Thesis (Ph. D.)--University of Texas at Austin, 2004. / Supervisor: Andrew D. Ellington. Vita. Includes bibliographical references. Also available from UMI.

Univ., Diss., 2010--Würzburg.

Thesis (Ph. D.)--Ohio State University, 2009. / Title from first page of PDF file. Includes vita. Includes bibliographical references (p. 139-156).

Du fait de leur haute stabilité et bas coût de production, les aptamères suscitent un intérêt croissant, depuis près de 20 ans, dans le design de biocapteurs en tant qu'élément de reconnaissance idéal. Le but de ce travail de thèse est de démontrer l'intérêt et la pertinence d'un outil tel qu'une biopuce à aptamères, associant les avantages des sondes aptamères à ceux d'une détection par SPRi (Surface Plasmon Resonance imaging), permettant une détection sans marquage et en temps réel d'interactions moléculaires. Dans ce but, deux aptamères anti-thrombine (APT1 = 5′- GGT-TGG-TGT-GGT-TGG -3′ et APT2 = 5′-AGT-CCG-TGG-TAG-GGG-AGG-TTG-GGG-TGA-CT-3′) ont été choisis comme objets d'étude modèles. Ce choix a permis d'orienter différents axes de recherche : utilisés indépendamment comme sondes lors de l'élaboration de notre biopuce, ils ont tout d'abord permis de réaliser une détection cinétique optimisée de la thrombine, avec des performances remarquables pour une détection de ce type, ainsi que le calcul de constantes de dissociation en solution et à la surface des biopuces. Mais au-delà d'un simple biocapteur, la biopuce a également pu être utilisée comme véritable plateforme d'étude de la thrombine et de ses interactions, au sein de structures plus complexes telles que la structure « sandwich » entre les deux aptamères, ou d'autres interactions impliquant la thrombine en tant qu'acteur de la cascade de coagulation (inhibition de la thrombine par l'antithrombine III et le cofacteur II de l'héparine, transformation de la prothrombine au sein du complexe prothrombinase). / For 20 years, aptamers have been raising an increasing interest for biosensor applications as replacements for antibodies, due to their high stability and low cost. The main objective of this Ph.D. thesis is to show the great capacities of an aptamer biochip that combines the advantages of aptamer probes associated with a SPRi (Surface Plasomn Resonance imaging) detection to monitor, in real-time and in a label-free manner, molecular interactions occurring on the surface of the biochip. Two aptamers selected against the thrombin protein (APT1 = 5′- GGT-TGG-TGT-GGT-TGG -3′ and APT2 = 5′-AGT-CCG-TGG-TAG-GGG-AGG-TTG-GGG-TGA-CT-3′) were chosen as models for our study. This choice led to the exploration of different lines of research. First, both aptamers were used independently to develop a kinetic biosensor with remarkable performances for the quantification of thrombin. This tool served to determine independently, and compare, both the solution- and surface-phase affinities of the trombin-APT2 interaction. But more than a simple and effective biosensor, this kind of biochip represents a true platform to study the protein and its interactions within complex structures, such as the sandwich-like architecture with APT1 and APT2, or its interactions with other factors of the coagulation cascade (inhibition of thrombin by antithrombin III and heparin cofactor II, conversion of prothrombin into thrombin by the prothrombinase complex).

Made available in DSpace on 2014-10-09T12:27:17Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Made available in DSpace on 2014-10-09T13:59:13Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Tese (Doutoramento) / IPEN/T / Instituto de Pesquisas Energeticas e Nucleares - IPEN-CNEN/SP

Made available in DSpace on 2014-10-09T12:27:17Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Made available in DSpace on 2014-10-09T13:59:13Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / A giroxina é uma enzima serinoprotease do veneno da cascavel sul-americana Crotalus durissus terrificus. É uma toxina apenas parcialmente caracterizada e com múltiplas atividades. Atua na coagulação, na diminuição da pressão arterial e induz um comportamento neurotóxico descrito como rolamento em barril. Os mecanismos envolvidos nestas atividades não são conhecidos. Considerando que a giroxina é uma enzima com alto potencial para ser um novo fármaco com aplicações em clínica médica como a trombina, tripsina, ancrod®, batroxobin® e calicreína, é importante determinar como a giroxina atua. As análises em eletroforese em gel de poliacrilamida e dicroísmo circular confirmaram a pureza e integridade da molécula. A administração intravenosa em camundongos comprovou a neurotoxicidade (rolamento em barril). O estudo in vivo com microscopia intravital comprovou que a giroxina induz vasodilatação com participação dos receptores ativados por proteases (PARs), do óxido nítrico e da Na+K+ATPase. A adesão e rolamento de leucócitos indicaram que não possui atividade pró-inflamatória. A giroxina induziu a agregação plaquetária, que foi bloqueada pelos inibidores dos receptores PAR-1 e PAR-4 (SCH 79797 e tcY-NH2, respectivamente). Finalmente, foi demonstrado que a giroxina alterou temporariamente a permeabilidade da barreira hematoencefálica (BHE). Neste estudo foi comprovado que os receptores ativados por proteases e o óxido nítrico são mediadores envolvidos nas atividades biológicas da giroxina. / Tese (Doutoramento) / IPEN/T / Instituto de Pesquisas Energeticas e Nucleares - IPEN-CNEN/SP

Le phénomène métastatique est important à comprendre puisque de manière irrémédiable, une fois engagé, il conduit le plus souvent au décès des patients. Le cancer de la prostate représente un bon modèle car sa progression du stade hormono-dépendant vers le stade d'hormono-échappement s’accompagne par l’apparition de métastases. Les Protease Activated Receptors (PAR1-4) sont des récepteurs qui jouent un rôle important dans l'hémostase et l'inflammation et dont l’implication dans la prolifération et l'invasion des cellules tumorales a été décrite dans plusieurs tissus. L’étude comparative de l'expression in vitro de PAR1 a confirmé son rôle dans la prolifération et l'invasion des lignées prostatiques normales et tumorales hormono-sensibles comme hormono-indépendantes. Son expression in vivo dans des tissus prostatiques à différents stades pathologiques a montré une surexpression de PAR1 chez les patients ayant atteint le stade d'hormono-échappement, associée à un mauvais pronostic. Son absence s’avère par contre de bon pronostic chez les patients hormonodépendants. L'ensemble des résultats obtenus nous permet de proposer PAR1 comme un nouveau marqueur pronostique pour le cancer de la prostate. L’activation des PARs, comme celle de plusieurs récepteurs de chémokines, apparaît comme un élément fondateur de la transition vers l’état métastatique. Le décryptage de cette combinatoire permettra de mieux comprendre les phénomènes impliqués dans cette transition et permettra de développer des thérapies ciblées pour prévenir l’apparition délétère de métastases / Metastasis is nowadays an important field of research as, once engaged, patients will generally die from their metastatic cancer. Prostate cancer represents an interesting model as its progression from hormone-naïve to hormone-independent status lead to metastatic disease. Protease Activated Receptors (PAR1-4) are G-protein-coupled receptors that play crucial roles in blood coagulation and inflammation but that are likely to play fundamental role in tumor cells proliferation and invasion. In vitro analysis of PAR1 expression in prostate cancer cell lines has confirmed the role of PAR1 in prostate cancer proliferation and invasion. Its expression in vivo in prostate cancer tissues have shown a constant surexpression in hormonerefractory ones, associated with a worse prognosis. However, its absence in hormone-naïve tissues is associated with a good prognosis. These results prompted us to recommend PAR1 as a new prognostic marker associated with prostate cancer progression. PAR activation, as well as several chemokine receptors, seems to be a founder feature of cancer transition to metastasis. Deciphering the pattern of receptor activation will allow a better understanding of the events that drive transition to metastasis and thus the development of new specific targeted therapeutics aimed at stopping deleterious metastatic evolution

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京都大学 / 新制・論文博士 / 博士(医学) / 乙第13514号 / 論医博第2264号 / 新制||医||1061(附属図書館) / 京都大学大学院医学研究科医学専攻 / (主査)教授 萩原 正敏, 教授 湊谷 謙司, 教授 中島 貴子 / 学位規則第4条第2項該当 / Doctor of Medical Science / Kyoto University / DFAM

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