Orientador: Lucilene Delazari dos Santos / Resumo: O uso de animais de grande porte como sorodoadores tem se mostrado de grande importância para a produção do selante de fibrina do Centro de Estudos de Venenos e Animais Peçonhentos (CEVAP). O objetivo deste trabalho foi certificar um plantel de bubalinos, realizar uma investigação sobre os potenciais candidatos à biomarcadores de brucelose em soro de búfalos e evidenciar o isolamento e a quantificação pioneira de exossomos (EVs) do soro de bubalinos com theileriose e babesiose. Realizaram-se os seguintes testes sorológicos: brucelose (BRU), leptospirose (LEP), febre aftosa (FMD), rinotraqueíte infecciosa bovina (IBR), diarréia viral bovina (BVD), varíola bovina (Pox) e tuberculose, língua azul (BTV), estomatite vesicular (EV) - sorotipos cocal (COCV) e alagoano (VSAV), leucose bovina (BLV), neospora (NC), toxoplasmose (TX) e testes bioquímicos laboratoriais. Todas as amostras de soro foram submetidas ao diagnóstico sorológico para detecção de brucelose, diagnóstico de reação em cadeia da polimerase para detecção de theileriose e babesiose, cromatografia líquida de afinidade, isolamento de exossomos, digestão de proteínas em solução, análise de espectrometria de massa e ferramentas de bioinformátca. Observamos um enriquecimento de 90,5% de proteínas nos soros de búfalos após este protocolo de depleção. A análise MS/MS evidenciou que as principais diferenças no proteoma dos animais com brucelose. No que se refere ao exossosmos isolados e quantififcados neste trabalho, nossa met... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The use of large animals as sorbozers has been shown to be of great importance for the production of fibrin sealant from the Center for the Study of Venoms and Poisonous Animals (CEVAP). The objective of this work was to certify a flock of buffaloes, to conduct an investigation of the potential candidates for brucellosis biomarkers in buffalo serum and to evidence the isolation and the pioneer quantification of buffalo serum exosomes (EVs) with theileriose and babesiosis. The following serological tests were carried out: brucellosis (BRU), leptospirosis (LEP), foot-and-mouth disease (FMD), infectious bovine rhinotracheitis (IBR), bovine viral diarrhea (BVD), bovine pox (Pox) and tuberculosis, blue tongue (BTV), vesicular stomatitis (EV) - cocal (COCV) and alagoan (VSAV) serotypes, bovine leukosis (BLV), neospora (NC), toxoplasmosis (TX) and laboratory biochemical tests. All serum samples were submitted: 1) serological test; 2) Polymerase chain reaction; 3) Depletion; 4) Isolation of exosomes; 5) Mass spectrometry and 6) Analysis and interpretation of the data. The MS / MS analysis showed that the major differences in the proteome of animals with brucellosis. Regarding the isolated and quantified exosmos in this work, our methodology is strongly encouraged for the isolation and characterization of EVs in Apicomplexa infections in farm animals. We conclude that this study on different fronts such as management, infectious diseases and parasitic diseases can be used in small pro... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Submitted by Ubirajara Cruz (ubirajara.cruz@gmail.com) on 2017-06-07T14:31:32Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Ana Muñoz Vianna.pdf: 2420695 bytes, checksum: 23ce0fe8a151274827065f7b3c62e03a (MD5) / Approved for entry into archive by Aline Batista (alinehb.ufpel@gmail.com) on 2017-06-08T13:00:55Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Ana Muñoz Vianna.pdf: 2420695 bytes, checksum: 23ce0fe8a151274827065f7b3c62e03a (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-08T13:00:56Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Ana Muñoz Vianna.pdf: 2420695 bytes, checksum: 23ce0fe8a151274827065f7b3c62e03a (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2016-02-25 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / A theileriose, doença endêmica no Brasil, é uma piroplasmose causada pelo protozoário intraeritrocitário, Theileria equi. Provoca perdas associadas tanto a fatores clínicos como a restrição ao trânsito de animais soropositivos. A transmissão de T. equi ocorre principalmente no repasto do carrapato, o qual inocula suas formas infectantes (esporozoítos) nos equídeos, que são os hospedeiros vertebrados. O diagnóstico e a prevenção desta enfermidade se fazem necessários em áreas endêmicas e não endêmicas devido à disseminação dos vetores e do protozoário e de sua alta prevalência. Diferentes plataformas de ELISAs têm sido desenvolvidas com a utilização de antígenos recombinantes. A proteína de superfície de merozoíto EMA-2 é liberada no citoplasma e na membrana do eritrócito, sugerindo ser um dos primeiros antígenos reconhecidos pelo sistema imune. O objetivo desse estudo foi avaliar a proteína EMA-2 de Theileria equi, expressa em Pichia pastoris, como imunobiológico. Após expressão da glicoproteína EMA-2 foi desenvolvido um ELISA indireto. O ELISA demonstrou sensibilidade de 90,9% e especificidade de 83,3% quando comparado ao kit comercial de cELISA. A proteína também demonstrou imunogenicidade ao testarmos soros de camundongos imunizados com EMA-2 recombinante, por imunofluorescência. Sendo a proteína EMA-2 antigênica e imunogênica, poderá ser usada, além dos testes de diagnóstico, como antígeno para o desenvolvimento de vacinas de subunidade. / Theileriosis, endemic disease in Brazil, is a piroplasmosis caused by intra-erythrocytic protozoan, Theileria equi. Causes losses associated with both clinical factors and restriction on the movement of positive animals. Transmission of T. equi occurs mainly during tick feeding which inoculates their infective forms (sporozoites) in horses, which are the vertebrate hosts. The diagnosis and prevention of this disease is needed in endemic and non endemic areas due to the presence of vectors and protozoa. Different ELISAs platforms have been developed using recombinant antigens. EMA-2 is released into the cytoplasm and erythrocyte membrane, suggesting that one of the first antigens recognized by the immune system. The aim of this study was to evaluate the EMA-2 protein of Theileria equi, expressed in Pichia pastoris, as immunobiological. After expression of EMA-2 glycoprotein, an indirect ELISA was developed. The ELISA demonstrated sensitivity of 90.9% and specificity of 83.3% when compared to the commercial kit cELISA. The protein also showed immunogenicity when test the sera of immunized mice with recombinant EMA-2 by immunofluorescence. As the EMA-2 protein antigenic and immunogenic, it may be used diagnostic tests as well as a promising antigen for the development of subunit vaccines.

Made available in DSpace on 2014-08-20T14:38:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao_anibal_torres.pdf: 438835 bytes, checksum: d43cf21b0af9852e79231f87a87e06ea (MD5) Previous issue date: 2010-02-22 / The equine theileriosis, caused by Theileria equi, is an endemic disease of south of Rio Grande do Sul Brazil. There are signs that tick Rhipicephalus boophilus microplus still transmit that disease and in few time, some studies had experimental demonstrated it. The purpose of the first study of this paper was to demonstrate the tick infestation and the role of it in the transmission of the disease. In equines with contact directly with cattle, the serum incidence of the disease was 81,8% and in this group, 31,8% of this horses had tick infestation. In the equines that didn t have contact with cattle, the incidence of the disease was 12% and no tick was found in this horses. The most efficient drug in the treatment of the disease is imidocarb dipropionate. Many studies had demonstrated different doses and protocols of treatment of the disease and the toxicity of it was obvious. No study had show the sterile of T. equi with this drug, but it s a way to treat the acute disease and to control the chronic theileriosis. The acute form of the disease is seemed with fever, icteric and death. The chronic kind of it is seemed with covered coat, hyporexia, low performance in athlete horses and loss of weight. The goal of the second study of this paper was to show the toxicity and the metabolic effects of imidocarb dipropionate drug into two protocols of treatment ( two groups, 2 and 4mg/kg) in serum positive horses to theileriosis. It was seemed through hepatic and renal profile that 2mg/kg of the drug have low toxicity. Horses infected with T. equi keep with the disease for the rest of your lives, and the drug control with imidocarb dipropionate is necessary. The goal of the third study of this paper was to demonstrated, through immunologic test and clinic examination that 2mg/kg of imidocarb dipropionate monthly can control the chronic disease even in stress situations. One group received monthly, through 6 mouths, 2mg/kg of imidocarb dipropionate and the other group, once, in the beginning of it, 4mg/kg. The conclusion of this paper is that the incidence of equine theileriosis have a directly relation with the catle contact because it cause the tick Rhipicephalus Boophilus mircoplus infestation. Mensal dosis with 2mg/kg of imidocarb dipropionate is efficient in the disease control and it had demonstrated that it is not toxic for equine. / A theileriose equina, causada pelo hemoprotozoário Theileria equi, é uma doença endêmica na região da campanha do Rio Grande do Sul. Há indícios de que o carrapato Rhipicephalus Boophilus microplus transmita também a theileriose equina e, há pouco tempo, estudos demonstraram experimentalmente esta transmissão. O objetivo do primeiro trabalho foi demonstrar a infestação de carrapatos Rhipicephalus Boophilus microplus e o papel importante deste parasita na transmissão de theileriose equina. Em cavalos com contato direto com bovinos, a incidência sorológica da doença foi de 81,8%, sendo que em 31,8% destes animais se encontrou carrapatos Rhipicephalus Boophilus microplus. Nos equinos sem contato com bovinos, a incidência sorológica foi de 12% e não se encontrou carrapatos. Diversos estudos têm demonstrado a eficiência no tratamento da doença com dipropionato de imidocarb em diferentes doses, porém a toxicidade deste fármaco se manifesta em alguns animais. A forma aguda é caracterizada por febre, icterícia e morte. A forma crônica é descrita por pêlo arrepiado, hiporexia, queda no desempenho em animais atletas e perda de peso. O objetivo do segundo trabalho foi demonstrar a toxicidade e os efeitos metabólicos do dipropionato de imidocarb em duas doses terapêuticas (2 e 4mg/kg). Foi sugerido, através do perfil hepático e renal, após a administração da droga, que 2mg/kg deste fármaco tem uma toxicidade leve e temporária no período de metabolização da droga. Uma vez infectados com a T. equi, os equinos permanecem a vida toda positivos para a doença. Com isso o controle da enfermidade depende da utilização do dipropionato de imidocarb. O objetivo do terceiro trabalho foi demonstrar, através do teste de imunofluorescência indireta e exame clínico, que doses mensais de dipropionato de imidocarb á 2 mg/kg são eficazes para se manter a parasitemia e a clínica da doença controladas, mesmo que os animais sejam submetidos á situações de estresse. Um grupo recebeu mensalmente, por seis meses, 2mg/kg de dipropionato de imidocarb e o outro grupo, 4mg/kg apenas uma vez no primeiro mês. A conclusão desta dissertação é que a incidência da theileriose equina tem relação direta com a convivência com bovinos por facilitar a infestação destes com o carrapato Rhipicephalus Boophilus microplus; e que, doses mensais de dipropionato de imidocarb, à 2mg/kg, são eficazes no controle da parasitemia da doença mesmo em situações de estresse e não se demonstram tòxicas para os equinos.