L’exploration in situ de la génération d’activité thrombinique consiste en le suivi de l’hydrolyse d’un substrat indicateur de la thrombine (par fluorescence ou absorbance) : c’est la thrombinographie. Cette exploration permet un phénotypage in vitro intégratif de la coagulation, en présence de plaquettes et de fibrine pour la méthode fluorescente, et ses applications concernent aussi bien les états hypo- que hyper- coagulables, même s’ils résultent de coagulopathies complexes affectant à la fois le versant pro - que anti -coagulant. Ce travail représente la contribution technologique de l’unité INSERM U 734 en partenariat avec la société Diagnostica Stago. Par une approche théorique décrivant les phénomènes photophysiques survenant en thrombinographie, nous avons proposé un modèle (relation mathématique), basé sur des lois physiques, qui a permis de valider indépendamment la procédure de calibration du dispositif CAT (Calibrated Automated Thrombography), dispositif commercial le plus pertinent. Le modèle constitue aussi une méthode de calibration alternative, réalisable à partir de mesures de fluorescence à concentration fixe en fluorophore, pour les rares cas où la calibration CAT est mise en difficulté (présence dans le prélèvement d’un inhibiteur direct de la thrombine de faible masse moléculaire par exemple). En utilisant un conteneur réactionnel unitaire et des solutions technologiques innovantes dans un banc de mesure multi-canaux, différent de ce que proposent les dispositifs commerciaux, une reproduction indépendante des résultats CAT a pu être obtenue. La combinaison d’un conteneur réactionnel unitaire et d’un banc de mesure multi-canaux rend possible des entrées / sorties indépendantes dans le cycle de mesure pour chaque conteneur réactionnel utilisé. La calibration alternative est faite pour chacun des canaux de mesure. La cadence d’expérience pourra être ultérieurement augmentée par rapport aux dispositifs actuels et la participation de l’expérimentateur réduite autant que possible par une automatisation accrue. / In situ investigation of thrombin activity generation consists in recording the hydrolysis of a thrombin substrate (either fluorigenic or chromogenic): it is named thrombography. That investigation allows an integrative in vitro phenotyping of the coagulation system, in presence of platelets and fibrin as far as the fluorigenic method is concerned, and its applications are hypo-, as well as hyper- coagulant states, even if they are the result of a complex coagulopathy disturbing the pro - and the anti -coagulant balance. The present work is the technological contribution of the INSERM unit U734, in collaboration with the Diagnostica Stago company. By means of a theoretical approach that describes the photophysical phenomena occurring during thrombography, a model (mathematical relation) based upon physical laws was obtained. It independently validated the calibration process of the CAT (Calibrated Automated Thrombography), which is currently the most relevant and used system for thrombography. The model can also be an alternative process for calibration, obtained by measuring the fluorescence at various but constant fluorophore concentrations, for the rare cases when the CAT calibration process is impaired (e.g. presence in the investigated sample of a direct thrombin inhibitor of low molecular weight). By means of an unitary disposable reagent container and innovative technological solutions in a multi-channel measurement bench, different from what is commercially available, an independent reproduction of the CAT results was obtained. By that combination, independent inputs / outputs in the cycle of measures for every used reagent container were made possible. Gauging of the independent channels was achieved by the alternative calibration. The experiment rate can be eventually increased compared to the available devices for thrombography and the human factor has to be decreased as much as possible by further automation.

Le syndrome des anticorps antiphospholipides (SAPL) est caractérisé par une atteinte auto-immune systémique à l’origine d’événements cliniques thrombotiques ou obstétricaux en présence d’anticorps antiphospholipides (aPL) persistants sur 2 prélèvements. Ce travail de thèse s’est intéressé à des manifestations cliniques et des tests biologiques dont le but est d’évaluer le risque thrombotique dans ce syndrome. En premier lieu, le risque de valvulopathie associé aux aPL chez les patients lupiques a été étudié. L’existence d’une telle association faisait l’objet d’une controverse non résolue. En ayant recours à une revue systématique de la littérature et à une méta-analyse d’études observationnelles, les fréquences des valvulopathies chez les patients lupiques en fonction de la présence ou non d’aPL ont été comparées. Le résultat principal est, qu’en présence d’aPL chez les patients lupiques, ce risque est multiplié par 3. En second lieu, la valeur pronostique sur le risque de thrombose des thromboses veineuses superficielles (TVS) a été étudiée chez les patients atteints d’un SAPL. Une étude de cohorte prospective monocentrique a montré que la présence d’un antécédent de TVS était prédictive du risque de thrombose ultérieure. D’autre part, l’apport de nouveaux marqueurs biologiques, les anticorps spécifiquement dirigés contre le domaine I de la [bêta]2-Glycoprotéine I ainsi que les paramètres de thrombinographie prenant en compte la sensibilité à la protéine C activée ont été étudiés. Les résultats montrent que ces 2 tests sont prédictifs du risque thrombotique incident. Enfin, les données de qualité de vie d’une cohorte multicentrique de patients atteints de lupus et/ou porteurs d’aPL, ont été analysées. Les résultats montrent que la présence d’un antécédent de thrombose artérielle était associée à une altération de toutes les dimensions de la qualité de vie évaluée par un auto-questionnaire généraliste (MOS-SF36) en comparaison à des patients atteints de maladie auto-immune sans ce type de thrombose. Ces résultats pourront avoir un impact significatif dans la réflexion sur l’évolution des critères de classification de ce syndrome / Antiphospholipid syndrome (APS) is characterized by an auto-immune disorder with thrombotic and obstetrical morbidity in the presence of persistant antiphospholipid antibodies (aPL). This work studied clinical manifestations and laboratory assays for the determination of thrombotic risk in APS patients. Firstly, the risk of heart valve disease associated with aPL in systemic lupus erythematosus (SLE) patients was studied. Since 20 years, data regarding this association yielded conflicting results. A systematic review and a meta-analysis were performed to compare frequencies of heart valve disease in SLE patients with and without aPL. Main result concluded that the presence of aPL in SLE patients is associated with a 3-fold increased risk for heart valve disease in comparison with SLE patients without these antibodies. Secondly, prognostic significance of superficial vein thrombosis (SVT) was studied in APS patients. A prospective cohort study was performed and showed that SVT was predictive of thrombotic events overtime in this population. Moreover, the contribution of new laboratory assays were studied (antibodies directed against the domain I of [beta]2-Glycoprotein I and thrombin generation assay assessing sensitivity to activated protein C). Results demonstrated that these two assays were predictive of thrombotic events in APS patients. Finally, health-related quality of life was assessed in a multicentric cohort study of patients with aPL and/or SLE. Results showed that the presence of a history of arterial thrombosis was significantly associated with an impairment of all dimensions scores assessed by the MOS-SF36 questionnaire in comparison with patients with an auto-immune disease but without arterial thrombosis. This work provides new insights in the field of APS and may have an impact in the evolution leading to new classification criteria for definite APS.