Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2017-01-09T12:02:26Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Janaina Gomes de Siqueira - 2016.pdf: 2965200 bytes, checksum: 015ab0c28746d09363a65c8817dd4068 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2017-01-09T12:03:04Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Janaina Gomes de Siqueira - 2016.pdf: 2965200 bytes, checksum: 015ab0c28746d09363a65c8817dd4068 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-09T12:03:04Z (GMT). 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Among the essential nutrients, zinc is an essential metal ion, used in the maintenance of numerous metabolic pathways. Zinc is used as catalytic and structural cofactor of numerous metalloproteins. Zinc uptake is characterized as a virulence factor in H. capsulatum. In order to study the molecular mechanisms of zinc homeostasis in H. capsulatum, the in silico analysis of zinc homeostasis related proteins. The ZafA transcription factor, which acts on the regulation of genes in response to the zinc level in the medium and the transcription factor PacC that regulates genes in response to pH, were also found. ZrfA and ZrfC membrane transporters were also found ZrfF, ZrcA and ZrcC vacuolar transporters. The transcriptional profile analysis of these genes was measured by RT-PCR in infected macrophages and in vitro. During the infection the ZafA and ZrfA genes were induced, suggesting that these genes were expressed in order to supply the fungal cell with zinc, due to the metal deficiency caused by the infection. In vitro, ZafA, ZrfC, ZrfF, ZrcA and ZrcC were induced at zinc deprivation condition, compared with control condition. According with proteomic data of fungus under conditions of zinc deprivation, it was suggested the induction of proteins related to rescue, defense and virulence, related mainly to oxidative stress, besides other metabolic pathways such as gluconeogenesis. These data suggest that the fungus undergoes a metabolic remodeling in response to the oxidative stress caused by zinc deprivation. / Histoplasma capsulatum var. capsulatum é um fungo patogênico causador da doença sistêmica conhecida como histoplasmose. Essa micose apresenta endemicidade nas regiões do rio Mississipi e Ohio nos Estados Unidos, encontrado também em vários países da América do Sul. No Brasil, o número de pessoas infectadas por este fungo vem crescendo nos últimos anos, principalmente em pessoas imunocomprometidas. H. capsulatum é um micro-organismo termodimórfico, encontrado em dois morfotipos: micélio a 25ºC e levedura a 37ºC. Durante o processo de infecção o micro-organismo patogênico necessita obter nutrientes para que cresça e se desenvolva dentro do tecido do hospedeiro. Dentre os nutrientes essenciais, o zinco é um íon metal essencial, utilizado na manutenção de inúmeras vias metabólicas. O zinco é utilizado como cofator catalítico e ou estrutural de inúmeras metaloproteínas. A captação de zinco é caracterizada como um fator de virulência em H. capsulatum. Com o objetivo de estudar os mecanismos moleculares da homeostase de zinco em H. capsulatum, foi realizada primeiramente a análise in silico das proteínas relacionadas a homeostase de zinco. Foram encontrados o fator de transcrição ZafA que atua na regulação de genes em resposta ao nível de zinco no meio e o fator de transcrição PacC que atua na regulação de genes em resposta ao pH, adicionalmente foram encontrados transportadores de membrana ZrfA e ZrfC, além dos transportadores vacuolares ZrfF, ZrcA e ZrcC. A análise do perfil transcricional destes genes foi mensurada por RT-PCR em macrófagos infectados e in vitro. Durante a infecção os genes ZafA e ZrfA foram induzidos, sugerindo que estes genes foram expressos a fim de suprir a célula fúngica com zinco, devido a deficiência do metal causada pela infecção. In vitro, ZafA, ZrfC, ZrfF, ZrcA e ZrcC foram induzidos na condição de privação de zinco, comparado com a condição controle. De acordo com os dados proteômicos do fungo em condições de privação zinco, foi sugerido a indução de proteínas relacionadas ao resgate, defesa e virulência, relacionadas principalmente ao estresse oxidativo, além de outras vias metabólicas como gliconeogênese. Estes dados sugerem que o fungo sofre um remodelamento metabólico em resposta ao estresse oxidativo causado pela privação de zinco.