Orientador: Maria Izabel Camargo Mathias / Banca: Gervásio Henrique Bechara / Banca: Rusleyd Maria Magalhães de Abreu / Resumo: As glândulas salivares dos carrapatos são órgãos importantes na transmissão de patógenos a seus hospedeiros, entretanto, o conhecimento das mudanças morfofisiológicas que nelas ocorrem durante o período de alimentação são limitados. Neste trabalho estudou-se as glândulas salivares de fêmeas de carrapatos Rhipicephalus (Boophilus) microplus por meio de técnicas de morfologia, histoquímica e citoquímica de luz e ultra-estrutural em fêmeas em dois diferentes estágios de alimentação (inicial: 24 a 48 horas de infestação, peso inferior a 0,03g e semiingurgitado: 4 a 5 dias de infestação, peso entre 0,13g e 0,25g), de modo a verificar as mudanças que ocorreriam no tecido glandular neste período e identificar quando teria início o processo de degeneração, além de estabelecer que tipo de morte celular estaria envolvida. As glândulas salivares das fêmeas em início de alimentação mostraram suas células fortemente positivas para ATPase e eficientes na exclusão de corante vital, estando portanto, ativas ou apenas em início de degeneração. Os núcleos, de maneira geral, apresentaram-se preservados, sendo assim, descartada a ocorrência de morte celular neste estágio. A localização da fosfatase ácida demonstrou a participação desta enzima na atividade metabólica destes órgãos, regulando o processo secretor e degradando proteínas. Fêmeas no estágio semiingurgitado apresentaram glândulas com características de degeneração, como perda das especializações de membrana, presença de figuras mielínicas, vacúolos autofágicos, lisossomos, além de alterações nucleares como condensação e marginalização cromatínica, formação de blebs e chegando à fragmentação nuclear. À medida que o processo de alimentação avançou, houve aumento da enzima fosfatase ácida, entretanto, os ácinos mantiveram-se fortemente ATPase positivos. (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The ticks’ salivary glands are important organs to the pathogens transmission to their hosts, however, the knowledge regarding the morphophysiological changes which occur in these structures during the feeding period are limited. In this work, the salivary glands of the Rhipicephalus (Boophilus) microplus female ticks were studied, using morphological,histochemical and ultrastructural citochemistry techniques in individuals at two different feeding stages (initial: 24-48 hours of attachment; weigh lower than 0.03g, and semi-engorged : 4-5 days of attachment; weigh around 0.13 and 0.25g ), in attempt to verifying the changes that would occur in the glandular tissue at this feeding period and identifying when the degeneration process would start, besides establishing which cell death type would be involved. The salivary glands from females at beginning of feeding showed their cells strongly positive to ATPase and efficient for the vital stain exclusion, being thus, active or at initial stages of degeneration. The nuclei, in a general way, present themselves preserved, being thus discarded the signs of the apoptosis occurrence in this stage. The acid phosphatase localization demonstrated this enzyme participation in the metabolic activity of these organs, regulating the secretory process and degrading proteins. Females at semi-engorged stage showed glands with degenerative characteristics, as loss of membrane especialization, presence of mielinic figures, autophagic vacuoles, lysosomes, besides nuclear alterations as chromatin condensation and marginalization, blebs formation and nuclear fragmentation. As the feeding process progressed, there was a acid phosphatase enzyme increase, however, the acini maintained strongly ATPase- positive. The results here obtained showed that the R. (B.) microplus salivary glands in females at... (Complete abstract, click electronic access below) / Mestre

Orientador: Maria Izabel Camargo Mathias / Banca: Gervásio Henrique Bechara / Banca: Rusleyd Maria Magalhães de Abreu / Resumo: O presente estudo apresenta a análise morfológica, histológica e ultraestrutural do ovário bem como a dinâmica da vitelogênese de fêmeas de carrapatos Amblyomma triste. O ovário dessa espécie é do tipo panoístico, não possuindo, portanto, células nutridoras nem foliculares. O ovário é composto por ovócitos que estão presos à parede do ovário, camada única de células epiteliais, através do pedicelo, estrutura celular com função de sintetizar e fornecer substâncias para o desenvolvimento dos mesmos. Os ovócitos foram identificados e classificados em quatro estágios diferentes de desenvolvimento. A classificação foi realizada baseada na presença de quatro características morfológicas: aspecto citoplasmático; localização da vesícula germinal; presença, quantidade e constituição dos grânulos de vitelo e presença de cório. Nos ovócitos de A. triste ocorre a síntese endógena e principalmente exógena dos elementos do vitelo. Em carrapatos A. triste, os lipídios dos ovócitos têm origem: a) exógena, em todos os estágios, uma vez que os elementos são captados da hemolinfa via superfície do ovócito e/ou provenientes das células do pedicelo e, b) endógena, que ocorre somente nos ovócitos III e IV. As proteínas do vitelo dos ovócitos de A. triste têm origem: a) exógena, nos ovócitos II, III e IV, via células do pedicelo que atuariam como fornecedoras deste elemento e também por meio da captação da hemolinfa pelo próprio ovócito e, b) endógena, nos ovócitos IV. Já os polissacarídios teriam origem a partir de duas fontes exógenas, a primeira com a produção e/ou transporte desse elemento via células do pedicelo, e a segunda, por meio da captação da hemolinfa via membrana do ovócito. No presente trabalho, a função do pedicelo como fornecedor de elementos para os ovócitos durante a vitelogênese fica estabelecida nessa espécie de carrapatos. / Abstract: The present study presents the morphological, histological and ultrastructural analysis as well as the dynamics of vitellogenesis in females of the tick Amblyomma triste. The ovary of this species is of the panoistic type, not presenting nurse nor follicular cells. The ovary is composed of oocytes which remain attached to wall of the ovary (single layer of epithelial cells) through the pedicel, a cellular structure responsible for synthesizing and providing substances to oocytes, promoting their development. The oocytes had been identified and classified into four different developmental stages. The classification was carried out based on the presence of four morphologic characteristics: cytoplasm appearance; site of the germ vesicle; presence, quantity and constitution of the yolk granules and presence of chorium. In the oocytes of A. triste occur the endogenous synthesis and mainly exogenous incorporation of yolk elements. The lipids have two different origin: a) exogenous, in all the oocytes, captured from the hemolymph through the oocyte surface and produced by pedicel cells and b) endogenous, only stages III and IV. The proteins have origin: a) exogenous, in the oocytes II, III e IV, where the pedicel cells contribute with the protein supply for the yolk constitution and also through the capture of this element from the hemolymph by the oocyte and, b) endogenous, in the oocytes IV. The polysaccharides would have two exogenous sources: the production and transportation of this element through the pedicel cells; and the capture of the hemolymph through the oocyte plasmic membrane. The present study determines the role of the pedicel as a provider of yolk elements to these tick species oocytes. / Mestre

Resumo: O contato dos carrapatos com os hospedeiros e a liberação de antígenos por meio da saliva estimula o desenvolvimento de respostas imune por parte dos hospedeiros. Os objetivos deste trabalho foram os de analisar e comparar morfo-histoquimicamente as glândulas salivares de fêmeas de Amblyomma cajennense fixadas em hospedeiros naive e reinfestados, e os resultados revelaram que coelhos reinfestados por A. cajennense desenvolvem resistência contra os mesmos em apenas uma infestação e essa resistência provoca efeitos no ciclo de atividade e na degeneração das glândulas salivares. Fêmeas fixadas em coelhos resistentes apresentaram aumento do tempo necessário para atingir o completo ingurgitamento e fêmeas ingurgitadas apresentaram redução significativa do peso final. As glândulas salivares dessas fêmeas apresentaram alterações morfológicas, que foram mais evidentes naquelas submetidas à terceira infestação. A histologia e a histoquímica mostraram que os ácinos I não sofreram alterações em comparação com aqueles das fêmeas fixadas em coelhos naive. As células c dos ácinos II apresentaram sinais de degeneração precoce, o que resultou na diminuição da eficiência alimentar. No ácino III as células d estenderam o tempo de atividade, provavelmente relacionado ao aumento do tempo de permanência das fêmeas nos hospedeiros resistentes. / Abstract: The contact with the ticks and hosts and the antigen releasing by saliva, stimulates the immune response development by the hosts. This study aims to analyze and compare morphohistochemically the salivary glands of Amblyomma cajennense females fixed on naive and reinfested hosts. The results show that re-infested rabbits by A. cajennense develop resistance against them in only one infestation and such resistance shows effects in the development and degeneration cycle of salivary glands. Females fixed on resistant rabbits showed an increase in the time required to complete the engorgement while the final weight of engorged females showed significant reduction. These female salivary glands showed morphological changes, which were more evident in females subjected to the third infestation. The acini I, no changes had been occurred compared with those of females fixed in naive rabbits. The acini II, the c cells showed early degeneration signs, which may result in feed efficiency reduction. In acini III, the d cells extended the activity time, which may be associated with the increase in the female fixation time which had been fed on resistant hosts. / Orientador: Maria Izabel Camargo Mathias / Coorientador: Gervásio Henrique Bechara / Banca: Marcelo Bahia Labruna / Banca: Itabajara da Silva Vaz Junior / Banca: Teresinha Tizu Sato Schumaker / Banca: Karim Christina Scopinho Furquim / Doutor

Resumo: O presente estudo apresenta a descrição da morfologia externa de larvas e a redescrição de ninfas do carrapato Amblyomma brasiliense, utilizando microscopia de luz, lupa estereoscópica e microscopia eletrônica de varredura. As larvas apresentaram a base do capítulo retangular, palpos curtos e idiossoma arredondado, coxa I com dois espinhos, sendo o externo mais longo que o interno e coxas II e III com um espinho, enquanto as ninfas apresentaram a base do capítulo também retangular, com córnua pontiaguda, idiossoma oval, coxa I com dois espinhos evidentes, sendo o externo mais longo que o interno, coxas II e III com um espinho curto em cada uma, e coxa IV, com um espinho muito pequeno e a presença de tubérculos quitinosos na superfície interna da borda posterior dos festões. Além disso, a morfologia do ovário e o processo de dinâmica da vitelogênese dos ovócitos de fêmeas ingurgiradas desta espécie de carrapato também são apresentados. O ovário, classificado como panoístico por não apresentar células foliculares e nutridoras, consiste em estrutura tubular única e contínua com ovócitos de vários tamanhos e diferentes estádios de desenvolvimento, presos a parede epitelial por meio do pedicelo. Tais ovócitos são aqui classificados em cinco estádios de acordo com a aparência do citoplasma, observação da vesícula germinal, aspecto dos grãos de vitelo e deposição do córion. Pela primeira vez foi observado em carrapatos ovócitos com o córion esculturado. / Abstract: The present study shows the external morphological description of larvae and the redescription of nymphs of Amblyomma brasiliense ticks under light microscope, stereoscopic microscope and scanning electron microscope. Larvae present basis capituli rectangular, short palpi, idiosoma rounded, coxa I with two spurs being the external longer than the internal one and coxae II and III each with one short spur. Nymphs present basis capituli rectangular with a sharp pointed cornua, oval idiosoma with scutum reaching coxa III and coxae I with two evident spurs being the external longer than the internal one; coxae IIIII each with one short spur and coxae IV with a very short spur and chitinous tubercles on internal surface of posterior border of festoons. Furthermore, the ovary morphology and the dynamics of the vitellogenesis process in oocytes of Amblyomma brasiliense engorged females. The ovary is classified as the panoistic type; therefore, it lacks nurse and follicular cells. This organ consists of a single tubular structure, continuous, with oocytes of various sizes and at different developmental stages remain attached to the ovary through a cellular pedicel. The oocytes were classified into five stages described according to cytoplasm appearance, presence of the germ vesicle, yolk granules aspects, and chorion deposition. For the first time was related in ticks oocytes chorium sculptured. / Orientador: Maria Izabel Camargo Mathias / Coorientador: Gervásio Henrique Bechara / Banca: Gilson Pereira de Oliveira / Banca: Marcelo B. Labruna / Mestre

Orientador: Maria Izabel Camargo Mathias / Banca: Gislaine Cristina Roma / Banca: Gilberto Orivaldo Chierice / Banca: Roberta Cornelio Ferreira Nocelli / Banca: Gervasio Henrique Bechara / Resumo: O presente trabalho traz informações que mostram a interferência dos ésteres do ácido ricinoléico extraídos do óleo de mamona (Ricinus communis), no ciclo secretor das glândulas salivares e na vitelogênese de fêmeas do carrapato Rhipicephalus sanguineus, agindo diretamente nos processos de alimentação e de reprodução, respectivamente. Para a realização deste estudo, coelhos hospedeiros infestados com carrapatos, foram alimentados com ração comercial comum (controle-GC) e com ração enriquecida com os ésteres em diferentes concentrações (tratamento- GT). As glândulas salivares sofreram danos, e tiveram o citoplasma das células acinares alterado, trazendo prejuízos ao seu funcionamento, além desta substância ter acelerado a degeneração do órgão como um todo. Os ésteres interferiram na atividade de secreção celular alterando a composição da glicoproteína salivar, especialmente nas células glandulares dos ácinos II. O efeito dos ésteres na vitelogênese foi observado nos ovócitos dos carrapatos do grupo tratamento (GT), os quais apresentaram células germinativas com alterações citoplasmáticas, inibição do desenvolvimento dos ovócitos I e II para os estágios avançados (IV e V), além da interferência na maturação dos ovócitos V. Além disso, nas ampolas dos ovários dos indivíduos tratados, espermatozóides não foram observados no seu interior confirmando a ação dos ésteres no processo de reprodução. Ficou demonstrado também que os danos causados pelos ésteres nas células das glândulas salivares e dos ovários desses ectoparasitas, aumentaram na mesma proporção que houve aumento das concentrações do produto, provocando intensa degeneração dos órgãos / Abstract: The present study brings information which shows the interference of ricinoleic acid esters extracted from castor oil (Ricinus communis) on the secretory cycle of Rhipicephalus sanguineus female ticks' salivary glands and vitellogenesis, acting directly on the feeding and reproduction processes respectively. To perform this study, host rabbits were infested with ticks, fed with regular commercial rabbit food (control-CG) and with food enriched with ester in different concentrations (treatment- TG). The salivary glands were damaged and had the cytoplasm of acinar cells altered, impairing their functioning, and the toxic substance also accelerated the degeneration of the organ as a whole. The esters interfered in the cellular secretion activity altering the composition of salivary glycoproteins, especially in the glandular cells of acini II. The effect of the esters in the vitellogenesis was observed in the oocytes of ticks belonging to the treatment group (TG), whose germinative cells presented cytoplasmic alterations, inhibition of the development of oocytes I and II for advanced stages (IV and V) and interference in the maturation of oocytes V. In addition, spermatozoa were not observed in the interior of the ovaries ampoules, confirming the acaricidal potential of the esters. It was also demonstrated that the damages caused by esters in the salivary glands cells and ovary cells of these ectoparasites increased in the same proportion of the increase in the concentrations of the toxic product, causing intense degeneration of the organs / Mestre

Resumo: Rhipicephalus (Boophilus) microplus é considerado o mais importante parasito de bovinos no Brasil. Atualmente seu controle é dificultado pela exigüidade de moléculas acaricidas geradas, e pelo rápido desenvolvimento de resistência dos carrapatos. O presente trabalho teve por objetivo estudar o efeito de quatro extratos oleosos de sementes de Nim (Azadirachta indica) contento 2.000, 5.000, 9.000 e 10.000 ppm de azadiractina (AZA) quantificados por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) em fêmeas ingurgitadas e larvas de R. (B.) microplus, in vitro. Para os ensaios com fêmeas ingurgitadas foi usado o Teste de Imersão de Adultas e para os ensaios com as larvas o Teste do Pacote com Larvas. Os resultados obtidos nos ensaios com fêmeas ingurgitadas mostraram que o principal efeito tóxico produzido pelos extratos, está relacionado à inibição da reprodução deste parasito. Foram verificadas reduções nas taxas de ovipostura e eclodibilidade das larvas oriundas das fêmeas tratadas com várias diluições dos extratos, em relação aos controles. Nos cálculos de Eficácia do produto (EP) para todas as soluções testadas, observou-se que a solução de 10.000ppm de AZA (N10) apresentou a maior eficácia. Os resultados das análises dos ensaios mostraram significância (p<0,01) dos dois efeitos incluídos no modelo, indicando variações significativas tanto devidas à concentração de AZA, quanto do ensaio realizado. Nas concentrações letais para as fêmeas ingurgitadas verificou-se que as CL50 não apresentaram variações, enquanto que as CL90 apresentaram grandes variações entre os extratos estudados. Nos ensaios com as larvas, não foram observadas mortalidade das larvas, indicando eficácia zero de todos os extratos testados. Os resultados dos ensaios com fêmeas ingurgitadas de R. (B.) microplus mostraram que os extratos oleosos de Nim apresentaram atividade ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Rhipicephalus (Boophilus) microplus is considered the most important cattle parasite in Brazil. Nowadays, his control is complicated by the slowness that acaricides molecules are generated, synthesized through and by the fast development of the resistance of these ticks to the market available products. This work aims to study the effect of four extracts of Neem seed oil (Azadirachta indica) containing 2.000, 5.000, 9.000 and 10.000 ppm of azadirachtin (AZA) quantified by high performance liquid chromatography (HPLC) on engorged females and larvae of R. (B.) microplus, in vitro. For the tests with engorged females, the Adult Immersion Test was used and for the larvae was used the Larvae Package Test. The test results with the engorged females showed that the main toxic effect produced by the extracts is related to the inhibition of the parasite reproduction. Were observed reductions in oviposition and hatchability rates of the larvae derived from the female treated with several dilutions of extracts, compared to controls. In the Product Effectiveness (PE) for all the test solutions, the 10.000ppm (N10) solution showed the highest efficiency. The analysis results from the tests showed significance (p<0,01) of the two effects included in the model, indicating variations both due to AZA and to the test performed. In the lethal concentration to the engorged females was verified that the CL50 did not show great variation, while the CL90 showed great variation between the studied extracts. In the tests with larvae was not observed mortality of them, indicating zero effectiveness of all tested extracts. The results of the tests with R. (B.) microplus engorged females demonstrated that the extract of Neem seeds oils showed acaricide activity. Thus, it is suggested that further studies can be conducted, such as development of the methods and of excrection, and characterization of other secondary ... (Complete abstract click electronic access below) / Orientador: Lucia Galvão de Albuquerque / Coorientador: Márcia Cristina de Sena Oliveira / Banca: Gilson Pereira de Oliveira / Banca: Moacir Rossi Forim / Mestre