA genômico extraído de S. pennellii, S. peruvianum, Micro- MsK, MT, MT-Rg1, MT-wf e das 7 linhagens recombinantes, constatando-se que alguns marcadores moleculares desenhados para S. pennellii podem ser utilizados para S. peruvianum. Estas análises também evidenciaram que o segmento de introgressão de MT-Rg1 está entre o marcador P5 e o gene CrtR-b, totalizando 136 genes, entre os quais GRAS 10 destacou-se como principal candidato para a função gênica de Rg1. Complementarmente, foi realizada a análise de RNA-Seq (plataforma SOLiD) para a identificação de genes diferencialmente expressos entre MT e MT-Rg1. Com isso, observou-se que existem mais genes regulados negativamente do que positivamente durante a aquisição de competência. Devido ao grande número de genes diferencialmente expressos, alguns parâmetros foram utilizados para classificar os genes que poderiam ser quantificados por qRT-PCR em um experimento de regeneração in vitro. Entre os 361 genes classificados, 5 foram selecionados para a quantificação de sua expressão. Destes 5 genes, GRAS 10 e Serine/threonine protein phosphatase 7 foram os que apresentaram-se mais positivamente expressos e aparentemente são os que estão mais intimamente ligados a fase de aquisição de competência. Como existem muitos genes GRAS, foi feita uma árvore filogenética para posicioná-lo e identificar genes homólogos a ele. Com base na análise filogenética foi possível identificar o gene GRAS 10 como homológo ao gene SCL8 já identificado em Arabidopsis. Porém, pouco se sabe a respeito de SCL8. Desse modo, ainda é necessário confirmar a identidade do gene RG1, o que possibilitará a compreensão do processo de aquisição de competência. / The dominat allele Rg1 is related to the greater in vitro regeneration capacity of Solanum peruvianum L. The Rg1 gene is required for shoot formation from roots and others explants and was mapped on chromosome 3 between BETA-CAROTENE HYDROXYLASE (CrtR-b) and PHYTOENE SYNTHASE (PSY1) genes. Allelic variants are also known for the genes CrtR-b and PSY1. white flower (wf) is the allele of CrtR-b that produces white petals and yellow flesh (r) is the allele of PSY1 that produces yellow fruits. The alleles wf and Rg1 with r were introgressed into the Micro-Tom cultivar (Solanum lycopersicum L). Through the sequential transfer of explants from SIM to BM and RIM to SIM, we found that MT-Rg1 reduces the time required for the induction of shoots in one day (6 days on SIM for MT), due the reduction of the time required for competence acquisition in one day (2 days to MT). It was obtained 30 putative recombinants from crossing Rg1/rg1 Wf/wf x rg1/rg1 wf/wf. The recombinant lines were scored based on the presence of white petals (wf allele\'s effect) and increased shoot branching (Rg1 allele\'s effect). All putative recombinant lines were tested in vitro for their capability to form shoots in SIM and roots in RIM. Thus, 7 recombinant lines were selected and used to fine mapping the region where RG1 gene is located. CAPS and SCAR markers designed to S. pennellii were tested to fine-mapping, using as template genomic DNA samples from S. pennellii, S. peruvianum, Micro-MsK, MT, MT-Rg1, MT-wf and the 7 recombinant lines. These results confirmed that the molecular markers designed for S. pennellii can be successfully used for S. peruvianum. These analyzes also suggest that the introgressed segment of MT-Rg1 is located between the P5 marker and the CrtR-b gene. Within this region, there are 136 genes, including the GRAS 10 gene whichis the main candidate to RG1 gene function. In addition, we performed RNA-Seq analysis (SOLiD platform) to identify genes differentially expressed in MT and MT-Rg1. It was observed more down-regulated than up-regulated genes in the competence acquisition stage. Due to the large number of differentially expressed genes, some parameters were used for selection of genes that would have their expression validated by qRT-PCR in an in vitro regeneration test. Five genes among 361 genes differentialy expressed were selected to test their expression. Of these 5 genes, GRAS 10 and Serine / threonine protein phosphatase 7 were the most up-regulate genes and showed to be closely related to the stage of competence acquisition. Since there are many GRAS genes, we performed a phylogenetic analysis to identify homologous genes. Based on the phylogenetic analysis, GRAS 10 was identified as homologous to SCL8, a gene already identified in Arabidopsis. However, little is known about SCL8. Thus, it is still necessary to confirm the RG1 gene identity. This approach will provide a better understanding of competence acquisition process.

Diversos estudos elucidaram mecanismos envolvidos com a organogênese in vitro, porém pouco é conhecido a respeito da fase de aquisição de competência, fundamental para que a regeneração ocorra. Alguns genes já foram identificados por interferirem na fase de aquisição de competência em tomateiro (Solanum lycopersicum), mas ainda existem diversas lacunas a serem esclarecidas. Para investigar a expressão de genes e o controle hormonal na fase de aquisição de competência, foram utilizados os mutantes de tomateiro, sob o background genético da cultivar Micro-Tom (MT), MT-Rg1 e MT-pro (procera), os quais afetam positiva ou negativamente a organogênese in vitro, respectivamente. Embora a resposta constitutiva a giberelina no mutante MT-pro seja conhecida, a identidade molecular do gene RG1 permanece indefinida. O mutante MT-Rg1 apresenta aumento tanto na formação de gemas caulinares quanto de raízes e reduz o tempo necessário para a indução desses órgãos, devido à diminuição do período para a aquisição de competência. A partir do estabelecimento das fases de aquisição de competência e indução da organogênese in vitro para MT e MT-Rg1, foram identificados genes diferencialmente expressos entre estes genótipos. Entre estes genes, CELL DIVISION CYCLE ASSOCIATED 7 e LACCASE 1A estão regulados positivamente em MT-Rg1 e todos estão fortemente relacionados à fase de aquisição de competência, e a alterações na proliferação de células do protoxilema durante o início da organogênese. Por outro lado, a resposta constitutiva à giberelina no mutante MT-pro reduz a formação de gemas caulinares e raízes e aumenta a formação de calos in vitro, sem afetar o tempo requerido para a indução de gemas caulinares e raízes. De forma oposta a MT-Rg1, o gene CDCA7 apresenta expressão reduzida durante a fase de aquisição de competência em MT-pro, diminuindo o número de células do protoxilema em divisão. Outro fator importante para a divisão celular no mutante MT-pro é o aumento da expressão do gene WUS, causando um aumento da proliferação das stem cells, que são células indiferenciadas relacionadas à formação de novos órgãos. Esta proliferação celular inadequada, somada a uma alteração desfavorável na homeostase das citocininas, justifica o efeito negativo do alelo pro na formação de gemas caulinares, o que permitiu a criação de um novo modelo para organogênese in vitro / Several studies have enabled the discovery of mechanisms to achieve in vitro organogenesis; however, little is known about the phase of acquisition of competence, essential for regeneration. A few genes have been identified to interfere in the acquisition of the competence phase in tomato (Solanum lycopersicum), but there are still many gaps to be filled. We have used the mutants, under the genetic background of the Micro-Tom cultivar, MT-Rg1 and MT-pro (procera), which positively or negatively affect in vitro organogenesis, respectively, to investigate gene expression and the hormonal control in the phase of acquisition of competence. Despite the fact that the constitutive gibberellin response in the procera mutant is well-established, the molecular identity of RG1 gene remains unknown. The MT-Rg1 mutant presents an increase in the formation of both shoot and roots and a reduced period for the induction of these organs, because of the reduced time required for acquisition of competence.We searched for the identity of differentially expressed genes between MT and MT-Rg1 after the establishment of the competence acquisition phase and organogenesis induction stages. Among those genes, CDCA7 and LAC1A are upregulated in MT-Rg1 and these genes appear to be strongly related with the acquisition of competence phase and changes in proliferation of protoxylem cells during early organogenesis. The constitutive response to gibberellin in the MT-pro mutant decreases the formation of shoot and roots and increase in vitro calli formation, without reducing the induction phase of shoots and roots. Unlike MT-Rg1, MT-pro reduces the CDCA7L expression during the acquisition of competence phase, causing a reduction of the protoxylem dividing cells. Another important factor for cell division in MT-pro mutant is the increased expression of the WUS gene, leading to an abnormal proliferation of stem cells. Thereby, this abnormal cell proliferation, in addition to an unfavorable change in the cytokinin homeostasis, justify the negative effect of the pro allele in the shoot formation, which enabled the proposal of a new model for in vitro organogenesis

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Agrárias. Programa de Pós-Graduação em Recursos Genéticos Vegetais. / Made available in DSpace on 2012-10-23T11:12:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 252348.pdf: 3711855 bytes, checksum: 86deac7f81ee011560f37a619f1601de (MD5) / A fruticultura de clima temperado é uma atividade de grande importância sócio-econômica no Brasil, sendo que a maior área de produção está localizada na Região Sul do país, e o Estado de Santa Catarina é responsável por cerca de 50% da oferta nacional. O consumo da maçã vem aumentando e com o rápido aumento da área de cultivo da macieira, houve um acréscimo de problemas fitossanitários. Para manter a cultura da macieira em nível de produtividade desejada, a utilização de técnicas biotecnológicas para obtenção de mudas de qualidade genética-sanitária comprovada, das novas variedades, a produção de plantas matrizes básicas de melhor qualidade e produtividade, são algumas das condições importantes para a macieira. Assim, o objetivo deste trabalho foi desenvolver protocolos de regeneração in vitro para macieira (Malus domestica Borkh) cv. Galaxy, via organogênese direta, para estudos de propagação in vitro e melhoramento genético. Para isto foram usados como explantes segmentos nodais contendo gemas, apicais e laterais, e folhas os quais foram introduzidos em meio de cultura MS suplementado com BAP, TDZ e ANA. No estabelecimento in vitro, os tratamentos de assepsia aplicados foram pouco eficientes, apresentando índices de contaminação que variaram entre 5 a 40%. No processo de multiplicação in vitro, a concentração de 4,44 µM de BAP foi a mais efetiva para multiplicação e produção de brotos com altura igual ou superior a 20 mm. A respeito da organogênese, a partir de explante foliar, pôde-se observar que o tipo de explante, isto é, o limbo seccionado foi favorável ao processo de regeneração de brotações. Entretanto, o explante folha inteira apresentou os melhores resultados, onde obteve-se um maior número de explantes regenerados. A concentração de 9,1 µM de TDZ adicionada ao meio de cultura, foi a concentração que apresentou os resultados favoráveis a regeneração de brotações. No entanto, para os discos foliares, a concentração que apresentou resultados superiores foi 13,62 µM de TDZ. Os resultados das análises histológicas permitem inferir que a organogênese das brotações teve origem direta de células do mesofilo, ou seja, células do parênquima. Porém não podemos afirmar que todas as brotações adventícias originaram-se deste tecido, pois observou-se a presença de calos nos explantes no decorrer dos experimentos. The fruticultura of tempering climate is an activity of great partner-economic importance in Brazil, being that the biggest area of production is located in the South Region of the country, and the State of Santa Catarina is responsible for about 50% of offers national. The consumption of the apple comes increasing and with the fast increase of the area of culture of the apple tree, it had an addition of resistant to biotic and abiotic stresses. To keep the culture of the apple tree in level of desired productivity, the use of biotechnological techniques for attainment of dumbs of proven genetics-sanitary quality, of the new varieties, the production of basic first plants of better quality and productivity, they are some of the important conditions for the apple tree. The objective of this work was to develop regeneration protocols in vitro for apple tree (Malus domestica Borkh) cv. Galaxy, of organogenesis direct, for propagation studies in vitro and genetic improvement. For used as internodal explants and leaves where they had been introduced in cultured MS medium, with BAP, TDZ and ANA. In the establishment in vitro the applied treatments of asepsis had been little efficient, presented contamination indices that had varied between 5-40%. In the multiplication process the concentration of 4,44 µM of BAP was most effective for multiplication and production of shoots. Regarding organogenesis from leave explant, it could be observed that the type of explant, that is, the cut of the limb was favorable to the process of regeneration of shoots. However, the explant entire leaf presented the best ones resulted, where a bigger number of regenerated explants was gotten. The concentration of 9,1 µM of TDZ added to the medium of culture, was the concentration that presented the favorable results the regeneration of shoots. However, for folial disks, the concentration that presented resulted superior was 13,62 µM of TDZ. The results of the histological analyses allow to infer that organogenesis of the shoots, had direct origin of cells of mesophyll, or either, cells of parenchyma, however we cannot affirm that all the adventitious buds had originated, therefore observed it presence of callus in the explants in elapsing of the experiments.