Tolueno y xileno son compuestos químicos presentes en varios solventes y otros productos industriales y de laboratorio; su toxicidad para el sistema nervioso central y el hígado ha sido bien documentada. En el presente trabajo, se han estudiado los efectos in vitro de tolueno y de xileno sobre la respiración de mitocondrias aisladas de hígado de rata energizadas con succinato evaluada por medición del consumo de oxígeno, el potencial de membrana usando safranina O como indicador, la liberación de Ca2+ usando Calcium Green 5N, la producción de especies reactivas de oxígeno (EROs) con ácido homovanílico, y los cambios en el nivel de ATP utilizando el sistema luciferina-luciferasa. El hinchamiento mitocondrial, dependiente de Ca2+, sensible a ciclosporina A, un indicador de transición de permeabilidad de la membrana (TPM) mitocondrial, fue monitoreado con la medición de la disminución de la absorbancia aparente a 540 nm. Tolueno y xileno, a concentraciones 0.5-2.5 y 0.25-1 mM, respectivamente, estimularon la respiración de estado 4 en asociación aparente con la disipación del potencial de membrana y la liberación de Ca2+; estos efectos de ambos solventes indican desacoplamiento mitocondrial. A concentraciones mayores (2.5 y 5 mM, respectivamente), tolueno y xileno también inhibieron el estado 3 de respiración. A concentraciones 0.1-1 mM, xileno ocasionó una producción significante de EROs y un hinchamiento mitocondrial parcialmente dependiente de Ca2+ y parcialmente sensible a ciclosporina A. A una concentración 1mM, tolueno o xileno causaron depleciones del ATP mitocondrial hasta niveles del 66.3% y 40.3%, respectivamente; las depleciones fueron sólo ligeramente dependientes de Ca2+. Se concluyó que el desacoplamiento mitocondrial causante de la depleción de ATP puede ser responsable de la toxicidad celular de tolueno y en particular, de xileno, descrita por otros investigadores. En el último caso, parecen también estar involucrados la TPM y la generación de EROs. Palabras Clave: Tolueno, Xileno, Mitocondria, Desacoplamiento, Especies Reactivas de Oxígeno. / Toluene and xylene are chemicals present in various solvents and other industrial and laboratory products; their toxicity to the nervous system and to the liver has been well documented. In the present work, we have studied in vitro effects of toluene and xylene on the respiration of succinate-energized isolated rat liver mitochondria, evaluated by measuring oxygen consumption, membrane potential using safranine O as indicator, Ca2+ release using calcium green 5N, reactive oxygen species (ROS) by homovanillic acid, and ATP level changes using the luciferin-luciferase system. Ca2+-dependent, cyclosporine A-sensitive mitochondrial swelling, an indicator of mitochondrial permeability transition (MPT), was followed by measuring the decrease of apparent absorbance at 540 nm. At 0.5-2.5 and 0.25-1 mM concentrations respectively, toluene and xylene stimulated state 4 respiration in apparent association with mitochondrial membrane potential dissipation and Ca2+ release; these effects of both solvents indicate mitochondrial uncoupling. At higher concentrations (2.5 and 5 mM respectively) toluene and xylene also inhibited state 3 respiration. At 0.1-1 mM concentrations, xylene elicited significant ROS generation and partly Ca2+-dependent and partly cyclosporine A-sensitive mitochondrial swelling. At 1 mM concentration, toluene or xylene caused depletions of mitochondrial ATP, amounting to respectively 66.3% and 40.3%; depletions were only slightly dependent on Ca2+. It was concluded that mitochondrial uncoupling via ATP depletion migth be responsible for the earlier described cell toxicity of toluene and in particular, of xylene. In the latter case, mitochondrial generated ROS and MPT also appear to be involved. Key Words: Toluene; Xylene; Mitochondria; Uncoupling; Reactive oxygen species.

Tolueno y xileno son compuestos químicos presentes en varios solventes y otros productos industriales y de laboratorio; su toxicidad para el sistema nervioso central y el hígado ha sido bien documentada. En el presente trabajo, se han estudiado los efectos in vitro de tolueno y de xileno sobre la respiración de mitocondrias aisladas de hígado de rata energizadas con succinato evaluada por medición del consumo de oxígeno, el potencial de membrana usando safranina O como indicador, la liberación de Ca2+ usando Calcium Green 5N, la producción de especies reactivas de oxígeno (EROs) con ácido homovanílico, y los cambios en el nivel de ATP utilizando el sistema luciferina-luciferasa. El hinchamiento mitocondrial, dependiente de Ca2+, sensible a ciclosporina A, un indicador de transición de permeabilidad de la membrana (TPM) mitocondrial, fue monitoreado con la medición de la disminución de la absorbancia aparente a 540 nm. Tolueno y xileno, a concentraciones 0.5-2.5 y 0.25-1 mM, respectivamente, estimularon la respiración de estado 4 en asociación aparente con la disipación del potencial de membrana y la liberación de Ca2+; estos efectos de ambos solventes indican desacoplamiento mitocondrial. A concentraciones mayores (2.5 y 5 mM, respectivamente), tolueno y xileno también inhibieron el estado 3 de respiración. A concentraciones 0.1-1 mM, xileno ocasionó una producción significante de EROs y un hinchamiento mitocondrial parcialmente dependiente de Ca2+ y parcialmente sensible a ciclosporina A. A una concentración 1mM, tolueno o xileno causaron depleciones del ATP mitocondrial hasta niveles del 66.3% y 40.3%, respectivamente; las depleciones fueron sólo ligeramente dependientes de Ca2+. Se concluyó que el desacoplamiento mitocondrial causante de la depleción de ATP puede ser responsable de la toxicidad celular de tolueno y en particular, de xileno, descrita por otros investigadores. En el último caso, parecen también estar involucrados la TPM y la generación de EROs. Palabras Clave: Tolueno, Xileno, Mitocondria, Desacoplamiento, Especies Reactivas de Oxígeno. / --- Toluene and xylene are chemicals present in various solvents and other industrial and laboratory products; their toxicity to the nervous system and to the liver has been well documented. In the present work, we have studied in vitro effects of toluene and xylene on the respiration of succinate-energized isolated rat liver mitochondria, evaluated by measuring oxygen consumption, membrane potential using safranine O as indicator, Ca2+ release using calcium green 5N, reactive oxygen species (ROS) by homovanillic acid, and ATP level changes using the luciferin-luciferase system. Ca2+-dependent, cyclosporine A-sensitive mitochondrial swelling, an indicator of mitochondrial permeability transition (MPT), was followed by measuring the decrease of apparent absorbance at 540 nm. At 0.5-2.5 and 0.25-1 mM concentrations respectively, toluene and xylene stimulated state 4 respiration in apparent association with mitochondrial membrane potential dissipation and Ca2+ release; these effects of both solvents indicate mitochondrial uncoupling. At higher concentrations (2.5 and 5 mM respectively) toluene and xylene also inhibited state 3 respiration. At 0.1-1 mM concentrations, xylene elicited significant ROS generation and partly Ca2+-dependent and partly cyclosporine A-sensitive mitochondrial swelling. At 1 mM concentration, toluene or xylene caused depletions of mitochondrial ATP, amounting to respectively 66.3% and 40.3%; depletions were only slightly dependent on Ca2+. It was concluded that mitochondrial uncoupling via ATP depletion migth be responsible for the earlier described cell toxicity of toluene and in particular, of xylene. In the latter case, mitochondrial generated ROS and MPT also appear to be involved. Key Words: Toluene; Xylene; Mitochondria; Uncoupling; Reactive oxygen species. / Tesis

En el presente trabajo realizamos la cuantificación de los niveles de fenoles y ácido hipúrico en orina en cuarenta trabajadores que laboran en la confección y reparación de calzados del mercado Virrey Amat del distrito del Rímac, quienes utilizan frecuentemente pegamentos, los cuales en su composición química presentan sustancias como el benceno y tolueno en concentraciones que van del 1% al 3%. La cuantificación de fenoles totales y ácido hipúrico fue realizada por el método espectrofotométrico de Banfi y Marenzi y por el método de titulación de Weichselbaum y Probstein respectivamente. Se encontraron niveles elevados de fenoles totales y de ácido hipúrico en orina. En la cuantificación de fenoles totales en orina el promedio es de 220.6 mg/L y la cuantificación de ácido hipúrico en orina en esta misma muestra tiene como promedio 2.05 g/L. Estos valores son indicadores de exposición tanto al benceno como tolueno ya que los valores referenciales en orina, según la OMS, para los fenoles totales es menor a 75 mg/L y para el ácido hipúrico es de 0,4 a 1,4 g/L. Los análisis toxicológicos se realizaron en el laboratorio de toxicología de la Facultad de Farmacia y Bioquímica de la Universidad Nacional Mayor de San Marcos. / -- In this present research, it was carried out the quantitative determination of phenol and hippuricacid levels in forty workers that work in mending and design of Fottwear From Virrey Amat Market in Rimac District, who use adhesives frequently, which in their chemical composition present substances as bencene and toluene at concentrations ranging from 1% to 3%. The quantitative determination of phenols and hippuric acid was carried out by the spectro photometric method of Banfi and Marenzi and Titration method of Weichselbaum and Probstein respectively. It was found high levels of phenols and hippuric acid in Urine. In the quantitative assay of hippuric acid in urine, the mean valve mas 2.05g/L and the quantitative assay of phenols in urine in the same sample had 220.6 mg/L as a mean valve. These values are indicative of both exposure to benzene and toluene as the reference values, according to the WHO for phenols is less than 75 mg/L for acid hippuric is 0.4 to 1.4 g/L in urine. The toxicological analyses were carried out in the toxicology and legal chemistry lab of the Faculty of Pharmacy and Biochemistry of San Marcos Major National University.

En el presente trabajo, realizamos la cuantificación de los niveles de ácido hipúrico en relación a la creatinina urinaria en 50 maquinistas varones, que laboran en imprentas de Lima cercado, en donde hacen uso de tintas que contienen tolueno (técnicas de flexografía y huecograbado). La cuantificación de acido hipúrico en orina fue realizada por el método perteneciente al manual de métodos analíticos de la NIOSH. Los niveles de Ácido Hipúrico en orina fueron menores a 1.6g ácido hipúrico/g creatinina, límite máximo permitido, dado por la AMERICAN CONFERENCE OF GOVERNMENTAL INDUSTRIAL HYGIENSTS. El promedio de la concentración de ácido hipúrico en orina del grupo expuesto es de 0.758 ± 0.275 g ácido hipúrico/g creatinina. sin embargo, estos valores están ligeramente elevados con respecto al grupo control, cuyo promedio es 0.422 ± 0.036 g ácido hipúrico/ g creatinina. El análisis toxicológico se realizó en el Laboratorio de Toxicología y Química Legal de la Facultad de Farmacia y Bioquímica de la Universidad Nacional Mayor de San Marcos. / -- In this present research, it was carried out the quantitative determination of hippuric acid levels in relation to urinary creatinine in fifty male workers, who work in prints of center of Lima, where they make use of inks containing toluene (Flexography and Rotogravure techniques), The quantitative determination of hippuric acid was carried out by the method belongs to the Manual of Analytical Methods according to the NIOSH (The National Institute for Occupational Safety and Health). Hippuric acid levels in urine were less than 1.6g hippuric acid/g creatinine, the maximum permissible limit given by the AMERICAN CONFERENCE OF GOVERNMENTAL INDUSTRIAL HYGIENSTS. The average concentration of hippuric acid in urine in the exposed group was 0.758 ± 0.275 g hippuric acid/g creatinine. The toxicological analysis was carried out in the Toxicology and Legal Chemistry Laboratory of the Faculty of Pharmacy and Biochemistry of San Marcos Major National University.

En el presente trabajo, realizamos la cuantificación de los niveles de ácido hipúrico en relación a la creatinina urinaria en 50 maquinistas varones, que laboran en imprentas de Lima cercado, en donde hacen uso de tintas que contienen tolueno (técnicas de flexografía y huecograbado). La cuantificación de acido hipúrico en orina fue realizada por el método perteneciente al manual de métodos analíticos de la NIOSH. Los niveles de Ácido Hipúrico en orina fueron menores a 1.6g ácido hipúrico/g creatinina, límite máximo permitido, dado por la AMERICAN CONFERENCE OF GOVERNMENTAL INDUSTRIAL HYGIENSTS. El promedio de la concentración de ácido hipúrico en orina del grupo expuesto es de 0.758 ± 0.275 g ácido hipúrico/g creatinina. sin embargo, estos valores están ligeramente elevados con respecto al grupo control, cuyo promedio es 0.422 ± 0.036 g ácido hipúrico/ g creatinina. El análisis toxicológico se realizó en el Laboratorio de Toxicología y Química Legal de la Facultad de Farmacia y Bioquímica de la Universidad Nacional Mayor de San Marcos. / In this present research, it was carried out the quantitative determination of hippuric acid levels in relation to urinary creatinine in fifty male workers, who work in prints of center of Lima, where they make use of inks containing toluene (Flexography and Rotogravure techniques), The quantitative determination of hippuric acid was carried out by the method belongs to the Manual of Analytical Methods according to the NIOSH (The National Institute for Occupational Safety and Health). Hippuric acid levels in urine were less than 1.6g hippuric acid/g creatinine, the maximum permissible limit given by the AMERICAN CONFERENCE OF GOVERNMENTAL INDUSTRIAL HYGIENSTS. The average concentration of hippuric acid in urine in the exposed group was 0.758 ± 0.275 g hippuric acid/g creatinine. The toxicological analysis was carried out in the Toxicology and Legal Chemistry Laboratory of the Faculty of Pharmacy and Biochemistry of San Marcos Major National University.

En el presente trabajo realizamos la cuantificación de los niveles de fenoles y ácido hipúrico en orina en cuarenta trabajadores que laboran en la confección y reparación de calzados del mercado Virrey Amat del distrito del Rímac, quienes utilizan frecuentemente pegamentos, los cuales en su composición química presentan sustancias como el benceno y tolueno en concentraciones que van del 1% al 3%. La cuantificación de fenoles totales y ácido hipúrico fue realizada por el método espectrofotométrico de Banfi y Marenzi y por el método de titulación de Weichselbaum y Probstein respectivamente. Se encontraron niveles elevados de fenoles totales y de ácido hipúrico en orina. En la cuantificación de fenoles totales en orina el promedio es de 220.6 mg/L y la cuantificación de ácido hipúrico en orina en esta misma muestra tiene como promedio 2.05 g/L. Estos valores son indicadores de exposición tanto al benceno como tolueno ya que los valores referenciales en orina, según la OMS, para los fenoles totales es menor a 75 mg/L y para el ácido hipúrico es de 0,4 a 1,4 g/L. Los análisis toxicológicos se realizaron en el laboratorio de toxicología de la Facultad de Farmacia y Bioquímica de la Universidad Nacional Mayor de San Marcos. / In this present research, it was carried out the quantitative determination of phenol and hippuricacid levels in forty workers that work in mending and design of Fottwear From Virrey Amat Market in Rimac District, who use adhesives frequently, which in their chemical composition present substances as bencene and toluene at concentrations ranging from 1% to 3%. The quantitative determination of phenols and hippuric acid was carried out by the spectro photometric method of Banfi and Marenzi and Titration method of Weichselbaum and Probstein respectively. It was found high levels of phenols and hippuric acid in Urine. In the quantitative assay of hippuric acid in urine, the mean valve mas 2.05g/L and the quantitative assay of phenols in urine in the same sample had 220.6 mg/L as a mean valve. These values are indicative of both exposure to benzene and toluene as the reference values, according to the WHO for phenols is less than 75 mg/L for acid hippuric is 0.4 to 1.4 g/L in urine. The toxicological analyses were carried out in the toxicology and legal chemistry lab of the Faculty of Pharmacy and Biochemistry of San Marcos Major National University.

Realiza una estandarización e implementación de un método analítico para la determinación de ácido hipúrico en orina por espectrofotometría ultravioleta visible, con materiales y equipos más accesibles y menos costosos en comparación con una cromatografía líquida de alta resolución HPLC, que pueda determinar cuantitativamente la contaminación en orina de ácido hipúrico (metabolito de tolueno) como indicador de contaminación. Las muestras se prepararon a partir de orinas de niños comprendidos entre 5 y 7 años de edad (libres de ácido hipúrico), las cuales fueron contaminadas intencionalmente en diferentes concentraciones conocidas de ácido hipúrico, las cuales fueron leídas mediante espectrofotometría ultravioleta visible, considerando los parámetros de estandarización como: precisión, repetibilidad, exactitud, linealidad, reproducibilidad, límite de detección, límite de cuantificación, rango de aplicación, especificidad. Obtiene una curva de calibración con coeficiente de determinación de 0,9989 y con coeficiente de variación 1,27 %, indica así una estandarización satisfactoria. / Tesis