Made available in DSpace on 2014-08-20T13:59:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_mirian_de_farias_ribeiro.pdf: 2449435 bytes, checksum: 6695d40137c267cf6058be71ba7803e7 (MD5) Previous issue date: 2013-03-28 / Pear orchards with high density planting were possible due to the use of rootstock quince (Cydonia oblonga Mill.), thus obtaining small plants and rapid fruiting, and provide uniformity to these orchards. Techniques that may improve the ability to propagation this rootstock are of great interest. The aim of this study was to adjust protocols for in vitro multiplication and regeneration of quince cultivars MC and Adams. The results of this word are presented in chapter. Material used in the experiments was obtained from in vitro propagation in culture medium consisting of MS salts and vitamins supplemented with myo-inositol (100 mg L-1), 6 - benzylaminopurine (BA) (0.3 mg L-1), sucrose (30 g L-1) and agar (8 g L-1). Chapter 1 we used MS medium added agar (8 g L-1) on solidified medium and vermiculite (3 g flask-1) in the liquid medium and the flasks were sealed with aluminum foil, PVC film and polypropylene cap. In Chapter 2 how carbon source in culture medium was added sucrose, fructose or sorbitol at concentrations 0, 15, 30, 45 and 60 g L-1. For in vitro regeneration the Chapter 3 was divided in two experiments. In experiment 1 the culture medium consisted of salts and vitamins MS and SH supplemented with myoinositol (100 mg L-1), sucrose (30 g L-1), agar (8 g L-1), NAA (2 mM) and TDZ at concentrations 0, 1.5, 3, 4.5 and 6 μM. In experiment 2 the culture medium consisted of SH salts and vitamins supplemented with myo-inositol (100 mg L-1), sucrose (30 g L-1), agar (8 g L-1), TDZ (0 , 1.5, 3, 4.5 and 6 μM) combined with NAA or IBA at concentrations of 0, 1.0, 1.5 and 2 μM. All experiments were evaluated after 60 days. Considering the results presented in Chapter 1 is possible to conclude that the use of culture medium solidified with agar and the flasks sealed with aluminum foil or polypropylene cap favored the in vitro multiplication of quince 'MC' and 'Adams'. In the second chapter it was found that the sucrose concentration of 45 g L-1 to cultivar MC and 30 g L-1 to cultivar Adams are the best concentrations and carbon source for in vitro multiplication quince. In the Chapter 3 first verified in experiment 1 that the in vitro regeneration of adventitious shoots quince cultivars MC and Adams was favored by the use of SH culture medium and addition of 4.5 μM TDZ to cultivar MC and 6 μM TDZ for cultivar Adams. And in experiment 2 it was concluded that multiple shoots were formed from the combination of 4.5 μM TDZ and 2 μM NAA for cultivar MC and 6 μM TDZ and 2 μM NAA to cultivar Adams. / Pomares de pereira com plantio em alta densidade foram possíveis devido a utilização de portaenxerto de marmeleiro (Cydonia oblonga Mill.), obtendo-se assim plantas de pequeno porte e rápida frutificação, além de proporcionar uniformidade a esses pomares. Técnicas que venham melhorar a capacidade de propagação deste portaenxerto são de grande interesse. O objetivo desse trabalho foi ajustar protocolos de multiplicação e regeneração in vitro de marmeleiro cultivares MC e Adams. Os resultados do trabalho estão apresentados na forma de capítulos. O material vegetal utilizado nos experimentos foi obtido a partir da multiplicação in vitro em meio de cultura básico composto dos sais e vitaminas MS, suplementados com mio-inositol (100 mg L-1), 6- benzilaminopurina (BAP) (0,3 mg L-1), sacarose (30 g L- 1) e ágar (8 g L-1). No capítulo 1, utilizou-se meio básico acrescentado de ágar (8 g L- 1) no meio solidificado e vermiculita (3 g frasco-1) no meio líquido e os frascos foram vedados com papel alumínio, filme PVC e tampa de polipropileno. No capítulo 2, como fonte de carbono no meio de cultura foi utilizado sacarose, frutose ou sorbitol nas concentrações de 0, 15, 30, 45 e 60 g L-1. Para regeneração in vitro o capítulo 3 foi dividido em dois experimentos. No experimento 1 os meios de cultura constituíram-se dos sais e vitaminas MS e SH, suplementados com mio-inositol (100 mg L-1), sacarose (30 g L-1), ágar (8 g L-1), ANA (2 μM) e TDZ nas concentrações de 0, 1,5, 3, 4,5 e 6 μM. No experimento 2 o meio de cultura constituiu-se dos sais e vitaminas SH, suplementado com mio-inositol (100 mg L-1), sacarose (30 g L-1), ágar (8 g L-1), TDZ (0, 1,5, 3, 4,5 e 6 μM) combinado com ANA ou AIB nas concentrações de 0; 1,0; 1,5 e 2 μM. Todos os experimentos foram avaliados após 60 dias. Diante dos resultados apresentados no capítulo 1 é possível concluir que a utilização de meio de cultura solidificado com ágar e os frascos vedados com papel alumínio ou tampa de polipropileno favorecem a multiplicação in vitro de marmeleiro 'MC' e 'Adams'. No capítulo 2 constatou-se que a sacarose na concentração de 45 g L-1 para cultivar MC e 30 g L-1 para cultivar Adams são as melhores concentrações e fonte de carbono para multiplicação in vitro dos portaenxertos de marmeleiro testados. No capítulo 3, primeiro verificou-se no experimento 1 que a regeneração in vitro de brotos adventícios de marmeleiro das cultivares MC e Adams foi favorecida pelo uso do meio de cultura SH e pela adição de 4,5 μM de TDZ para cultivar MC e 6 μM de TDZ para a cultivar Adams. No experimento 2 concluiu-se que houve maior taxa de regeneração a partir da combinação de 4,5 μM de TDZ e 2 μM de ANA para cultivar MC e 6 μM de TDZ e 2 μM de ANA para cultivar Adams.

Embora desfrute de inegável importância econômica, os citros estão sujeitos a muitos problemas sanitários sendo alguns, limitantes para o cultivo como é o caso das doenças causadas por vírus. A morte súbita dos citros é uma doença relacionada à combinação copa/ porta-enxerto e manifesta sintomas na região da enxertia sobre porta-enxertos intolerantes. Embora sua etiologia não tenha sido determinada, há indicações que a causa da MSC esteja relacionada a uma estirpe do vírus da tristeza dos citros (CTV), a um vírus do gênero Marafivirus, ou a uma associação entre eles. Uma vez que a transformação genética têm sido considerada como uma ferramenta auxiliar a programas de melhoramento de citros, o objetivo deste trabalho foi obter plantas transgênicas de limão \'Cravo\' e laranja \'Valência\' contendo o gene da replicase do Marafivirus e estudar a regeneração e obtenção de plantas in vitro de laranja azeda, via organogênese, visando futuros trabalhos de transformação genética. Experimentos para indução da organogênese in vitro foram realizados avaliando-se citocininas (BAP, TDZ e CIN), em diferentes concentrações, isoladamente ou em combinação com ANA, condições de luminosidade (fotoperíodo de 16 h e escuro por 30 dias), meios de cultivo e explantes (provenientes de plantas germinadas in vitro e de plantas mantidas em estufa). Além disso, avaliou-se o enraizamento dos brotos regenerados. Para a transformação genética, explantes de limão \'Cravo\' e laranja \'Valência\' foram inoculados e co-cultivados com a estirpe EHA 105 de Agrobacterium tumefaciens contendo o gene da replicase do Marafivirus (em seqüência sense e antisense interligadas por um íntron). A construção gênica foi elaborada a partir do plasmídeo pCAMBIA 2201, dirigidas pelo promotor 35S e terminador NOS, contendo ainda o gene de seleção nptII. A transformação foi confirmada por análises de PCR e \'Southern blot\'. A transcrição do gene foi avaliada por RT-PCR e \'northern blot\'. A adição de BAP, combinada ou não com ANA, e em combinações com CIN ao meio de cultivo, assegurou maior formação de gemas adventícias em segmentos de epicótilo de laranja azeda. Entretanto, TDZ não se mostrou favorável a essa resposta, que também é afetada pela ausência de luz. Os explantes provenientes do cultivo in vitro mostraram-se mais favoráveis à resposta organogênica. O enraizamento das brotações de laranja azeda regeneradas foi obtido no meio MT com metade da concentração de sais, sem ou com auxinas. Foi possível obter plantas transgênicas de limão \'Cravo\' e de laranja \'Valência\' contendo o gene da replicase do Marafivirus utilizando-se segmentos internodais como explantes. A análise de \'Southern blot\' confirmou a integração de um a quatro eventos de inserção do transgene no genoma das plantas. A transcrição do gene da replicase do Marafivirus e do gene nptII foi observada por RT-PCR. / In spite of great economic importance, the citrus industry is affected by many phytopathological problems some, limiting its cultivation such as virus-caused diseases. The citrus sudden death disease is related to scion/rootstock combinations and manifests symptoms in the grafting area of intolerant rootstocks. Although its etiology has not been determined, there are indications that the cause of MSC might be related to a strain of the Citrus tristeza virus (CTV), to a virus of the Marafivirus group, or to an association of both viruses. Since the genetic transformation has been considered as an auxiliary tool to programs of citrus improvement, the objectives of this work were to obtain transgenic plants of the Rangpur lime and Valencia sweet orange containing the Marafivirus replicase gene and study the in vitro regeneration of sour orange plants through organogenesis, aiming for future work in genetic transformation. Experiments for induction of in vitro organogenesis were carried out evaluating citocinins (BAP, TDZ and KIN), in different concentrations, separately or in combination with NAA, lighting conditions (photoperiod of 16 hours and darkness for 30 days), cultivation media and explants (coming from in vitro germinated plants and from green house cultivated plants). Besides this, rooting of the regenerated shoots was evaluated. For the genetic transformation, Rangpur lime and Valencia sweet orange explants were inoculated and co-cultivated with the EHA-105 Agrobacterium tumefaciens strain containing the Marafivirus replicase gene (in sense and antisense sequence linked by an intron). The genetic construct used derived from the pCAMBIA 2201 plasmid, driven by the 35S promoter and NOS terminator, containing the selection nptII gene. The genetic transformation was confirmed by PCR and Southern blot analysis. The gene transcription was evaluated by RT-PCR and northern blot. The addition of BAP to the culture medium, combined or not with NAA, and in combinations with KIN, assured a greater formation of adventitious buds in sour orange epicotyl segments. However, TDZ was not favorable to this response, that is also affected by the absence of light. Explants coming from in vitro cultivation were more favorable to the organogenic response. Rooting of sour orange regenerated shoots was obtained in MT medium with half the salt concentration, with or without auxin. It was possible to obtain transgenic Rangpur lime and Valencia sweet orange plants containing the Marafivirus replicase gene using internodal segments as explants. The Southern blot analysis confirmed the integration of one to four copies of the transgene in the plant genome. The transcription of the Marafivirus replicase gene and the nptII gene was observed by RT-PCR.

Embora desfrute de inegável importância econômica, os citros estão sujeitos a muitos problemas sanitários sendo alguns, limitantes para o cultivo como é o caso das doenças causadas por vírus. A morte súbita dos citros é uma doença relacionada à combinação copa/ porta-enxerto e manifesta sintomas na região da enxertia sobre porta-enxertos intolerantes. Embora sua etiologia não tenha sido determinada, há indicações que a causa da MSC esteja relacionada a uma estirpe do vírus da tristeza dos citros (CTV), a um vírus do gênero Marafivirus, ou a uma associação entre eles. Uma vez que a transformação genética têm sido considerada como uma ferramenta auxiliar a programas de melhoramento de citros, o objetivo deste trabalho foi obter plantas transgênicas de limão \'Cravo\' e laranja \'Valência\' contendo o gene da replicase do Marafivirus e estudar a regeneração e obtenção de plantas in vitro de laranja azeda, via organogênese, visando futuros trabalhos de transformação genética. Experimentos para indução da organogênese in vitro foram realizados avaliando-se citocininas (BAP, TDZ e CIN), em diferentes concentrações, isoladamente ou em combinação com ANA, condições de luminosidade (fotoperíodo de 16 h e escuro por 30 dias), meios de cultivo e explantes (provenientes de plantas germinadas in vitro e de plantas mantidas em estufa). Além disso, avaliou-se o enraizamento dos brotos regenerados. Para a transformação genética, explantes de limão \'Cravo\' e laranja \'Valência\' foram inoculados e co-cultivados com a estirpe EHA 105 de Agrobacterium tumefaciens contendo o gene da replicase do Marafivirus (em seqüência sense e antisense interligadas por um íntron). A construção gênica foi elaborada a partir do plasmídeo pCAMBIA 2201, dirigidas pelo promotor 35S e terminador NOS, contendo ainda o gene de seleção nptII. A transformação foi confirmada por análises de PCR e \'Southern blot\'. A transcrição do gene foi avaliada por RT-PCR e \'northern blot\'. A adição de BAP, combinada ou não com ANA, e em combinações com CIN ao meio de cultivo, assegurou maior formação de gemas adventícias em segmentos de epicótilo de laranja azeda. Entretanto, TDZ não se mostrou favorável a essa resposta, que também é afetada pela ausência de luz. Os explantes provenientes do cultivo in vitro mostraram-se mais favoráveis à resposta organogênica. O enraizamento das brotações de laranja azeda regeneradas foi obtido no meio MT com metade da concentração de sais, sem ou com auxinas. Foi possível obter plantas transgênicas de limão \'Cravo\' e de laranja \'Valência\' contendo o gene da replicase do Marafivirus utilizando-se segmentos internodais como explantes. A análise de \'Southern blot\' confirmou a integração de um a quatro eventos de inserção do transgene no genoma das plantas. A transcrição do gene da replicase do Marafivirus e do gene nptII foi observada por RT-PCR. / In spite of great economic importance, the citrus industry is affected by many phytopathological problems some, limiting its cultivation such as virus-caused diseases. The citrus sudden death disease is related to scion/rootstock combinations and manifests symptoms in the grafting area of intolerant rootstocks. Although its etiology has not been determined, there are indications that the cause of MSC might be related to a strain of the Citrus tristeza virus (CTV), to a virus of the Marafivirus group, or to an association of both viruses. Since the genetic transformation has been considered as an auxiliary tool to programs of citrus improvement, the objectives of this work were to obtain transgenic plants of the Rangpur lime and Valencia sweet orange containing the Marafivirus replicase gene and study the in vitro regeneration of sour orange plants through organogenesis, aiming for future work in genetic transformation. Experiments for induction of in vitro organogenesis were carried out evaluating citocinins (BAP, TDZ and KIN), in different concentrations, separately or in combination with NAA, lighting conditions (photoperiod of 16 hours and darkness for 30 days), cultivation media and explants (coming from in vitro germinated plants and from green house cultivated plants). Besides this, rooting of the regenerated shoots was evaluated. For the genetic transformation, Rangpur lime and Valencia sweet orange explants were inoculated and co-cultivated with the EHA-105 Agrobacterium tumefaciens strain containing the Marafivirus replicase gene (in sense and antisense sequence linked by an intron). The genetic construct used derived from the pCAMBIA 2201 plasmid, driven by the 35S promoter and NOS terminator, containing the selection nptII gene. The genetic transformation was confirmed by PCR and Southern blot analysis. The gene transcription was evaluated by RT-PCR and northern blot. The addition of BAP to the culture medium, combined or not with NAA, and in combinations with KIN, assured a greater formation of adventitious buds in sour orange epicotyl segments. However, TDZ was not favorable to this response, that is also affected by the absence of light. Explants coming from in vitro cultivation were more favorable to the organogenic response. Rooting of sour orange regenerated shoots was obtained in MT medium with half the salt concentration, with or without auxin. It was possible to obtain transgenic Rangpur lime and Valencia sweet orange plants containing the Marafivirus replicase gene using internodal segments as explants. The Southern blot analysis confirmed the integration of one to four copies of the transgene in the plant genome. The transcription of the Marafivirus replicase gene and the nptII gene was observed by RT-PCR.

Made available in DSpace on 2014-08-20T13:59:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao_ilda_castro_silva.pdf: 4362339 bytes, checksum: bf7e02c52f488cce4b322ad0f90ed17c (MD5) Previous issue date: 2010-03-25 / Quinces (Cydonia oblonga Mill.) are good alternative for pear tree rootstock diversification, due the interest to control the plants development to obtain fast frutification, plants uniformity and higher fruit quality. Their propagation through the tissue culture allows the plant production in a large scale, with high sanitary in a short period of time. Another application of this technique is the regeneration or in vitro morphogenesis that consists in the organs induction by somatic embryogenesis or organogenesis, which is a pre-requirement for genetic transformation. The current work aimed at optimizing the multiplication and in vitro regeneration of Cydonia oblonga Mill. rootstocks, cultivars Adams and MC. For the multiplication experiments were used apicals shoots with excised tip (1,5cm), and inoculated in MS½ and MS¾ or MS medium modified (¾ of the normal concentration of NH4NO3 and KNO3 and EDTA-Ferric), containing different BAP concentrations or interaction among BAP and AG3 concentrations. The explants were maintained in growth chamber with 16h photoperiod, 48 μmol m-2 s-1 density photon flux and 25±2ºC temperature, for 40 days. The variables analyzed were shoots number per explants, shoots length, node number per shoot and percentage of hyperhydric shoots. In the regeneration experiments it was used as initial explants entire leaves or third basal leaves, young or adult leaves, with or without petiole, inoculated in MS medium, supplemented with TDZ (0, 1, 2, 3 and/or 4mg dm-3) and ANA (0,1mg dm-3), maintained in darkness for 40 days. Later, they were transferred to MS medium containing 1mg dm-3 TDZ and maintained in the light for 30 days more. After that period, the percentage of regenerate explants, the shoots number for regenerate explant and type of organogenesis formed was evaluated. Both cultivars present potential for in vitro propagation, however 'Adams' is more responsive, because it was obtained 6,3 shoots per explant, with 2,8mg dm-3 BAP, while ' MC' presents larger sensibility to this plant growth regulator and to develop the hyperhydric explants, however it demonstrated to be more efficient to the in vitro regeneration, presenting 26% of regenerating explants (with 1mg dm-3 TDZ). It was verified for both cultivars, the entire explant leaves were more responsive for the regeneration than basal thirds and that this happens mainly in the basal area of the explant, through direct and 9 indirect organogenesis. Based on the multiplication and the regeneration results, it was concluded that is possible the in vitro multiplication of these cultivars in large scale, as well as to improve the regeneration rates for future plant breeding works for characteristics of interest, through genetic transformation. / Os marmeleiros (Cydonia oblonga Mill.) são excelente alternativa de diversificação de porta-enxertos para pereiras, devido ao interesse por plantas com porte reduzido, rápida frutificação, uniformidade nos pomares e boa qualidade das frutas. A sua propagação por meio da cultura de tecidos permite a produção de plantas homogêneas, em larga escala, com alta qualidade sanitária e num curto espaço de tempo. Outra aplicação desta técnica é a regeneração ou morfogênese in vitro, que consiste na formação de órgãos, seja por meio de embriogênese somática ou organogênese, sendo esta um pré-requisito para a transformação genética. O presente trabalho teve como objetivo otimizar a multiplicação e regeneração in vitro dos porta-enxertos de Cydonia oblonga Mill., cultivares Adams e MC. Para os experimentos de multiplicação foram utilizadas brotações apicais com ápice excisado (1,5cm), inoculadas em meio MS½ e MS¾ ou MS modificado (¾ da concentração normal de NH4NO3 e KNO3 e Ferro na forma de EDTA-Férrico), contendo diferentes concentrações de BAP ou interação entre BAP e AG3, mantidas em câmara de crescimento com fotoperíodo de 16 horas, 48 μmol m-2 s-1 e 25±2ºC de temperatura por 40 dias. Após, analisaram-se as variáveis: número de brotações por explante, comprimento das brotações, número de nós por brotação e percentagem de explantes com hiperidricidade. Nos experimentos de regeneração utilizou-se como explante inicial folhas inteiras ou terços basais, jovens ou adultas, com ou sem pecíolo, inoculados em meio MS, suplementados com TDZ (0, 1, 2, 3 e/ou 4mg dm-3) e ANA (0,1mg dm-3), permanecendo no escuro por 40 dias. Posteriormente, foram transferidos para meio MS contendo 1mg dm-3 de TDZ e mantidos na luz por mais 30 dias. Após esse período, avaliou-se a percentagem de explantes regenerados, o número de brotações por explante regenerante e tipo de organogênese formada. As duas cultivares estudadas apresentam potencial para a propagação in vitro, porém Adams foi mais responsivo, pois obteve-se 6,3 brotações por explante, com 2,8mg dm-3 de BAP, enquanto MC apresenta maior sensibilidade a altas concentrações deste regulador de crescimento e à vitrificação, porém demonstrou ser mais eficiente durante a regeneração in vitro, apresentando 7 valores aproximados de 26% de explantes regenerantes (utilizando 1,0mg dm-3 de TDZ). Para ambas cultivares, o explante folha inteira é mais responsivo à regeneração do que terços basais e que esta ocorre principalmente na região basal do explante, via organogênese direta ou indireta. Baseado nos resultados obtidos tanto na fase de multiplicação quanto na de regeneração, verifica-se que é possível multiplicar in vitro estas cultivares em larga escala, bem como melhorar as taxas de regeneração para futuros trabalhos de melhoramento para características de interesse, via transformação genética.

Patchouli is an aromatic species of Asian origin that has been cultivated in various parts of the world for the extraction of essential oil of its leaves. The essential oil is used by the perfume, cosmetic and food industries. Patchouli is an economically important species need to have its genetic material preserved. In this context, the aim of this study was to develop protocols for micropropagation and in vitro conservation of three accessions of patchouli. For the experiments of micropropagation MS medium supplemented with different concentrations of kinetin and IAA or NAA were tested. For the acclimatization assays different mixtures of coconut coir and vermiculite supplemented with NPK fertilizer and limestone were tested. For callus induction, different doses of 2,4-D were combined with BAP and kinetin. For the in vitro conservation assays different growth temperatures, osmotic regulators and/or inhibitors of growth were tested. The different accessions showed shoot regeneration via direct organogenesis. Accession POG002 can be propagated using 0.5 mg.L-1 kinetin and 0.1 mg.L-1 NAA, accession POG014 using 2.0 mg L-1 kinetin and 0.1 mg.L-1 NAA, and accession POG021 using 1.0 mg.L-1 kinetin and 0.5 mg.L-1 IAA. The acclimatization of accessions POG002, POG014 and POG021 can be performed with the substrate coconut coir + NPK (3-12-6) fertilizer (12 g.L-1) + limestone (1 g.L-1). The larger sizes of calluses were obtained using: 0.022 mg.L-1 2,4-D and 0.113 mg.L-1 BAP, 0.022 mg.L-1 2,4-D and 0.225 mg.L-1 BAP and 0.110 mg.L-1 2,4-D and 0.113 mg.L-1 BAP for accession POG014; 0.022 mg.L-1 2,4-D and 0.113 mg.L -1 BAP, 0.022 mg.L-1 2,4-D and 0.225 mg.L-1 BAP for POG021; and 0.022 mg.L-1 2,4-D and 0.225 mg.L-1 BAP for POG002. The conservation of accession POG002 can be realized using 0.5 mg.L-1 abscisic acid for three months at 18°C; accession POG014 can be conservated for three months using 0.5 mg.L-1 of abscisic acid at 18°C; and POG021 can be maintained for six months using sucrose 10 g.L-1 and sorbitol 5 g.L-1 at 25°C. / O patchouli é uma espécie aromática de origem asiática que tem sido cultivada em diversas partes do mundo para extração de óleo essencial de suas folhas. Este óleo essencial é empregado nas indústrias de perfumes, cosmética e alimentícia. Por se tratar de uma espécie de importância econômica local e mundial o patchouli necessita ter seu material genético preservado. Neste contexto, o objetivo geral deste trabalho foi desenvolver protocolos de micropropagação e conservação in vitro de três acessos de patchouli. Para os experimentos de micropropagação foi testado meio MS suplementado com diferentes concentrações de cinetina e as auxinas AIA ou ANA. Nos ensaios de aclimatização testou-se diferentes misturas de pó de coco e vermiculita suplementado com adubo NPK formulado e calcário. Para indução de calos, doses distintas de 2,4-D foram combinadas com as citocininas BAP e cinetina. Nos ensaios de conservação in vitro testou-se diferentes temperaturas de cultivo, reguladores osmóticos e/ou inibidores de crescimento. Os diferentes acessos apresentaram regeneração de brotos via organogênese direta. O acesso POG002 pode ser propagado na presença de 0,5 mg.L-1 de cinetina e 0,1 mg.L-1 de ANA; o acesso POG014 com 2,0 mg.L-1 de cinetina e 0,1 mg.L-1 de ANA; e o acesso POG021 com o emprego de 1,0 mg.L-1 de cinetina e 0,5 mg.L-1 de AIA. A aclimatização dos acessos POG002, POG014 e POG021 pode ser realizada com o substrato pó de coco + NPK (3-12-6) (12 g.L-1) + calcário (1 g.L-1). Os maiores tamanhos de calos foram obtidos nos seguintes meios: 0,022 mg.L-1 de 2,4-D e 0,113 mg.L-1 de BAP, 0,022 mg.L-1 de 2,4-D e 0,225 mg.L-1 de BAP, e 0,110 mg.L-1 de 2,4-D e 0,113 mg.L-1 de BAP para o acesso POG014; 0,022 mg.L-1 de 2,4-D e 0,113 mg.L-1 de BAP, 0,022 mg.L-1 de 2,4-D e 0,225 mg.L-1 de BAP para o POG021; e 0,022 mg.L-1 de 2,4-D e 0,225 mg.L-1 de BAP para o POG002. A conservação do acesso POG002 pode ser realizada com 0,5 mg.L-1 ácido abscísico por três meses a 18°C; o acesso POG014 pode ser conservado por três meses empregando 0,5 mg.L-1 de ácido abscísico a 18°C; e o acesso POG021 pode ser mantido por seis meses com uso de sacarose 10 g.L-1 e sorbitol 5 g.L-1 a 25°C.

Brachiaria é um gênero de forrageiras da família Poaceae que apresenta plantas que se reproduzem por via sexual e assexualmente por apomixia,reprodução por sementes. A apomixia desperta interesse biológico e biotecnológico, pela perspectiva de levar esta característica de clonagem de plantas via sementes, a outras espécies. As cultivares plantadas de B. brizantha cv. Marandu e B. decumbens cv. Basilisk são poliplóides e reproduzem-se por apomixia, enquanto as plantas sexuais são diplóides,o que inviabiliza os cruzamentos, dificultando sobremaneira o melhoramento. A transformação genética é uma estratégia que vem sendo incorporada ao melhoramento genético. A natureza apomítica destasplantas pode permitir a clonagem e estabilidade das plantas transgênicas. Para transformação genética é necessário o desenvolvimento de um método eficiente de regeneraçãoin vitro. B. brizantha é considerada recalcitrante a cultura de tecidos, e métodos eficientes associados com os sistemas de transformação genética ainda não foram descritos na literatura. O arroz (Oryza sativa) é uma Poaceae modelo para estudos de genética inversa, no entanto, cultivares tropicais do grupo japônica são recalcitrantes a transformação genética, como é o caso da cultivar Primavera. O método direto de transformação genética mais amplamente utilizado é a biobalística, e vem sendo aplicado em espécies de monocotiledôneas, uma vez que essas não são hospedeiros naturais de Agrobacterium tumefaciens. No entanto, vários fatores tem sido testados no sentido de favorecer a interação e transferência de genes durante a cocultura para obtenção de transgênicos em diversas espécies de monocotiledôneas. Os objetivos deste estudo foram obter sistemas de regeneração in vitro deB. Brizanthae de arroz cultivar Primavera para transformação genética destas espécies. Em B. brachiaria foram obtidos sistema de micropropagação, organogênese, calos embriogênicos, unidades embriogênicas e suspensões celulares, e para a cultivar Primavera de arroz foram obtidas unidades embriogênicas, que foram caracterizadas morfo-anatomicamente e quanto as condições de indução, multiplicação e regeneração in vitro. Métodos de expressão transiente e estável de genes marcadores foram estabelecidos para B brizantha via biobalística e Agrobacterium tumefaciens. A natureza da transgenia foi confirmada por métodos histoquímico e molecular como PCR e Southern blot. Os sistemas de regeneração e transformação obtidos mostraram-se eficientes e irão contribuir para os estudos da apomixia e introdução de genes de interesse em braquiária / Brachiaria is a genus of Poaceae family forage grass that reproduces by sexual and asexually by apomixis. Apomixis is of biological and biotechnological interest awakened by the prospect of bringing this feature of cloning plants through seed to other species. B. brizantha cv. Marandu and B. decumbens cv. Basilisk are polyploid and reproduce by apomixis, while the sexual plants are diploid, which makes the crosses, greatly hindering the improvement. Genetic transformation is a strategy that is being incorporated into breeding programs. The nature of these apomictic plants may allow the cloning and the stability of transgenic plants. For genetic transformation is necessary to develop an efficient method of in vitro regeneration. B. brizantha is considered recalcitrant to tissue culture, and efficient methods associated with the genetic transformation systems have not been described in the literature. Rice (Oryza sativa) is a Poaceae model for studies of reverse genetics; however, tropical cultivars from japonica group are recalcitrant to genetic transformation, such as Primavera cultivar. Biolistic is the genetic transformation direct method most widely used, and has been applied to species of monocots, since these are not natural hosts of Agrobacterium tumefaciens. However, several factors have been tested in order to promote interaction and gene transfer during coculture for obtaining transgenics in several monocots species. The objectives of this study were to obtain in vitro regeneration and genetic transformation systems for these species. In B. Brachiaria systemsfor micropropagation, organogenesis, embryogenic units and embryogenic cell suspensions were obtained, and forrice Primavera cultivar embryogenic units were obtained, which was morpho-anatomical characterized and in vitro induction, proliferation and regeneration conditions established. Methods for transient and stable gene expression have been acquired for B. brizanthavia biolistic and Agrobacterium tumefaciens. The nature of the embryogenic callus and transgenic plants was confirmed by histochemical and molecular methods such as PCR and Southern blot. The regeneration and transformation systems showed to be effective and will contribute to apomixis studies and introduction of genes of interest in B. brizantha

O presente trabalho teve como principal objetivo obter plantas transgênicas, dos cultivares porta-enxerto limão \'Cravo\' e laranja azeda e de cultivares copa de laranja doce, expressando genes que possam influenciar no nível de resistência ao vírus da tristeza dos citros (CTV) e, possivelmente à morte súbita dos citros. Buscou-se ainda estudar a organogênese in vitro de espécies cítricas. Experimentos para a indução da organogênese in vitro foram realizados a partir de segmentos de epicótilos de plântulas germinadas in vitro de espécies cítricas avaliando-se: a resposta organogênica de três diferentes regiões do epicótilo, na presença (1,0 mg.L-1) ou ausência de BAP, em meio MT, e a regeneração em diferentes concentrações de BAP (0; 0,5; 1,0; 1,5 e 2,0 mg.L-1) adicionadas ao meio MT. Também avaliou-se a regeneração de segmentos internodais de limão ?Cravo? e laranja azeda em diferentes concentrações de BAP (0; 0,5; 1,0; 2,0 e 4,0 mg.L-1) em meio MT; e de laranja azeda em meio de cultura MT e DBA3, suplementados com diferentes concentrações de BAP (0; 1,0 e 2,0 mg.L-1) e ANA (0; 0,3 e 0,5 mg.L-1). Foi utilizado o método de transformação genética mediado por Agrobacterium tumefaciens utilizando-se tecido juvenil coletado de plantas cultivadas in vitro (segmentos de epicótilo) ou em casa de vegetação (segmentos internodais) como explantes. Utilizou-se a estirpe EHA105 de A. tumefaciens, contendo os plasmídeos: a) pCTV-CP: contendo o gene da capa protéica do CTV; b) pCTV-dsCP: contendo repetições invertidas do gene da capa protéica do CTV, interligadas pelo intron do gene da quitinase de citros; c) pCTVcons: contendo uma seqüência conservada antisense do CTV. As construções gênicas foram elaboradas a partir do plasmídeo pCAMBIA 2201, dirigidas pelo promotor 35S e o terminador NOS. Foram utilizados também os genes de seleção nptII e o repórter GUS. As gemas adventícias desenvolvidas foram identificadas como transgênicas pelo teste histoquímico GUS e por PCR e a confirmação da transformação genética foi feita por Southern Blot. A expressão da proteína do CTV foi verificada pelo teste serológico de PTA-ELISA. A resposta morfogênica em função da região do epicótilo e das concentrações da citocinina BAP é dependente do cultivar de citros. A suplementação do meio de cultura com a citocinina BAP proporcionou um maior número de gemas adventícias regeneradas por explante, tanto em segmentos de epicótilo como em segmentos internodais dos cultivares de citros estudados. A suplementação do meio de cultura com a citocinina BAP é essencial na regeneração de gemas adventícias em segmentos internodais de laranja azeda. Foi possível regenerar plantas transgênicas, pelo protocolo de transformação genética mediado por Agrobacterium tumefaciens de limão \'Cravo\' contendo o gene da capa protéica do vírus da tristeza dos citros (pCTV-CP) utilizando-se segmentos de epicótilo e segmentos internodais como fonte de explante, e com uma seqüência conservada antisense do CTV, utilizando-se segmentos internodias; e de laranja \'Hamlin\' contendo o gene da capa protéica do CTV, com as construções gênicas pCTV-dsCP e pCTV-CP, e com uma seqüência conservada antisense do CTV, utilizando-se segmentos de epicótilo como fonte de explante. / The objective of the present work was to obtain transgenic plants of rootstocks Rangpur lime and sour orange as well as sweet orange scion varieties, expressing genes that would possibly influence the levels of resistance to the Citrus tristeza virus (CTV) and Citrus sudden death disease. The in vitro organogenesis of Citrus species was also studied. In vitro organogenesis experiments were conducted with epicotyl segments obtained from in vitro germinated seedlings of different Citrus species in order to evaluate: organogenic response of three epicotyl regions, in the presence (1,0 mg.L-1) or absence of BAP, in MT medium, and the regeneration using different BAP concentrations (0; 0,5; 1,0; 1,5 e 2,0 mg.L-1) added to MT medium. The regeneration of internodal segments of Rangpur lime and sour orange was evaluated in MT medium with different BAP concentrations (0; 0,5; 1,0; 2,0 e 4,0 mg.L-1) as well as sour orange regeneration in MT and DBA3 mediums, supplemented with different concentrations of BAP (0; 1,0 e 2,0 mg.L-1) and NAA (0; 0,3 e 0,5 mg.L-1). The Agrobacterium tumefaciens Agrobacterium tumefaciens mediated genetic transformation method of juvenile tissue obtained from in vitro (epicotyls) or green house cultivated plants (internodal segments) was used in this work. The EHA 105 strain was used with the following plasmids: a) pCTV-CP: containing the coat protein gene from CTV; b) pCTV-dsCP: containing inverted repeats of the coat protein gene from CTV interconnected by the Citrus quitinase gene intron; c) pCTVcons: containing an antisense sequence of CTV untranslated region. The gene constructs were built from the pCAMBIA 2201 plasmid, and contained the 35S promoter and the NOS terminator. The nptII selection gene and the GUS reporter gene were also used. The adventitious buds developed were identified as transgenic by GUS histochemical test and PCR, these results were later confirmed by Southern Blot. The transgenic coat protein expression was detected by the serological test PTA-ELISA. The morphogenic response related to the epicotyl region and BAP cytokinin were dependent on the Citrus varieties. The addition of BAP cytokinin to the culture medium showed a greater number of adventitious buds regenerated per explant in both epicotyl and internodal segments of the Citrus varieties studied. The addition of BAP to the culture medium is essential for the regeneration of adventitious buds in sour orange internodal segments. Using the Agrobacterium mediated genetic transformation protocol it was possible to regenerate transgenic plants of different varieties and gene constructs: Rangpur lime containing the coat protein gene of CTV (pCTV-CP) using epicotyl and internodal segments as explant source, and an antisense sequence of CTV untranslated region using internodal segments as explant source; Hamlin sweet orange containing the coat protein gene of CTV in constructions pCTV-CP and pCTV-dsCP, and an antisense sequence of CTV untranslated region using epicotyl segments as explant source.

O presente trabalho teve como principal objetivo obter plantas transgênicas, dos cultivares porta-enxerto limão \'Cravo\' e laranja azeda e de cultivares copa de laranja doce, expressando genes que possam influenciar no nível de resistência ao vírus da tristeza dos citros (CTV) e, possivelmente à morte súbita dos citros. Buscou-se ainda estudar a organogênese in vitro de espécies cítricas. Experimentos para a indução da organogênese in vitro foram realizados a partir de segmentos de epicótilos de plântulas germinadas in vitro de espécies cítricas avaliando-se: a resposta organogênica de três diferentes regiões do epicótilo, na presença (1,0 mg.L-1) ou ausência de BAP, em meio MT, e a regeneração em diferentes concentrações de BAP (0; 0,5; 1,0; 1,5 e 2,0 mg.L-1) adicionadas ao meio MT. Também avaliou-se a regeneração de segmentos internodais de limão ?Cravo? e laranja azeda em diferentes concentrações de BAP (0; 0,5; 1,0; 2,0 e 4,0 mg.L-1) em meio MT; e de laranja azeda em meio de cultura MT e DBA3, suplementados com diferentes concentrações de BAP (0; 1,0 e 2,0 mg.L-1) e ANA (0; 0,3 e 0,5 mg.L-1). Foi utilizado o método de transformação genética mediado por Agrobacterium tumefaciens utilizando-se tecido juvenil coletado de plantas cultivadas in vitro (segmentos de epicótilo) ou em casa de vegetação (segmentos internodais) como explantes. Utilizou-se a estirpe EHA105 de A. tumefaciens, contendo os plasmídeos: a) pCTV-CP: contendo o gene da capa protéica do CTV; b) pCTV-dsCP: contendo repetições invertidas do gene da capa protéica do CTV, interligadas pelo intron do gene da quitinase de citros; c) pCTVcons: contendo uma seqüência conservada antisense do CTV. As construções gênicas foram elaboradas a partir do plasmídeo pCAMBIA 2201, dirigidas pelo promotor 35S e o terminador NOS. Foram utilizados também os genes de seleção nptII e o repórter GUS. As gemas adventícias desenvolvidas foram identificadas como transgênicas pelo teste histoquímico GUS e por PCR e a confirmação da transformação genética foi feita por Southern Blot. A expressão da proteína do CTV foi verificada pelo teste serológico de PTA-ELISA. A resposta morfogênica em função da região do epicótilo e das concentrações da citocinina BAP é dependente do cultivar de citros. A suplementação do meio de cultura com a citocinina BAP proporcionou um maior número de gemas adventícias regeneradas por explante, tanto em segmentos de epicótilo como em segmentos internodais dos cultivares de citros estudados. A suplementação do meio de cultura com a citocinina BAP é essencial na regeneração de gemas adventícias em segmentos internodais de laranja azeda. Foi possível regenerar plantas transgênicas, pelo protocolo de transformação genética mediado por Agrobacterium tumefaciens de limão \'Cravo\' contendo o gene da capa protéica do vírus da tristeza dos citros (pCTV-CP) utilizando-se segmentos de epicótilo e segmentos internodais como fonte de explante, e com uma seqüência conservada antisense do CTV, utilizando-se segmentos internodias; e de laranja \'Hamlin\' contendo o gene da capa protéica do CTV, com as construções gênicas pCTV-dsCP e pCTV-CP, e com uma seqüência conservada antisense do CTV, utilizando-se segmentos de epicótilo como fonte de explante. / The objective of the present work was to obtain transgenic plants of rootstocks Rangpur lime and sour orange as well as sweet orange scion varieties, expressing genes that would possibly influence the levels of resistance to the Citrus tristeza virus (CTV) and Citrus sudden death disease. The in vitro organogenesis of Citrus species was also studied. In vitro organogenesis experiments were conducted with epicotyl segments obtained from in vitro germinated seedlings of different Citrus species in order to evaluate: organogenic response of three epicotyl regions, in the presence (1,0 mg.L-1) or absence of BAP, in MT medium, and the regeneration using different BAP concentrations (0; 0,5; 1,0; 1,5 e 2,0 mg.L-1) added to MT medium. The regeneration of internodal segments of Rangpur lime and sour orange was evaluated in MT medium with different BAP concentrations (0; 0,5; 1,0; 2,0 e 4,0 mg.L-1) as well as sour orange regeneration in MT and DBA3 mediums, supplemented with different concentrations of BAP (0; 1,0 e 2,0 mg.L-1) and NAA (0; 0,3 e 0,5 mg.L-1). The Agrobacterium tumefaciens Agrobacterium tumefaciens mediated genetic transformation method of juvenile tissue obtained from in vitro (epicotyls) or green house cultivated plants (internodal segments) was used in this work. The EHA 105 strain was used with the following plasmids: a) pCTV-CP: containing the coat protein gene from CTV; b) pCTV-dsCP: containing inverted repeats of the coat protein gene from CTV interconnected by the Citrus quitinase gene intron; c) pCTVcons: containing an antisense sequence of CTV untranslated region. The gene constructs were built from the pCAMBIA 2201 plasmid, and contained the 35S promoter and the NOS terminator. The nptII selection gene and the GUS reporter gene were also used. The adventitious buds developed were identified as transgenic by GUS histochemical test and PCR, these results were later confirmed by Southern Blot. The transgenic coat protein expression was detected by the serological test PTA-ELISA. The morphogenic response related to the epicotyl region and BAP cytokinin were dependent on the Citrus varieties. The addition of BAP cytokinin to the culture medium showed a greater number of adventitious buds regenerated per explant in both epicotyl and internodal segments of the Citrus varieties studied. The addition of BAP to the culture medium is essential for the regeneration of adventitious buds in sour orange internodal segments. Using the Agrobacterium mediated genetic transformation protocol it was possible to regenerate transgenic plants of different varieties and gene constructs: Rangpur lime containing the coat protein gene of CTV (pCTV-CP) using epicotyl and internodal segments as explant source, and an antisense sequence of CTV untranslated region using internodal segments as explant source; Hamlin sweet orange containing the coat protein gene of CTV in constructions pCTV-CP and pCTV-dsCP, and an antisense sequence of CTV untranslated region using epicotyl segments as explant source.

Brachiaria é um gênero de forrageiras da família Poaceae que apresenta plantas que se reproduzem por via sexual e assexualmente por apomixia,reprodução por sementes. A apomixia desperta interesse biológico e biotecnológico, pela perspectiva de levar esta característica de clonagem de plantas via sementes, a outras espécies. As cultivares plantadas de B. brizantha cv. Marandu e B. decumbens cv. Basilisk são poliplóides e reproduzem-se por apomixia, enquanto as plantas sexuais são diplóides,o que inviabiliza os cruzamentos, dificultando sobremaneira o melhoramento. A transformação genética é uma estratégia que vem sendo incorporada ao melhoramento genético. A natureza apomítica destasplantas pode permitir a clonagem e estabilidade das plantas transgênicas. Para transformação genética é necessário o desenvolvimento de um método eficiente de regeneraçãoin vitro. B. brizantha é considerada recalcitrante a cultura de tecidos, e métodos eficientes associados com os sistemas de transformação genética ainda não foram descritos na literatura. O arroz (Oryza sativa) é uma Poaceae modelo para estudos de genética inversa, no entanto, cultivares tropicais do grupo japônica são recalcitrantes a transformação genética, como é o caso da cultivar Primavera. O método direto de transformação genética mais amplamente utilizado é a biobalística, e vem sendo aplicado em espécies de monocotiledôneas, uma vez que essas não são hospedeiros naturais de Agrobacterium tumefaciens. No entanto, vários fatores tem sido testados no sentido de favorecer a interação e transferência de genes durante a cocultura para obtenção de transgênicos em diversas espécies de monocotiledôneas. Os objetivos deste estudo foram obter sistemas de regeneração in vitro deB. Brizanthae de arroz cultivar Primavera para transformação genética destas espécies. Em B. brachiaria foram obtidos sistema de micropropagação, organogênese, calos embriogênicos, unidades embriogênicas e suspensões celulares, e para a cultivar Primavera de arroz foram obtidas unidades embriogênicas, que foram caracterizadas morfo-anatomicamente e quanto as condições de indução, multiplicação e regeneração in vitro. Métodos de expressão transiente e estável de genes marcadores foram estabelecidos para B brizantha via biobalística e Agrobacterium tumefaciens. A natureza da transgenia foi confirmada por métodos histoquímico e molecular como PCR e Southern blot. Os sistemas de regeneração e transformação obtidos mostraram-se eficientes e irão contribuir para os estudos da apomixia e introdução de genes de interesse em braquiária / Brachiaria is a genus of Poaceae family forage grass that reproduces by sexual and asexually by apomixis. Apomixis is of biological and biotechnological interest awakened by the prospect of bringing this feature of cloning plants through seed to other species. B. brizantha cv. Marandu and B. decumbens cv. Basilisk are polyploid and reproduce by apomixis, while the sexual plants are diploid, which makes the crosses, greatly hindering the improvement. Genetic transformation is a strategy that is being incorporated into breeding programs. The nature of these apomictic plants may allow the cloning and the stability of transgenic plants. For genetic transformation is necessary to develop an efficient method of in vitro regeneration. B. brizantha is considered recalcitrant to tissue culture, and efficient methods associated with the genetic transformation systems have not been described in the literature. Rice (Oryza sativa) is a Poaceae model for studies of reverse genetics; however, tropical cultivars from japonica group are recalcitrant to genetic transformation, such as Primavera cultivar. Biolistic is the genetic transformation direct method most widely used, and has been applied to species of monocots, since these are not natural hosts of Agrobacterium tumefaciens. However, several factors have been tested in order to promote interaction and gene transfer during coculture for obtaining transgenics in several monocots species. The objectives of this study were to obtain in vitro regeneration and genetic transformation systems for these species. In B. Brachiaria systemsfor micropropagation, organogenesis, embryogenic units and embryogenic cell suspensions were obtained, and forrice Primavera cultivar embryogenic units were obtained, which was morpho-anatomical characterized and in vitro induction, proliferation and regeneration conditions established. Methods for transient and stable gene expression have been acquired for B. brizanthavia biolistic and Agrobacterium tumefaciens. The nature of the embryogenic callus and transgenic plants was confirmed by histochemical and molecular methods such as PCR and Southern blot. The regeneration and transformation systems showed to be effective and will contribute to apomixis studies and introduction of genes of interest in B. brizantha

A transformação genética possibilita a introdução de genes de interesse nos genomas, podendo assim ser empregada na tentativa de melhorar características agronômicas e florestais. No entanto, para a obtenção de plantas transgênicas são necessários protocolos eficientes de regeneração de plantas in vitro. Em teca, dados sobre cultura de tecidos são escassos, havendo a necessidade de determinar condições ótimas para a mesma. Com isso, o trabalho teve por objetivos estudar a organogênese in vitro de teca visando desenvolver um método de regeneração eficiente, avaliar condições para o processo de transformação e testar a susceptibilidade da lagarta Hyblaea puera a toxinas produzidas pelo Bacillus thuringiensis. Foram avaliadas a influência de TDZ e BAP na indução da competência organogenética em hipocótilos, nó cotiledonar e cotilédones de teca. Os biorreguladores AIB, BAP, NAA e GA3 foram utilizados na regeneração de segmentos de hipocótilo, nó cotiledonar, raiz, epicótilo e cotilédone. Antibióticos supressores de Agrobacterium tumefaciens e a higromicina (seleção de células transgênicas), foram também avaliados. Finalmente, testes com o inseticida biológico DipelTM e esporos de B. thuringiensis crescidos em laboratório foram realizados com as lagartas de Hyblaea puera. Na aquisição de competência organogenética o TDZ proporcionou um aumento de 46% na regeneração e o BAP 26% quando comparados ao controle. Para a organogênese in vitro foi avaliado um máximo de 70% de regeneração em nó cotiledonares em meio MS adicionado de 1 mg.L-1 de BAP + 0,5 mg.L-1 de GA3. Entretanto, em outras concentrações dos meios de regeneração hipocótilos, raiz, cotilédones e epicótilos tiveram máximas frequências de regeneração em torno de 60%, 60%, 30% e 10%, respectivamente. Os antibióticos supressores da Agrobacterium tumefaciens tiveram efeitos diferentes para cada explante. Timentin e cefotaxima na concentração de 300 mg.L-1 aumentaram o número de brotos em hipocótilos e nó cotiledonar em 1,6 e 2,0 vezes, respectivamente. Em cotilédone esses antibióticos tiveram efeitos negativos no número de brotos. Carbenicilina em todas as doses influenciou negativamente a regeneração em todos os explantes utilizados. A higromicina a 2,5 mg.L-1 inibe em 100% a regeneração de cotilédones, nó cotiledonar e hipocótilo. Os ínstares mais novos de H. puera são susceptíveis tanto ao produto comercial DipelTM quanto aos esporos crescidos em laboratório, apresentando 100% de mortalidade a concentrações de 2x105 UFC após 24 horas de ingestão. Mostrando assim seu potencial na transgenia visando à expressão de genes de Bt para a resistência a insetos. Os resultados apresentados nesse trabalho contribuem para o ganho de informação sobre os fatores que influenciam a organogênese desta espécie, bem como, definir parâmetros que possam ser utilizados em experimentos futuros visando à transformação genética da espécie. / Genetic transformation allows the introduction of genes in host genomes and can therefore be used to improve forestry and agronomic traits like insect resistence. However, efficient plant regeneration protocols are necessary to obtain transgenic plants. Thus far, information about in vitro teak (Tectona grandis L. f) organogenesis is scarce. Therefore, the aims of this study were: develop an efficient protocol for in vitro organogenesis of teak, assess conditions for its genetic transformation and test the susceptibility of the caterpillar Hyblaea puera to toxins produced by Bacillus thuringiensis. We evaluated the influence of TDZ and BAP on the induction of organogenic competence in hypocotyl, cotyledonary nodes and cotyledons. Growth regulators IBA, BAP, NAA and GA3 were used in the regeneration of the hypocotyl, cotyledonary node, root, epicotyl and cotyledon. Antibiotics for suppression of Agrobacterium tumefacien (timentin, cefotaxime and carbenicillin) and for selection of transgenic cells (hygromycin) were also evaluated. Finally, tests with the biological insecticide DipelTM and spores of B. thuringiensis grown in laboratory were performed with the caterpillar of Hyblaea puera. TDZ increases 46% the regeneration frequency and BAP 26% when compared to controls. Cotyledonary nodes showed the best regeneration frequency (70%) growing on MS medium added of 1 mg.L-1 BAP + 0.5 mg.L-1 GA3. Hypocotyls, roots, cotyledons and epicotyls presented variable frequency of regeneration (60%, 60%, 30%, and 10% respectively) growing on distinct concentrations of grown regulators. We tested three antibiotics (timentin, cefotaxime, and carbenicillin) to suppress A. tumefaciens in vitro growth and they presented different effects on the organogenesis of each explants used in this study. Timentin and cefotaxime at concentration of 300 mg.L-1 increased the number of buds on hypocotyls and cotyledonary nodes. Conversely, these antibiotics had negative effects on the number of shoots of cotyledonary explants. Carbenicillin at all doses presented a negative influence on regeneration of all explants. Hygromycin at concentration of 2.5 mg.L-1 inhibits 100% of regeneration of cotyledons, cotyledonary nodes, and hypocotyls. The young instars of H. puera are susceptible to likely both commercial product DipelTM and spores grown in the laboratory, presented 100% mortality at concentrations of 2x105 CFU after 24 hours of ingestion. These findings suggest its potential to be used in teak transgenic approaches for insect resistance. Our results contribute to information about factors that influence the organogenesis of this specie, as well as define parameters that can be used in future experiments aimed at the genetic transformation of the specie.