Thesis (M.S.)--University of Wisconsin--Madison, 1966. / eContent provider-neutral record in process. Description based on print version record. Includes bibliographical references.

Thesis (doctoral)--Universität Hamburg, 1978.

"The induction phenomenon is a useful model for the study of mechanisms which regulate the synthesis of specific enzymes in mammalian tissue, as well as for the role of hormones in this process". The in vivo administration of hormone initiates a chain of reactions which culminate in the increase of protein synthesis. Many hepatic enzymes are thus affected resulting in an increase of their activity. Studies of the giant chromosomes in the salivary glands of Chironomus tentans provided the first indications that the earliest intracellular effects of hormone administration are at the genetic level. Injection of the insect moulting hormone, ecdysone, into last instar larvae of Chironomus tentans results in puff formation at specific loci of the chromosomes shortly after hormone administration. Since puffs are local and reversible alterations of the chromosome, formed at sites which are active in the synthesis of informational RNA, their formation shows a change in activity of particular gene loci in response to ecdysone.

Thesis (M.S.)--University of Wisconsin--Madison, 1964. / eContent provider-neutral record in process. Description based on print version record. Bibliography: l. 67-73.

The coenzyme B12-dependent enzyme glutamate mutase (E.C. 5.4.99.1) catalyses the rearrangement of (2S)-glutamic acid to (2S,3S)-3-methylaspartic acid. Each of the two components of the enzyme was purified to homogeneity using a combination of low and high performance chromatographic techniques. Component E and S displayed molecular weights of 53 KDa and 13 KDa respectively as determined by gel electrophoresis, contrary to literature reports. A large number of glutamate and 3-methylaspartate analogues were synthesised and tested as substrates for the enzyme from Clostridium tetanomorphum. No rearrangement products could be detected for (2S,3R)-3-methylaspartic acid, (2S,3S)-3-ethylaspartic acid, 3-methylglutamic acid, (2S,3R)-3-methylsuccinic acid or A/-methyl-3-methylaspartic acid. Five inhibitors were discovered for the enzyme. Four of them were typical competitive inhibitors: (2S,3S)- and (2S,3R)-3-methylglutamates (Ki = 1.0 mM and Ki = 1.5 mM respectively); (2S)-homocysteic acid, Ki = 5 mM; and 1-bromo-cis-1,2-cyclopropanedicarboxylic acid (Ki= 2.2+/-0.2 mM). Finally 1-bromo-trans-1,2- cyclopropanedicarboxylic acid prevented the enzyme from processing (2S)- glutamic acid for periods of times proportional to its concentration. Our results support a radical mechanism with a protein bound glycyl radical as an intermediate, and provide evidence for the existence of two distinct conformations of the holoenzyme, prior to and after the activation of the cofactor. (2S,3R)-3- and (2S,3S)-3-Methylglutamic acids were synthesised stereospecifically by extending Schollkopf's bis-lactim ether methodology. The attack of various carbon anions at C-5 of isopropyl N-benzyl-(4S,5R)-1,2,3- oxathiazolidone-5-methyi-4-carboxyiate S,S-dioxide was not a versatile pathway. Nevertheless, the reaction of the oxathiazolidone with an allylmagnesium lithium cuprate complex gave some promising results, but more research is necessary to optimise certain problematic steps. Several different routes were evaluated for the preparation of 1-amino-1,2-cyciopropanedicarboxylic acid, but either low yields or instability of intermediates thwarted any attempts to achieve this goal. Finally 1- bromo-cis-and trans-1,2-cyclopropanedicarboxylic acids were synthesised by reacting methyl acrylate with methyl dibromoacetate in the presence of sodium hydride. The two pairs of enantiomers, cis- ((2S,3S) and (2R,3R)) and trans- ((2R,3S) and (2S,3R)) were separated by selective ester formation.

Preliminary studies have been undertaken on the enzyme, glutamate mutase. Stereochemically pure (2S,3S)-3-ethylaspartic acid has been synthesized. The turnover of this substrate analogue by glutamate mutase has been investigated. Possible reaction products have been synthesized. (2S,3S)-[1',1',2',2',2'-2H]-3-Ethylaspartic acid has been prepared and a novel synthesis of [1-2H]-ethanol has been investigated with the aim of preparing (2S,3S)-[1'-2H]-3-ethylaspartic acid. In order to investigate the mechanism of elimination of ammonia from (2S,3R)-3-methylaspartic acid, by the enzyme 3-methylaspartase, stereospecific routes to (2S,3R)-3-methylaspartic acid and [3-2H]-(2S,3R)-3-methylaspartic acid have been explored. The compounds were obtained in high enantiomeric excess and with >97 % incorporation of deuterium into the latter. It has been demonstrated that 3-methylaspartase catalyses the direct elimination of ammonia from these substrates, presumably by a syn- elimination mechanism. The kinetic parameters, Vmax and Km, have been determined for both compounds at 1 and 50 mM potassium ion concentrations. A deuterium isotope effect on (D(V)) of 7.15 +/- 2.74 was measured for the reaction at 1 mM potassium ion concentration. A large D(V) of 6.79 + 0.92 was also observed at 50 mM potassium ion concentration, in contrast to results with the natural isomer which show the effect is completely suppressed at this potassium ion concentration. Values for D(V/K) were also obtained at 1 and 50 mM potassium ion concentrations. They were 3.39 +/- 1.6 and 4.10 +/- 1.3, respectively. The 15N isotope effect on V/K was measured at 1 mM potassium ion concentration. A value of 1.0028 +/- 0.0040 was observed for (2S,3R)-3-methylaspartic acid, and, a value of 1.0033 +/- 0.0043 observed for [3-2H]-(2S,3R)-3-methylaspartic acid.

Introdução e objetivos: A determinação de fatores preditores precoces da mortalidade após o transplante hepático ortotópico é essencial para o aprimoramento e o aumento da eficácia desta modalidade terapêutica. O objetivo do presente estudo é avaliar a associação entre o fator V e a ALT como preditores da mortalidade hospitalar em pacientes submetidos ao transplante hepático e avaliar outros possíveis fatores prognósticos. Métodos: Estudo retrospectivo que analisou 96 pacientes adultos submetidos ao transplante hepático entre março de 2002 e outubro de 2010 no Hospital de Clínicas de Porto Alegre. A mortalidade hospitalar foi o desfecho principal. Foi investigada a possível associação de fatores pré, trans e pós-operatórios com o desfecho. Resultados: As variáveis que apresentaram associação com a mortalidade hospitalar na análise univariada foram ALT > 2500UI/L, AST > 2500UI/L, fator V ≤ 45% e re-operação na internação. A associação do fator V ≤ 45% com a ALT > 2500UI/L nas primeiras 48 horas de pós-operatório assim com a ocorrência de reoperação na internação demonstraram associação com a mortalidade hospitalar no modelo de análise multivariada. A acurácia do teste da associação entre fator V ≤ 45% e ALT > 2500UI/L para o desfecho mortalidade hospitalar foi de 88,5%. Conclusões: A presença conjunta do fator V ≤ 45% e da ALT > 2500UI/L nas primeiras 48 horas após o transplante hepático foi um fator de risco independente para a mortalidade hospitalar na amostra analisada. O teste possibilita um reconhecimento precoce dos pacientes com maior risco de óbito na internação.

Introdução e objetivos: A determinação de fatores preditores precoces da mortalidade após o transplante hepático ortotópico é essencial para o aprimoramento e o aumento da eficácia desta modalidade terapêutica. O objetivo do presente estudo é avaliar a associação entre o fator V e a ALT como preditores da mortalidade hospitalar em pacientes submetidos ao transplante hepático e avaliar outros possíveis fatores prognósticos. Métodos: Estudo retrospectivo que analisou 96 pacientes adultos submetidos ao transplante hepático entre março de 2002 e outubro de 2010 no Hospital de Clínicas de Porto Alegre. A mortalidade hospitalar foi o desfecho principal. Foi investigada a possível associação de fatores pré, trans e pós-operatórios com o desfecho. Resultados: As variáveis que apresentaram associação com a mortalidade hospitalar na análise univariada foram ALT > 2500UI/L, AST > 2500UI/L, fator V ≤ 45% e re-operação na internação. A associação do fator V ≤ 45% com a ALT > 2500UI/L nas primeiras 48 horas de pós-operatório assim com a ocorrência de reoperação na internação demonstraram associação com a mortalidade hospitalar no modelo de análise multivariada. A acurácia do teste da associação entre fator V ≤ 45% e ALT > 2500UI/L para o desfecho mortalidade hospitalar foi de 88,5%. Conclusões: A presença conjunta do fator V ≤ 45% e da ALT > 2500UI/L nas primeiras 48 horas após o transplante hepático foi um fator de risco independente para a mortalidade hospitalar na amostra analisada. O teste possibilita um reconhecimento precoce dos pacientes com maior risco de óbito na internação.

Submitted by Raquel Sabará da Cruz null (raqsabara@hotmail.com) on 2016-03-21T22:33:50Z No. of bitstreams: 1 dissertação versão final-impressão.pdf: 2574095 bytes, checksum: 8540d453330bcae116046e55b480b86b (MD5) / Approved for entry into archive by Juliano Benedito Ferreira (julianoferreira@reitoria.unesp.br) on 2016-03-22T19:26:18Z (GMT) No. of bitstreams: 1 cruz_rs_me_araiq_par.pdf: 1393236 bytes, checksum: fb9a7d96afc03bc23ad50d07330e227c (MD5) / Made available in DSpace on 2016-03-22T19:26:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 cruz_rs_me_araiq_par.pdf: 1393236 bytes, checksum: fb9a7d96afc03bc23ad50d07330e227c (MD5) Previous issue date: 2016-03-04 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Beta-aminoésteres/ácidos quirais enantiomericamente puros são blocos construtores quirais economicamente importantes para a indústria farmacêutica, de química fina, e agroquímica. As transaminases, também conhecidas como aminotransferases têm emergido como uma importante classe de enzimas com grande potencial na síntese enantiosseletiva desses compostos. Neste trabalho foi avaliada a reatividade de omega-transaminases frente a beta-cetoésteres arílicos (benzoilacetato de etila) e alquílicos (acetoacetato de etila) visando à síntese enantiosseletiva de beta-aminoésteres/ácidos. As enzimas utilizadas neste trabalho foram produzidas no laboratório a partir de plasmídeos contendo genes que codificam omega-transaminases (R) e (S)-seletivas provenientes de diferentes micro-organismos. Essas enzimas juntamente com uma enzima comercial (S)-seletiva foram empregadas em reações de aminação assimétrica utilizando substratos beta-cetoésteres, e na resolução cinética da (R,S)-feniletilamina. Parâmetros como concentração de enzima:substrato, compostos doadores de grupo amino, temperatura e pH foram avaliados visando à otimização dos rendimentos e enantiosseletividade. As enzimas produzidas apresentaram excelentes conversões (> 99 %) nas reações de síntese assimétrica e elevados excessos enantioméricos (> 99 %) em praticamente todas as reações de resolução cinética nas quais o acetoacetato de etila foi empregado como substrato. Por outro lado, nas reações onde o benzoilacetato de etila foi empregado como aceptor de amina, não se observou a formação do produto de interesse. / Optically pure beta-amino esters/ acids constitute economically important chiral building blocks for the pharmaceutical, fine chemical and agrochemical industries. Transaminases, also known as aminotransferases have emerged as an important class of enzymes with great potential in the enantioselective synthesis of these compounds. In this work, was evaluated the reactivity of omega-transaminase against aryl (ethyl benzoylacetate) and alkyl (ethyl acetoacetate) beta-keto esters for the enantioselective synthesis of beta-amino esters/acids. The enzymes used in this work were produced in the laboratory from plasmids containing genes encoding (R) and (S)-selective omega-transaminases from different micro-organisms. These enzymes along with a (S)-selective commercial enzyme were employed in the asymmetric amination reactions using beta-keto esters substrates and kinetic resolution of (R,S)-phenylethylamine. Parameters such as concentration of enzyme:substrate, amino group donors, temperature and pH were evaluated aiming to optimize yields and enantioselectivity. The enzymes produced showed excellent conversion (> 99%) in the asymmetric synthesis reactions and high enantiomeric excess (> 99%) in practically all kinetic resolution reactions in which ethyl acetoacetate was used as substrate. On the other hand, in reactions where the ethyl benzoylacetate was used as amino acceptor, was not observed the formation of the product of interest. / CNPq: 132685/2014-0

Introdução e objetivos: A determinação de fatores preditores precoces da mortalidade após o transplante hepático ortotópico é essencial para o aprimoramento e o aumento da eficácia desta modalidade terapêutica. O objetivo do presente estudo é avaliar a associação entre o fator V e a ALT como preditores da mortalidade hospitalar em pacientes submetidos ao transplante hepático e avaliar outros possíveis fatores prognósticos. Métodos: Estudo retrospectivo que analisou 96 pacientes adultos submetidos ao transplante hepático entre março de 2002 e outubro de 2010 no Hospital de Clínicas de Porto Alegre. A mortalidade hospitalar foi o desfecho principal. Foi investigada a possível associação de fatores pré, trans e pós-operatórios com o desfecho. Resultados: As variáveis que apresentaram associação com a mortalidade hospitalar na análise univariada foram ALT > 2500UI/L, AST > 2500UI/L, fator V ≤ 45% e re-operação na internação. A associação do fator V ≤ 45% com a ALT > 2500UI/L nas primeiras 48 horas de pós-operatório assim com a ocorrência de reoperação na internação demonstraram associação com a mortalidade hospitalar no modelo de análise multivariada. A acurácia do teste da associação entre fator V ≤ 45% e ALT > 2500UI/L para o desfecho mortalidade hospitalar foi de 88,5%. Conclusões: A presença conjunta do fator V ≤ 45% e da ALT > 2500UI/L nas primeiras 48 horas após o transplante hepático foi um fator de risco independente para a mortalidade hospitalar na amostra analisada. O teste possibilita um reconhecimento precoce dos pacientes com maior risco de óbito na internação.