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Survival of teleost larvae requires growth and development which depend upon endocrine processes. In this dissertation I have examined the ontogeny of elements of the thyroid hormone (TH) and corticosteroid (CS) systems in red drum (Sciaenops ocellatus). Basal cortisol production was first detected 3 days post-hatch (DPH) and a cortisol stress response was present from 6 DPH forward. Changes in steroidogenic enzyme mRNA (CYP11B and CYP21) levels did not correlate with these events. The time necessary to reach peak cortisol levels as well as return to basal levels declined as larvae developed. A second set of studies examined ontogenetic patterns in levels of mRNAs encoding thyroid (soTR[alpha] and soTR[beta]) and corticosteroid (soGR) hormone receptors and assessed the regulation of these mRNAs by exogenous triiodothyronine (T3) and cortisol. soTR[alpha], soTR[beta] and soGR were expressed in all stages of red drum examined. soTR[alpha] levels increased during the time when surging TH levels have been reported. soTR[beta] levels did not differ significantly during development. soGR levels were strongly correlated with those of soTR[alpha]. T3 up-regulated soTR[alpha] and soTR[beta] levels in 7 DPH, but not older larvae. Cross-regulation of receptor mRNAs by exogenous treatment with T3 or cortisol was not observed. Finally, I assessed the influence of a common herbicide, atrazine, on receptor mRNA, TH levels and growth of red drum. In two experiments, red drum exposed to environmentally relevant levels of atrazine did not alter hormone receptor mRNA levels, or TH content. However, atrazine did depress growth in some instances. In conclusion, the expression patterns of hormone receptor mRNA in embryos suggests receptor proteins could be activated by maternal hormones prior to the onset of endogenous hormone production. A correlation between soTR[alpha] and soGR mRNA levels suggests coordinated function of TH and CS systems, although regulatory interactions between these systems were not evident under the conditions in this study. Patterns in soTR[alpha] and soTR[beta] mRNA levels support an important role for TH in the larval to juvenile transformation of red drum larvae. The results also support growing evidence indicating atrazine exposure effects larval growth and may impact their survival in the wild. / text

Dans le thyrocyte normal, la TSH active une voie dépendante de l’adénylyl cyclase/AMPc, qui représente l’une des trois voies mitogéniques de la thyroïde. La cascade de signalisation de la TSH diffère des deux autres voies dans sa capacité à induire à la fois la prolifération et la différenciation, comprenant la synthèse et la sécrétion des hormones thyroïdiennes. Identifier les acteurs de cette cascade de signalisation, ainsi que les interactions entre effecteurs, est donc très important pour la compréhension de la fonction de la cellule thyroïdienne. C’est dans ce cadre que s’insère notre travail au cours duquel nous nous sommes intéressés au récepteur de la TSH ainsi qu’à une protéine récemment identifiée dans le laboratoire et dont l’expression est modulée en réponse à la TSH dans la thyroïde :C3VS. <p>C3VS est une protéine qui présente six motifs ankyrine et une tirette à leucine et dont la fonction était inconnue à l'époque. Dans un premier temps, nous avons contribué à l’obtention de la séquence codante complète du C3VS de chien, puis, l'identification des partenaires d'une protéine pouvant aider à caractériser sa fonction, nous nous sommes proposé de rechercher les partenaires potentiels de la région N-terminale de C3VS par la méthode double-hybride. Nous avons étudié la distribution tissulaire et la régulation par la TSH de différents partenaires isolés. Parmi eux, SUG1, une ATPase du protéasome 26S, a été étudiée plus avant mais l’interaction n’a pas pu être confirmée par "GST-pulldown assay". Simultanément, une remise en question de la position de la méthionine initiale de C3VS, couplée à une impossibilité d’exprimer la protéine en cellules COS par transfection mettait en péril le travail. En l’absence de plus d’arguments fonctionnels permettant d’orienter l’étude des positifs, cette partie du travail a été suspendue au profit de notre étude sur le récepteur de la TSH. L'activation de cascades différentes dans le thyrocyte humain et canin pouvant être due à l'action de protéines intracellulaires, nous avons tenté de rechercher par double-hybride des partenaires protéiques autres que les protéines G pour le récepteur de la TSH. Nous avons ainsi identifié PRA1 mais nous n’avons pas pu confirmer l'interaction entre les deux protéines par "GST-pulldown assay". Pour tenter de comprendre le rôle de cette interaction, nous avons réalisé des essais fonctionnels en transfectant des cellules pour évaluer l'implication de PRA1 sur la synthèse d’AMPc. Ces expériences ne nous ont pas permis de montrer un rôle pour PRA1 au niveau de la cascade, mais en revanche, nous avons mis en évidence le fait que la co-transfection de deux ADNc codant pour des protéines membranaires sature la machinerie de traduction et diminue l'expression du RTSH. <p>Dans une deuxième partie de notre travail, nous avons étudié la 5-phosphatase SHIP2, dont l’implication dans la cascade de réponse à l’insuline était suggérée, entre autres, par le travail d’Isabelle Vandenbroere qui avait montré l’interaction de cette protéine avec CAP et c-Cbl. Nous avons développé au laboratoire la culture de la lignée pré-adipocytaire 3T3-L1 et étudié la localisation de SHIP2 au niveau des rafts de ces cellules. Nous avons montré que SHIP2 n’y est pas recrutée. CAP et c-Cbl ne semblent pas non plus y être recrutées, tandis que nous y avons détecté le récepteur de l'insuline. La localisation de différentes protéines impliquées dans la cascade de l'insuline dans les rafts est une question controversée à l’heure actuelle et notre étude montre que l’implication fonctionnelle de SHIP2 dans la cascade de l'insuline n'est probablement pas dépendante des rafts.<p> / Doctorat en sciences, Spécialisation biologie moléculaire / info:eu-repo/semantics/nonPublished