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Transporte simulado de oócitos bovinos em meio de maturação por diferentes períodos de tempo sem controle da atmosfera gasosaSILVA, Lilian Kátia Ximenes 23 March 2009 (has links)
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Previous issue date: 2009 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O transporte dos oócitos até ao laboratório é um fator determinante que tem limitado a difusão comercial da técnica de Produção in vitro de embriões (PIVE). Por este motivo, a utilização de um meio de transporte-maturação que forneça maior viabilidade aos oócitos
durante o transporte é fundamental. O objetivo deste estudo foi avaliar a viabilidade do transporte simulado de oócitos bovinos em meio quimicamente definido, por diferentes
períodos de tempo sem o controle da atmosfera gasosa, e a necessidade da adição de
hormônios neste meio. Oócitos bovinos imaturos (n=989) obtidos de ovários de vacas
abatidas em frigorífico, foram selecionados e distribuídos aleatoriamente em 2
experimentos. No experimento I, 649 oócitos foram distribuídos em 5 grupos. No grupo
controle (0h), os oócitos foram maturados por 24h em meio de maturação, em estufa de
CO2 a 38,5°C. Os oócitos foram transportados em uma incubadora portátil sem controle da
atmosfera gasosa a 38,5°C, por 3, 6, 9 e 12h. Os oócitos dos grupos experimentais
completaram a maturação nas mesmas condições do grupo 0h. No experimento II, 340
oócitos foram distribuídos em 5 grupos. No grupo controle (0h), os oócitos foram
maturados nas mesmas condições do grupo 0h do experimento I. Nos grupos
experimentais, os oócitos foram transportados nas mesmas condições do experimento I, no
entanto o meio de transporte-maturação foi suplementado ou não com hormônios, e o
transporte ocorreu por 3h (com e sem hormônios) e 6h (com e sem hormônios). Os oócitos
dos grupos experimentais completaram a maturação nas mesmas condições do grupo 0h. A
fecundação foi efetuada em meio Talp-Stock por 18 a 22h e o cultivo por 7 dias em meio
SOF. No experimento I, as taxas de clivagem foram estatisticamente similares (p>0,05)
para os grupos 0h (64,9%) e 3h (56,2%), porém houve uma redução destas taxas nos grupos
6h (45,8%), 9h (47,1%) e 12h (44,0%), que foram semelhantes entre si. A produção de
blastocistos no experimento I, não foi estatisticamente diferente (p>0,05) para os grupos 0h
(38,0%) e 3h (32,3%), porém houve uma redução nestas taxas nos grupos 6h (27,3%), 9h
(24,8%) e 12h (18,9%), no entanto, as taxas de blastocistos assemelham-se entre os grupos
3, 6 e 9h. No experimento II, as taxas de clivagem foram estatisticamente similares
(p>0,05) para os grupos 0h (71,4%) e 3h com hormônios (70,3%), porém houve uma
redução destas taxas nos grupos 3h sem hormônios (64,8%), 6h com (56,0%) e sem
(54,1%) hormônios, que foram diferentes entre si. A produção de blastocistos no
experimento II, foi estatisticamente similar (p>0,05) para os grupos 0h (46,1%) e 3h com
hormônios (45,8%), porém houve uma redução destas taxas nos grupos 3h sem hormônios
(41,1%), 6h com (35,5%) e sem (33,5%) hormônios, que foram diferentes entre si. Esses
resultados indicam a possibilidade do transporte de oócitos bovinos, em meio
quimicamente definido, utilizando incubadora portátil, sem controle da atmosfera gasosa, a
38,5ºC, pelo período de até 9h, e que a adição de hormônios neste meio pode aumentar os
índices de blastocistos. / The transport of the oocytes until the laboratory is a determining factor that has limited the
commercial diffusion of the Production in vitro embryo technique (PIVE). For this reason,
the use of a means of transport-maturation to provide greater viability to the oocytes during
the transport is fundamental. The objective of this study was to evaluate the viability of the
simulated transport of the bovine oocytes in chemically defined medium, by different
periods of time without the gaseous atmosphere control, and the need for the addition of
hormones in this medium. Immature bovine oocytes (n=989) obtained from bovine ovaries
of cows slaughtered in a refrigerator, were selected and randomly distributed in 2
experiments. In experiment I, 649 oocytes were distributed into 5 groups. In the control
group (0h), the oocytes were borne during 24h by means of maturation, in a CO2 incubator
at 38,5ºC. The oocytes were transported in an incubator portable without gaseous
atmosphere control at 38,5°C for 3, 6, 9 and 12h. The oocytes of experimental groups
completed the maturation under the same conditions of the group 0h. In experiment II, 340
oocytes were distributed into 5 groups. In the control group (0h), the oocytes were matured
during the same conditions of the group 0h of the experiment I. The experimental groups,
the oocytes were transported under the same conditions of the experiment I, however the
means of transport-maturation was supplemented or not with hormones, and the transport
occurred in 3h (with and without hormones) and 6h (with and without hormones). The
oocytes of experimental groups completed the maturation under the same conditions of the
of the group 0h. The fertilization was performed in Talp-Stock by 18 to 22h and growing
by 7 days in SOF medium. In experiment I, the rates of cleavage were statistically similar
(p>0,05) to the groups 0h (64,9%) and 3h (56,2%), although there was a reduction in these
rates in the groups 6h (45,8%), 9h (47,1%) and 12h (44,0%), which were similar among
themselves. The production of blastocysts in experiment I, was not statistically different
(p>0,05) for the groups 0h (38,0%) and 3h (32,3%), but there was a reduction in these rates
in groups 6h (27,3%), 9h (24,8%) and 12h (18,9%), however, the rates of blastocysts are
similar among the groups 3h, 6h and 9h. In experiment II, the rates of cleavage were
statistically similar (p>0,05) to the groups 0h (71,4%) and 3h with hormones (70,3%), but
there was a reduction in these rates in groups 3h without hormones (64,8%), 6h with
(56,0%) and without (54,1%) hormones, which were different among themselves. The
production of blastocysts in experiment II, was statistically similar (p>0.05) for the groups
0h (46,1%) and 3h with hormones (45,8%), but there was a reduction in these rates in
groups 3h without hormones (41,1%), 6h with (35,5%) and without (33,5%) hormones,
which were different among themselves. These results indicate the possibility of the
transport of bovine oocytes, in chemically defined medium, using incubator portable,
without gaseous atmosphere control, at 38,5ºC, for the period of up to 9h, and that the
addition of hormones in this medium may increase the rates of blastocysts.
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