A espécie Stylosanthes guianensis, importante forrageira para as regiões tropicais do globo, vem se estabelecendo a partir da década de 80 como um sistema modelo em potencial, para a tecnologia da cultura de tecidos na família Leguminosae (MEIJER & SZABADOS, 1990). No presente estudo, avaliou-se o potencial morfogenético in vitro de uma cultivar pertencente a esta espécie, a IRI 1022, em relação aos fatores genótipo e meio de cultura, mais especificamente, a reguladores de crescimento. A indução de calos foi obtida a partir de explantes foliares da cv IRI 1022 colocados em meios basais MS suplementados com combinações dos fitorreguladores NAA e BAP, nas concentrações 0,0; 0,1; 0,4; 1,0 e 2,0 mg/l, sob fotoperíodo de 16 horas luz e temperaturas entre 25 a 28°C. Entre estas combinações foram selecionadas favoravelmente, aquelas capazes de promover fases de calo mais prolongadas e ainda a regeneração de partes aéreas nestes calos durante o período de indução de 30 dias. Calos induzidos nestas condições foram transferidos após 30 dias para meios de regeneração, isto é, meios MS suplementados apenas com BAP, onde a concentração 2,0 mg/l, mostrou-se a mais satisfatória. Brotos regenerados foram alongados em meio MS com as concentrações de sais reduzidas à metade e a um quarto, e concentração de BAP também reduzida ou ausente. A implementação do enraizamento em brotos alongados se deu em meio MS reduzido à metade e a um quarto, e suplementado com 0,2 mg/l de IBA. As maiores taxas de sobrevivência de plantas regeneradas in vitro se deu sob condições elevadas de umidade relativa, luminosidade e temperatura. Plantas SC1 (regenerantes primários) avaliadas preliminarmente, apresentaram variações quanto a alguns aspectos vegetativo e reprodutivo; progênies destas plantas por sua vez, quando submetidas a cultura, demonstraram variabilidade para o caráter regeneração. A indução de calos e a organogênese de partes aéreas nestes, foram igualmente avaliadas a nível estrutural. Os eventos chaves que levam a indução de calos em explantes foliares da cultivar IRI 1022, ocorrem entre o segundo e o terceiro dias de cultura; a desdiferenciação e a proliferação celulares têm início nas regiões de ferimento do expl ante, notadamente a nível da nervura principal, em células do parênquima e da bainha do feixe vascular. No quinto dia de cultura, já é evidente a nível da morfologia externa, o início de formação de calo. Em torno do décimo dia de cultura já se observa a presença de meristemóides. Trinta dias após a inoculação do explante, são evidentes as gemas caulinaes. O processo de regeneração ocorre por organogênese, com os brotos desenvolvendo na superfície dos calos. / Since the 80's decade, Stylosanthes guianensis, an important forage species for world tropical regions, has been established as a potential model system for tissue culture in the Leguminosae family (MEIJER & SZABADOS, 1990). In the present study, S. guianensis cultivar IRI 1022 in vitro morphogenetic potential was evaluated; genotype and culture media, specifically, growth regulators was studied. Cal1i induction was obtained from IRI 1022 leaves explants placed on the MS (MURASHIGE & SKOOG, 1962) basal medium supplemented with combinations of NAA and BAP at. 0.0, 0.1, 0.4, 1.0 and 2.0 mgl-1 concentrations. Cultures were maintained at 25 to 28°C, under 16 hs light regime. Plant growth regulator combinations able to promote extended call us phase and shoot regeneration in a 30 days period were selected. The derived calli were then transferred auxin free MS regeneration media; 2.0 mgl-1 BAP was the more satisfactory concentration for shoot regeneration. Shoots were elongated in half-and-quarter- strength MS medium, free of hormones or supplemented with reduced BAP concentration. Rooting was induced in the same basal medium supplemented with 0,2 mgl-1 IBA. Regenerated plantlets, when transferred to the soil, showed greater survival rates under high humidity, 1ight and temperature conditions. SC1 plants (primary regenerants) showed some variations related with morphological and reproductive aspects; progenies of SC1 plants showed variabi1ity in in vitro regenerative in abi1ity. Histological analyses of calli induction and shoot regeneration processes were performed. Leaf explants derived calli were induced by hystological events that. occur between the second and the third day of culture; dedifferentiation and cellular proliferation begin in regions closed to lesions caused by explant excision, mainly at the central vein, involving both, cel1 of the vascular parenchyma and sheath of the bundle. On the fifth day of culture calli began to be evident at the level of external morphology. After the tenth day of culture meristemoids can be observed. After thirty days of explants inoculation shoot buds are evident. Regeneration process occurs by organogenesis, with shoot development on calli surfaces.

Made available in DSpace on 2018-08-01T23:27:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_11486_90-Waldesse Storch Rosa.pdf: 1765207 bytes, checksum: 635e186d749563e065af18b815faaefa (MD5) Previous issue date: 2017-11-09 / A cultura de tecidos pode contribuir para a propagação de diversas espécies vegetais de importância ecológica ou ameaçadas de extinção, tais como as bromélias. Durante a fase de multiplicação in vitro, o emprego de citocininas pode ser indispensável para a indução de brotos laterais em diversas espécies. Contudo, análises sobre as desordens fisiológicas induzidas pelos fitorreguladores ainda não é bem entendida, principalmente sobre o aparato fotossintético. Assim, o objetivo deste trabalho foi avaliar a influência de citocininas em função da concentração, na taxa de multiplicação, no desempenho do aparato fotossintético e na funcionalidade estomática de Aechmea blanchetiana durante a fase de multiplicação in vitro. Plantas de A. blanchetiana previamente estabelecida in vitro foram inoculadas em meio MS suplementado com 6-benzilaminopurina (BAP) ou 6-furfurilaminopurina (KIN) nas concentrações: 0, 5, 10, 15 e 20 μM. Após 60 dias de exposição aos fitorreguladores, foi analisada a taxa de multiplicação, o desempenho do aparato fotossintético (fluorômetro portátil Handy PEA) e a caracterização da funcionalidade estomática dos explantes em função dos tratamentos. Não foi observada formação de brotos na ausência de citocininas exógenas (controle). O uso de KIN não induziu formação de brotos e nem incremento de massa fresca, independentemente da concentração utilizada. Foi verificado incremento significativo de massa fresca e de brotos em plantas cultivadas com BAP, à medida que aumentou a concentração. O tipo e a concentração de citocininas também influenciaram o aparato fotossintético das plântulas. A fluorescência transiente da clorofila a apresentou forma típica das curvas OJIP com pontos J e I bem definidos. Foi observada a redução na produção quântica (Fv/Fm) em função da concentração, em todos tratamentos com citocininas exógenas, exceto, para o tratamento com 5μM de BAP. O decréscimo mais acentuado em produção quântica foi verificado nas plantas tratadas com KIN. Na avaliação anatômica, foi encontrada uma redução da funcionalidade estomática, em resposta ao aumento da concentração de citocininas. As citocininas exógenas influenciam a fisiologia do aparato fotossintético e a anatomia de plântulas de A. blanchetiana durante a multiplicação in vitro. A KIN não é indicada para a multiplicação desta espécie in vitro. O emprego de BAP em menores concentrações proporcionou a quebra da dominância apical e a formação de brotos, com menor grau de distúrbios no aparato fotossintético dos brotos formados.

O objetivo deste trabalho foi estudar os efeitos da cultura de tecidos em características quantitativas de interesse agronômico e também detectar possíveis alterações ao nível molecular, através da técnica de RAPD, em progênies de plantas regeneradas de Stylosanthes guianensis. Sessenta e três progênies derivadas da cultura de tecidos (R2) e 53 derivados da população original (O2) foram avaliadas para os caracteres da produção de matéria verde e seca (PMV) e produção de matéria seca (PMS). Detectou-se na população regenerada, em média, uma variabilidade genética 2,6 vezes superior à variabilidade presente na população original, para os dois caracteres. As estimativas do coeficiente de herbabilidade e do ganho esperado com seleção para os dois caracteres, também foram superiores para a população regenerada. No entanto, a população regenerada apresentou reduções significativas nas médias, para os caracteres PMV (2656,32 g/planta) e PMS (891,27 g/planta), em relação às médias da população original (PMV=2978,11 e PMS=1000,90). Apesar destas reduções, as médias esperadas da população regenerada selecionada, para os dois caracteres, foram superiores às médias esperadas da população original. Estes resultados indicam que a cultura de tecidos foi capaz de gerar uma variabilidade genética superior à variabilidade encontrada na população original, podendo ser aproveitada em programas de melhoramento. Amostras de 16 progênies de cada uma das populações original e regenerada foram analisadas através da técnica de RAPD utilizando-se 10 primers de sequência aleatória. Estes primers geraram 219 produtos de amplificação apresentando 51,6% de polimorfismo. O agrupamento das progênies pelo método UPGMA, baseado no coeficiente de similaridade Simple Matching, gerou um dendrograma no qual visualiza-se a formação de dois grupos distintos, separando as progênies originais das regeneradas. Apesar da semelhança nos valores dos coeficientes de similaridade genética observados dentro de cada população, a separação das progênies em dois grupos indica que a cultura de tecidos provocou alterações ao nível molecular, capazes de alterar os padrões de RAPDs. / not available

O método de cultura de tecido vegetal e a aplicação de radiação gama, como agentes indutores de variabilidade genética, na cana-de-açúcar variedade NA 5679, a fim de proporcionarem variações nos , teores de brix, pol, fibra, pureza, extração, fósforo, nitrogênio, açúcares redutores e nas características morfológicas, foram estudadas. Para tal os calos originados pela cultura de tecidos, foram irradiados com as seguintes doses: 20, 40 e 60 Gy. Alguns calos não sofreram irradiação (O Gy) para evidenciarem apenas o emprego da cultura de tecido. Os calas foram cultivados em laboratório até a diferenciação em plântulas, seguindo para aclimatação em casa de vegetação, onde amostras de plantas reproduzidas vegetativamente foram acrescentadas ao experimento, para servirem como plantas padrão. Após o período de crescimento no campo, foram realizadas as análises morfológicas e tecnológicas. A análise estatística dos resultados mostrou que o método de cultura de tecidos pode eventualmente propiciar aumento nos teores dos parâmetros tecnológicos e que as dosagens de irradiação não foram eficientes em tal propósito. / This research deals with the use of plant tissue culture and the application of gamma radiation as mutation inducing agents, in the sugar cane plant, variety NA 5679, in order to provide variation in the contents of brix, pol, fiber, purity, extraction, phosphorus, nitrogen, reducing sugars as well as in the morphological characteristics (features). The"callus"·obtained by the tissue culture were irradiated with the following doses: 20, 40 and 60 Gy. Some callus were not irradiated (0 Gy) to make clear the use of tissue culture only. The "callus"were cultivated in laboratory up to their seedling stage, when they were placed in a greenhouse where samplings of vegetative reproduced plants were added to the experiment for serving as pattern plants. Morphological and technological analyses were done after the growth period in the field. The statistical analysis of the results indicated that the method of tissue culture may, eventually, increase the contents of the technological parameters and that the dosages of gamma radiation were not efficient for such purpose.

O objetivo deste trabalho foi estudar os efeitos da cultura de tecidos em características quantitativas de interesse agronômico e também detectar possíveis alterações ao nível molecular, através da técnica de RAPD, em progênies de plantas regeneradas de Stylosanthes guianensis. Sessenta e três progênies derivadas da cultura de tecidos (R2) e 53 derivados da população original (O2) foram avaliadas para os caracteres da produção de matéria verde e seca (PMV) e produção de matéria seca (PMS). Detectou-se na população regenerada, em média, uma variabilidade genética 2,6 vezes superior à variabilidade presente na população original, para os dois caracteres. As estimativas do coeficiente de herbabilidade e do ganho esperado com seleção para os dois caracteres, também foram superiores para a população regenerada. No entanto, a população regenerada apresentou reduções significativas nas médias, para os caracteres PMV (2656,32 g/planta) e PMS (891,27 g/planta), em relação às médias da população original (PMV=2978,11 e PMS=1000,90). Apesar destas reduções, as médias esperadas da população regenerada selecionada, para os dois caracteres, foram superiores às médias esperadas da população original. Estes resultados indicam que a cultura de tecidos foi capaz de gerar uma variabilidade genética superior à variabilidade encontrada na população original, podendo ser aproveitada em programas de melhoramento. Amostras de 16 progênies de cada uma das populações original e regenerada foram analisadas através da técnica de RAPD utilizando-se 10 primers de sequência aleatória. Estes primers geraram 219 produtos de amplificação apresentando 51,6% de polimorfismo. O agrupamento das progênies pelo método UPGMA, baseado no coeficiente de similaridade Simple Matching, gerou um dendrograma no qual visualiza-se a formação de dois grupos distintos, separando as progênies originais das regeneradas. Apesar da semelhança nos valores dos coeficientes de similaridade genética observados dentro de cada população, a separação das progênies em dois grupos indica que a cultura de tecidos provocou alterações ao nível molecular, capazes de alterar os padrões de RAPDs. / not available

O método de cultura de tecido vegetal e a aplicação de radiação gama, como agentes indutores de variabilidade genética, na cana-de-açúcar variedade NA 5679, a fim de proporcionarem variações nos , teores de brix, pol, fibra, pureza, extração, fósforo, nitrogênio, açúcares redutores e nas características morfológicas, foram estudadas. Para tal os calos originados pela cultura de tecidos, foram irradiados com as seguintes doses: 20, 40 e 60 Gy. Alguns calos não sofreram irradiação (O Gy) para evidenciarem apenas o emprego da cultura de tecido. Os calas foram cultivados em laboratório até a diferenciação em plântulas, seguindo para aclimatação em casa de vegetação, onde amostras de plantas reproduzidas vegetativamente foram acrescentadas ao experimento, para servirem como plantas padrão. Após o período de crescimento no campo, foram realizadas as análises morfológicas e tecnológicas. A análise estatística dos resultados mostrou que o método de cultura de tecidos pode eventualmente propiciar aumento nos teores dos parâmetros tecnológicos e que as dosagens de irradiação não foram eficientes em tal propósito. / This research deals with the use of plant tissue culture and the application of gamma radiation as mutation inducing agents, in the sugar cane plant, variety NA 5679, in order to provide variation in the contents of brix, pol, fiber, purity, extraction, phosphorus, nitrogen, reducing sugars as well as in the morphological characteristics (features). The"callus”·obtained by the tissue culture were irradiated with the following doses: 20, 40 and 60 Gy. Some callus were not irradiated (0 Gy) to make clear the use of tissue culture only. The “callus"were cultivated in laboratory up to their seedling stage, when they were placed in a greenhouse where samplings of vegetative reproduced plants were added to the experiment for serving as pattern plants. Morphological and technological analyses were done after the growth period in the field. The statistical analysis of the results indicated that the method of tissue culture may, eventually, increase the contents of the technological parameters and that the dosages of gamma radiation were not efficient for such purpose.

Diferentes explantes vegetativos de Bauhinia jorticata Link foram inoculados in vitro para se estabelecer um protocolo de micropropagação com o uso de técnicas de cultura de tecidos. Para tanto, foi avaliado o efeito de diferentes fitorreguladores sobre estes explantes. Estabeleceu-se que os melhores explantes foram aqueles retirados a partir de tecidos da parte aérea (segmentos nodais e de entrenós) tanto para a indução de calos como para micropropagação. Os fitorreguladores ácido 2,4-diclorofenoxiacético (2,4-D) e 6-Benzilaminopurina (BAP) nas concentrações de 0,25 mg/L e 0,50 mg/L, respectivamente, foram eficientes na indução de calos em 30 dias após a inoculação. BAP na concentração de 0,25 mg/L foi eficaz na indução de micropropagação em 60 dias de cultivo e ácido indolbutírico (IBA) na concentração de 1,0 mg/L foi efetivo na indução do enraizamento em 40 dias de cultivo / Different vegetative explants of Bauhinia forficata Link were inoculated in vitro in order to stablish a micropropagation protocol. The effect of different plant growth regulators was evaluated in the explants. Explants from shoot (nodal segments and internode) showed the best responses for callus induction as well as for micropropagation. The phytoregulators 2,4-dichlorophenoxiacetic (2,4-D) acid and 6- benzilaminopurine (BAP) efficientely induced callus on concentrations of 0,25 mg/L and 0,50 mg/L, respectiveIy, within 30 days after the inoculation. The BAP in a concentration of 0,25 mg/L was effective on the shoots induction within 60 days of cuIture. Indolbutiric acid (IBA) used on a concentration of 1,0 mg/L was effictive on the root induction within 40 days of cuIture

As atividades que envolvem a floricultura vêm se destacando positivamente no cenário econômico do agronegócio brasileiro. Dentre as espécies de plantas utilizadas para este fim ressaltam-se as espécies pertencentes à família botânica Asteraceae, principalmente as do gênero Chrysanthemum. A espécie C. cinerariaefolium Vis. (Piretro da Dalmácia) é mundialmente cultivada visando à produção de aleloquímicos que apresentam atividades de inseticidas naturais (piretrinas). No Brasil chegou a ser produzida para esse fim em larga escala, no município de Taquara-RS na década de 30 a 40. Recentemente o interesse de seu cultivo tem aumentado como uma alternativa natural de manejo de pragas como planta ornamental, principalmente para jardins. Contudo, o fato de não produzir sementes férteis limita sua capacidade de propagação massal. Visando aperfeiçoar sua micropropagação foram realizados dois experimentos. No experimento 1 foi avaliado aos 30 dias de cultivo a influência de cinco concentrações de hipoclorito de sódio (10, 20, 30, 40 e 50% do produto comercial Mazzarolo) e cinco tempos de permanência na solução durante a desinfestação dos explantes (5, 10, 15, 20, 25 min.). Ao todo foram isolados 125 meristemas totalizando 25 tratamentos com cinco repetições. Os explantes isolados foram inoculados no meio de isolamento, o qual foi constituído de MS + 1,0 mg.L-1 de BAP + 0,1 mg.L-1 de GA3 + 0,01 mg.L-1 ANA + 30 g.L-1 de Sacarose em 7,0 g.L-1 de Agar. No experimento 2 foi avaliado a influência das diferentes concentrações de hipoclorito e dois tempos de permanência na solução desinfetante sobre a porcentagem de necrose, estruturas amorfas, plântulas formadas e comprimento de brotos. As plântulas regeneradas do experimento 1 foram inoculadas no meio de multiplicação que constou do MS + 0,4 mg.L-1 de Thiamina HCl + 100 mg.L-1 de Mio-Inositol + 0,05 mg.L-1 de ANA + 1,0 mg.L-1 de BAP + 40 g.L-1 de Sacarose e 7,0 g.L-1 de Agar. O pH dos meios foi ajustado em 5,9 antes da autoclavagem. Os resultados obtidos no experimento 1 indicaram que quanto maior o tempo de permanência na solução, maior a porcentagem de necrose. Porém, quanto menor a permanência maior a taxa de contaminação microbiana. No experimento 2, observou-se que a porcentagem de necrose é maior na concentração de 50%. Não houve influência dos fatores analisados na produção de estruturas amorfas. Para o número de brotos/explante e comprimento de brotos, o melhor desempenho se deu na solução 30%. Porém, a taxa de brotos por explante diminuiu à medida que aumentou o tempo de permanência na solução. Com relação ao comprimento dos brotos, os melhores resultados foram observados até o tempo de 15 minutos de permanência. Assim conclui-se que C. cinerariaefolium Vis. responde positivamente ao cultivo in vitro. A taxa de necrose aumenta à medida que aumenta a concentração de hipoclorito. Por outro lado, a taxa de contaminação aumenta à medida que diminui a concentração da solução desinfetante. A concentração de hipoclorito de sódio e o tempo de permanência na solução desinfetante afetam o número e o comprimento de brotos produzidos nos subcultivos. / The activities that involve floriculture have distinguished positively in the economic scenario of the Brazilian agribusiness. Among the plant species used for that purpose it can be distinguished the species belonging to the botanical family Asteraceae, mainly from the genus Chrysanthemum. The species C. cinerariaefolium Vis. is worldwide cultivated in order to produce the alelochemicals, which have activities of natural insecticides (pyretrine). In Brazil it was produced in large scale, in the Taquara-RS County in the decade of 30 to 40. Recently the interest on its cultivation has increased as natural alternative of pest management as ornamental plant, mainly in yards. However, the fact of no seed is produced by the plant that limits its capacity of massal production. In order to optimize its micropropagation two experiments were developed. In the experiment 1 it was evaluated 30 days after cultivation the influence of five concentrations of sodium hipochlorine (10, 20, 30, 40 and 50% of the commercial product Mazzarolo), and five time lengths of the explants permanence in the disinfecting solution (5, 10, 15, 20 and 25 min.). It was isolated 125 meristems, 25 treatments with five replications. The isolated explants were inoculated in isolation media, that was constituted of MS + 1.0 mg.mL-1 of BAP + 0.1 mg.L-1 of GA3 + 0.01 mg.L-1 ANA + 30 g.L- 1 of sucrose in 7.0 g.L-1 of Agar. In the experiment 2 it was evaluated the influence of different concentrations of hipochlorine and two length of time in disinfection solution measuring the percentage of necrosis, amorphous structures, seedlings formed and length of the sprouts. The regenerated seedlings from experiment 1 were inoculate in a medium of multiplication that was of MS + 0.4 mg.L-1 of Thiamine HCl + 100 mg.L-1 of Mio-Inositol 0.05 mg.L-1 of ANA + 1.0 mg.L-1 of BAP + 40 g.L-1 of sucrose and 7.0 g.L-1 of Agar. The pH of the medium was adjusted to 5.9 before the autoclaving process. The results obtained in the experiment 1 indicated that the higher the time length in the solution, the higher is the percentage of necrosis. However, the higher is the permanence of higher rate of microbial contamination. In the experiment 2; it was observed that the percentage of necrosis is higher at the concentration of 50%. There was no influence of the analyzed factors in the yield of amorphous structures. For the number of sprouts/explants and length of sprouts, the better performance was in the solution of 30%. However, the rate of sprouts per explants diminished as the length of time in the solution increased. The best results for sprout length were obtained up to 15 minutes of permanence. Therefore, it can be concluded that C. cinerariaefolium Vis. responds positively to in vitro culture. The rate of necrosis increases as the hipochlorine concentration is higher. On the other hand, the contamination rate increases as the disinfection solution diminishes. The concentration o hipochlorine sodium as the length of time of permanence in the initial disinfecting solution used during the explants disinfection affects the number and the sprout length produced during the subculture.

A regeneração de plantas, por organogênese ou embriogênese somática, a partir do cultivo de células e tecidos vegetais in vitro é a base para a utilização da biotecnologia no melhoramento. Realizaram-se estudos com cinco cultivares de laranja doce (Citrus sinensis L. Osbeck), Pêra, Natal, Lima Verde, Hamlin e Westin. Este trabalho objetivou a avaliação da eficiência de isolamento de protoplastos das cultivares de laranja doce; o estudo da eficiência de plaqueamento em função de cinco densidades de protoplastos e diferentes meios de cultura e avaliação da embriogênese somática em função da composição dos meios de cultura e concentração da fonte de carboidrato. As soluções enzimáticas testadas para o isolamento de protoplastos foram: 1. Grosser e Chandler (1987), composta de 1% de celulase Onozuka RS (Yakult), 1% macerase R- 10 (Yakult Honsha) e 0,2% de pectoliase Y-23 (Seishin); 2. Grosser e Chandler (1987) modificado, composta de 1% de celulase Onozuka RS (Yakult), 1% macerase R-10 (Yakult Honsha); 3. Solução enzimática composta de 4% de celulase Onozuka R-10 (Yakult), 1% macerase R-10. O plaqueamento dos protoplastos foi realizado em cinco densidades, 2 x 104, 5 x 104; 105; 2x 105 e 3 x 105 protoplastos . mL-1,nos meios de cultura EME 0,7M, BH3 0,7M e BH3 + EME 0,7M em ausência de luz, a 25 ± 1 ºC. A solução enzimática 2 proporcionou um maior rendimento no isolamento de protoplastos das cultivares Hamlin, Natal e Pera e solução enzimática 1 foi melhor para a cultivar Westin. A eficiência final de plaqueamento avaliada aos 90 dias foi superior nas densidades de de 3 x 105 e 2 x 105 protoplastos. mL-1 para as cultivares Hamlin, Natal e Lima Verde, e na densidade de 2 x 105 e 105 protoplastos. mL-1 para a cultivar Westin. A indução da embriogênese somática ocorreu em meio de cultura MT modificado com 500 mg.L-1 de extrato de malte, acrescido de sacarose, galactose, glicose, sorbitol, lactose e maltose, nas concentrações de 18, 37, 75, 110 e 150 mM à temperatura de 27 °C. A formação de embriões somáticos variou com o genótipo, sendo a cultivar Lima Verde e Westin apresentaram menor número de embriões somáticos. As melhores fontes de carboidratos foram a maltose, seguida pela lactose nas concentrações de 37 e 75 mM para a cultivar Pêra, 37 mM para a cultivar Natal e 37, 75 e 110 mM para a cultivar Hamlin. / Plant regeneration, by organogenesis or somatic embryogenesis from cell cultures and in vitro plant tissue culture is the basis for the use of biotechnology in plant breeding. Studies were conducted with five cultivars of sweet orange (Citrus sinensis L. Osbeck), Pêra, Natal, Lima Verde, Hamlin and Westin. This work aimed to evaluate the isolation efficiency of protoplasts, to evaluate platting efficiency of protoplasts based on five densities of cells and different culture media and to evaluate somatic embryogenesis based on culture medium composition and concentration. The enzymatic solutions tested were: 1. Grosser and Chandler (1987): 1% de cellulase Onozuka RS (Yakult), 1% macerase R-10 (Yakult Honsha) and 0,2% de pectoliase Y-23 (Seishin); 2. Grosser and Chandler (1987) modified: 1% de cellulase Onozuka RS (Yakult) and 1% macerase R-10 (Yakult Honsha); 3. Enzimatic solution containing 4% cellulase Onozuka R-10 (Yakult) and 1% macerase R-10. Protoplasts were cultured at densities of 2 x 104; 5 x 104; 105; 2 x 105 e 3 x 105 protoplasts.mL-1 in EME 0,7M, BH3 0,7M and BH3 + EME 0,7M, in the dark, at 25 ± 1 ºC. The enzymatic solution 2 provided higher yield for the cultivars Hamlin, Natal and Pêra, and enzymatic solution 1 resulted in better protoplast isolation for cultivar Westin. Final platting efficiency, evaluated 90 days after culture, was higher at the densities of 3 x 105 e 2 x 105 protoplasts.mL-1 for Hamlin, Natal and Lima Verde, and at the density of 2 x 105 e 105 protoplasts.mL-1 for Westin. Somatic embryogenesis stimulation occurred in cultured medium MT (MURASHIGE AND TUCKER, 1969) modified with 500 mg. L-1 of malt extract, supplemented with sucrose, galactose, glucose, maltose, lactose and sorbitol at concentrations of 18, 37, 75, 110 and 150 mM, at 27 ± 1 ºC. Somatic embryos produced varied with the genotype, the smaller number of somatic embryos was observed in cultivars Lima Verde and Westin. The best source of carbohydrate were maltose, followed by lactose at concentrations of 37 and 75 mM for cultivar Pêra, 37 mM for cultivar Natal, and 37, 75 and 110 mM for cultivar Hamlin.

A regeneração de plantas, por organogênese ou embriogênese somática, a partir do cultivo de células e tecidos vegetais in vitro é a base para a utilização da biotecnologia no melhoramento. Realizaram-se estudos com cinco cultivares de laranja doce (Citrus sinensis L. Osbeck), Pêra, Natal, Lima Verde, Hamlin e Westin. Este trabalho objetivou a avaliação da eficiência de isolamento de protoplastos das cultivares de laranja doce; o estudo da eficiência de plaqueamento em função de cinco densidades de protoplastos e diferentes meios de cultura e avaliação da embriogênese somática em função da composição dos meios de cultura e concentração da fonte de carboidrato. As soluções enzimáticas testadas para o isolamento de protoplastos foram: 1. Grosser e Chandler (1987), composta de 1% de celulase Onozuka RS (Yakult), 1% macerase R- 10 (Yakult Honsha) e 0,2% de pectoliase Y-23 (Seishin); 2. Grosser e Chandler (1987) modificado, composta de 1% de celulase Onozuka RS (Yakult), 1% macerase R-10 (Yakult Honsha); 3. Solução enzimática composta de 4% de celulase Onozuka R-10 (Yakult), 1% macerase R-10. O plaqueamento dos protoplastos foi realizado em cinco densidades, 2 x 104, 5 x 104; 105; 2x 105 e 3 x 105 protoplastos . mL-1,nos meios de cultura EME 0,7M, BH3 0,7M e BH3 + EME 0,7M em ausência de luz, a 25 ± 1 ºC. A solução enzimática 2 proporcionou um maior rendimento no isolamento de protoplastos das cultivares Hamlin, Natal e Pera e solução enzimática 1 foi melhor para a cultivar Westin. A eficiência final de plaqueamento avaliada aos 90 dias foi superior nas densidades de de 3 x 105 e 2 x 105 protoplastos. mL-1 para as cultivares Hamlin, Natal e Lima Verde, e na densidade de 2 x 105 e 105 protoplastos. mL-1 para a cultivar Westin. A indução da embriogênese somática ocorreu em meio de cultura MT modificado com 500 mg.L-1 de extrato de malte, acrescido de sacarose, galactose, glicose, sorbitol, lactose e maltose, nas concentrações de 18, 37, 75, 110 e 150 mM à temperatura de 27 °C. A formação de embriões somáticos variou com o genótipo, sendo a cultivar Lima Verde e Westin apresentaram menor número de embriões somáticos. As melhores fontes de carboidratos foram a maltose, seguida pela lactose nas concentrações de 37 e 75 mM para a cultivar Pêra, 37 mM para a cultivar Natal e 37, 75 e 110 mM para a cultivar Hamlin. / Plant regeneration, by organogenesis or somatic embryogenesis from cell cultures and in vitro plant tissue culture is the basis for the use of biotechnology in plant breeding. Studies were conducted with five cultivars of sweet orange (Citrus sinensis L. Osbeck), Pêra, Natal, Lima Verde, Hamlin and Westin. This work aimed to evaluate the isolation efficiency of protoplasts, to evaluate platting efficiency of protoplasts based on five densities of cells and different culture media and to evaluate somatic embryogenesis based on culture medium composition and concentration. The enzymatic solutions tested were: 1. Grosser and Chandler (1987): 1% de cellulase Onozuka RS (Yakult), 1% macerase R-10 (Yakult Honsha) and 0,2% de pectoliase Y-23 (Seishin); 2. Grosser and Chandler (1987) modified: 1% de cellulase Onozuka RS (Yakult) and 1% macerase R-10 (Yakult Honsha); 3. Enzimatic solution containing 4% cellulase Onozuka R-10 (Yakult) and 1% macerase R-10. Protoplasts were cultured at densities of 2 x 104; 5 x 104; 105; 2 x 105 e 3 x 105 protoplasts.mL-1 in EME 0,7M, BH3 0,7M and BH3 + EME 0,7M, in the dark, at 25 ± 1 ºC. The enzymatic solution 2 provided higher yield for the cultivars Hamlin, Natal and Pêra, and enzymatic solution 1 resulted in better protoplast isolation for cultivar Westin. Final platting efficiency, evaluated 90 days after culture, was higher at the densities of 3 x 105 e 2 x 105 protoplasts.mL-1 for Hamlin, Natal and Lima Verde, and at the density of 2 x 105 e 105 protoplasts.mL-1 for Westin. Somatic embryogenesis stimulation occurred in cultured medium MT (MURASHIGE AND TUCKER, 1969) modified with 500 mg. L-1 of malt extract, supplemented with sucrose, galactose, glucose, maltose, lactose and sorbitol at concentrations of 18, 37, 75, 110 and 150 mM, at 27 ± 1 ºC. Somatic embryos produced varied with the genotype, the smaller number of somatic embryos was observed in cultivars Lima Verde and Westin. The best source of carbohydrate were maltose, followed by lactose at concentrations of 37 and 75 mM for cultivar Pêra, 37 mM for cultivar Natal, and 37, 75 and 110 mM for cultivar Hamlin.