La polarité apico-basolatérale, qui est essentielle pour le maintien de l'architecture tissulaire et pour des fonctions de l'épithelium sain, est fréquemment fragilisée, voire perdue, dans des lésions prénéoplasiques et au cours de la tumorigénèse. Les patients atteints de l'hépatite C chronique ont un risque accru de développer des carcinomes hépatocellulaires. Le contexte inflammatoire et cirrhotique, caractéristique de l'infection chronique par le virus de l'hépatite C (VHC), constitue un facteur de risque important de la tumorigenèse. De plus, le virus exerce des effets directs sur la physiopathologie de la cellule hôte, qui semblent favoriser la transformation oncogénique. Mon travail de thèse a permit de développer et de caractériser un modèle de culture tridimensionnelle qui reproduit la morphologie complexe des hépatocytes pour ensuite étudier l'effet d'une proteine virale, NS5A sur la physiopathologie de cellules hépatiques dans un contexte tridimensionnelle. Des cellules hépatiques, immortalisées ou primaires, s'organisent en organoides polarisés et acquièrent l'expression de marqueurs hépatocytaires matures. L'organisation tridimensionnelle et la polarité des organoides influent sur des voies de signalisation intracellulaires, dont la voie PI3K/Akt, un acteur crucial de la physiologie de la cellule et de sa transformation. Dans notre modèle, l'activation constitutive de la kinase Akt perturbe l'organisation tridimensionnelle des hépatocytes. NS5A, une des protéines du VHC, active la voie PI3K/Akt et interfère avec l'intégrité des organoides. Dans des précurseurs hépatiques primaires, les BMELs l'expression de NS5A conduit à la perte de marqueurs épithéliaux et à l'acquisition de marqueurs mésenchymateux et au phénotype migratoire et invasif. Ces effets de NS5A, qui suggèrent une transition épithelio-mésenchymateuse (TEM), sont additifs à l'action du TGF-β, un inducteur connu de la TEM. / Apico-basolateral polarity is essential to maintain tissue architecture and function of healthy epithelium. It is weakened or lost in preneoplastic lesions and in the course of carcinogenesis. Patients suffering from chronic hepatitis C are at risk for hepatocellular carcinoma. In addition to the necroinflammatory liver microenvironment, which favours tumorigenesis, direct effects of the virus on its host cell physiopathology also participate in the initiation of oncogenic transformation.To study the effects of viral proteins on cellular polarity and function, we developped an in vitro threedimensional (3D) culture model that reproduces complex hepatocyte morphology. Both immortalized cells and primary hepatocyte precursors organise themselves into intricate 3D organoids and acquire markers of mature hepatocytes. Their organisation and polarity impacts on several intracellular signal transduction pathways, including the PI3K/Akt axis, a major actor of physiology and of oncogenic transformation. Interestingly, constitutive Akt signalling perturbs hepatocyte 3D organization.NS5A, an HCV viral protein with pleiotropic activities, is an upstream activator of Akt. NS5A expression interferes with organoid formation and integrity. In primary hepatocyte precursors it leads to downregulation of epithelial and to acquisition of mesenchymal markers, suggesting an induction of epithelial-to-mesenchymal transition (EMT). Moreover, the effects of NS5A are additive to that of TGF-beta, a bona fide EMT inducer relevant to HCV-related pathologies. NS5A is also inducing pro-migratory and invasive phenotypes in BMEL cells as well as the hepatic cell line AML12. The signaling pahways underlying this results might involve Twist factors, well known actors of EMT, as NS5A is capable of their transcriptional regulation.The molecular mechanisms linking viral proteins to alterations of hepatocyte morphology are under investigation. Alterations of cell shape and function are of major interest in the context of virus-induced phenotype, relevant to tumour initiation and progression.

AXL est un récepteur tyrosine kinase (RTK) impliqué dans de nombreux mécanismes cellulaires tels que la migration, l'invasion, l'angiogenèse et la prolifération des cellules. Sa surexpression a été observée dans de nombreux cancers et est souvent liée à un mauvais pronostic vital pour le patient. De plus, ce récepteur semble agir dans un mécanisme important dans la formation de métastases et la résistance aux thérapies anticancéreuses : la transition épithélio-mésenchymateuse (EMT). Nous avons dans un premier temps généré des anticorps monoclonaux murins spécifiques du récepteur AXL. Deux de ces anticorps ont ensuite été sélectionnés pour leurs propriétés inhibitrices de l'expression d'AXL à la surface et de l'activation de ce récepteur par son ligand GAS6. En effet ces deux anticorps, le 20G7D9 et le 3E3E8, entraine l'internalisation et la dégradation lysosomale d'AXL.Nous avons dans un deuxième temps étudié l'expression et le rôle de ce récepteur dans le cancer du pancréas qui possède un manque cruel de solutions thérapeutiques aujourd'hui et dont le taux de survie reste très faible (moins 5% des patients survivent 5 ans après son diagnostic). Nous avons ainsi observé une expression d'AXL dans une majorité des tumeurs de patients (76%), notamment au niveau du front invasif de ces tumeurs. Le ciblage d'AXL par nos deux anticorps inhibe sa signalisation et permet une réduction in vitro et in vivo de la croissance tumorale.Enfin, l'importante expression d'AXL dans le front invasif des tumeurs nous a incité à étudier le rôle d'AXL au cours de la transition épithélio-mésenchymateuse. Nous avons ainsi démontré que le couple AXL/GAS6 induit l'EMT dans des modèles invasifs de cancer du sein triple négatifs. De plus, l'expression du récepteur dans des tumeurs de cancer du sein de type basal-like est corrélée à celle de différents marqueurs importants dans l'EMT. L'application de nos anticorps anti-AXL dans ce type de cancer permet d'inhiber l'induction de l'EMT par le récepteur ainsi que l'invasion cellulaire in vitro et in vivo.Cette thèse a ainsi permis de démontrer l'importance du récepteur tyrosine kinase AXL dans des mécanismes oncogéniques clés et l'efficacité de son ciblage par des anticorps monoclonaux dans des modèles précliniques de cancer. / The Tyrosine Kinase Receptor (TKR) AXL is implicated in various cellular mechanisms (migration, invasion, angiogenesis and cell proliferation). Its overexpression has been observed in many cancers and is often correlated with poor prognosis. Moreover, this receptor seems to be important in Epithelial to Mesenchymal Transition (EMT), a mechanism related to metastasis formation and resistance to anticancer therapies.We have generated several AXL specific murine monoclonal antibodies. Two of them, 20G7D9 and 3E3E8, have been selected for their inhibition properties in AXL expression and activation by its ligand GAS6. In fact, both antibodies induce internalization and lysosomal degradation of AXL.Then we decided to study AXL expression and role in pancreatic cancer, which is characterized by a dramatic overall survival (<5%, 5 years after diagnosis) and a lack of efficient therapeutic solutions. We observed an ectopic expression of AXL in a majority of patient' pancreatic tumors (76%), notably in the invasive front of the tumor. Targeting AXL with both 20G7D9 and 3E3E8 inhibits its signaling and decreases tumor growth in vitro and in vivo.As AXL is mainly expressed in the invasive front of tumors, we analyzed its role during EMT. We observed that AXL/GAS6 signaling induces EMT in triple negative breast cancer cell lines. Furthermore, its expression is correlated with well-defined EMT markers in basal-like breast cancer tumors. In vitro and in vivo application of our antibodies inhibits AXL-dependant EMT signaling and cellular migration and invasion.In conclusion, this thesis demonstrates the importance of AXL Tyrosine Kinase Receptor in oncogenic processes and the efficacy of targeting this receptor with monoclonal antibodies in cancer preclinical models.