Submitted by Fabrizio Grandi (fgrandivet@gmail.com) on 2016-03-10T14:56:58Z No. of bitstreams: 1 Doutorado.pdf: 5138229 bytes, checksum: cf3859209f1985d48832ef7e89af5b94 (MD5) / Approved for entry into archive by Sandra Manzano de Almeida (smanzano@marilia.unesp.br) on 2016-03-10T17:08:07Z (GMT) No. of bitstreams: 1 grandi_f_dr_bot.pdf: 5138229 bytes, checksum: cf3859209f1985d48832ef7e89af5b94 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-03-10T17:08:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 grandi_f_dr_bot.pdf: 5138229 bytes, checksum: cf3859209f1985d48832ef7e89af5b94 (MD5) Previous issue date: 2016-02-29 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / O tumor venéreo transmissível (TVT) canino é uma neoplasia transplantável, considerada um alo-enxerto. Entretanto, pouco se sabe a respeito da origem e processo de cacinogênese. Atualmente, postula-se que alguns tumores originem-se de células iniciadoras tumorais, classicamente descritas nas leucemias mielóide humanas. As características intrínsecas do TVT fornecem indícios de uma possível participação de células iniciadores tumorais no processo de carcinogênese nesse tumor. Foi realizado estudo de fenotipagem do TVT canino para avaliar a marcação das proteínas CD44, CD133, CD90 e CD34, comumente associadas ao potencial iniciador tumoral. Para tanto utilizou-se a citometria de fluxo, imuno-histoquímica e RTq-PCR. Foram analisados também as frações de crescimento pelo Ki-67) e o número de células em apoptose pela caspase-3 clivada. Trinta e oito amostras de TVT foram obtidas de pacientes sem tratamento quimioterápico prévio. As amostras foram classificadas em plasmocitóide ou mistas, de acordo com o subtipo citológico; as células positivas na citometria de fluxo foram representadas em termos percentuais para os marcadores CD44, CD34, CD90 e CD133; a fração de crescimento foi representada pela técnica do H-Score; a quantidade de células apoptóticas foi representada pelo somatório de células positivas para a caspase-3 clivada; as imuno-marcações das proteínas CD44 e CD34 foram representadas por escores semi-quantitativos baseados na intensidade e percentual de células positivas; as expressões de RNAm foram calculadas em termos relativos; ainda, os pacientes foram divididos em grupos resistente e não resistente e comparados quanto a expressão dos marcadores de células iniciadoras supracitados. Não foram observadas diferenças significativas entre os marcadores e os grupos citológicos plasmocitóide e misto; o percentual de células CD44+ comumente foi superior a 90%, enquanto que o percentual de células CD34+, menor que 0,5%; o percentual de células CD90+ e CD133+ variou amplamente; houve uma tendência em termos de diferença estatística entre os grupos quimiorresistente e não resistente; houve correlação forte entre o percentual de células CD133+ e CD90+ na citometria de fluxo. O estudo permitiu verificar diferentes níveis de expressão protéica e gênica nas amostras de TVT canino; ainda, os grupos citológicos aparentam não possuir diferenças com relação a expressão dos marcadores CD44, CD90, CD133 e CD34; os grupos quimiorresistentes e não-resistentes parecem diferir com relação a expressão dos marcadores de células iniciadoras tumorais. / The canine transmissible venereal tumor (CTVT) is a transplantable neoplasia considered an allograft. Information about the origin and carcinogenesis process is scarcely known. Currently, some neoplasms are believed to arise from a tumor-initiating cell (TIC´s) classically described in human myeloid leukemia. TVT intrinsic characteristics provide evidence of a possible TIC´s participation in carcinogenesis process of this malignancy. Thus, a phenotyping study of CTVT was conducted to assess the immunophenotyping properties of the proteins CD44, CD133, CD90 and CD34, already known to be associated to tumor initiator potential. The use of flow cytometry and immunohistochemistry contributed to this purpose. In addition, growth fractions and cells undergoing apoptosis were examined by Ki-67 and caspase-3 cleaved, respectively. Thirty-eight samples were chosen from patients having no previous chemotherapy and cytological diagnosis of CTVT. Samples were classified into plasmacytoid or mixed according to cytological subtype. Positive cells in the flow cytometry were expressed in percentage for the markers CD44, CD34, CD90 and CD133. H-score technique helped to represent growth fractions. Apoptotic cell quantity was calculated by summing positive cells. Immunohistochemical marking of CD44 and CD34 proteins were determined by semiquantitative scores based on the intensity and percentage of positive cells. Moreover, specimens were divided into resistant and non-resistant groups and compared according cell marker expressions cited before. No significant differences appeared between the markers, and cytological plasmacytoid and mixed groups. The CD44 + cells and CD34 + percentages showed up high and low values, respectively. CD90 + and CD133 + cell percentages presented variable values. Amplitudes of the gene expression values among markers were similar to those observed in flow cytometry with a low expression of CD34, and a high expression of CD44. There was a positive statistical tendence between chemo-resistant and non-resistant groups, as well as a strong correlation between the percentage of CD133 + and CD90 + in flow cytometry. Besides, cytological groups apparently have no differences with the marker expression of CD44, CD90, CD133 and CD34. Resistant and non-resistant groups to chemotherapy seems to differ with respect to the marker expression of TIC´s.

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:07:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 NIVIA faria.pdf: 1723183 bytes, checksum: 8c7fa557f1d9e528a75b069ae5bd4fbf (MD5) Previous issue date: 2009-12-18 / The transmissible venereal tumor (TVT) is among the most common cancers in dogs in Brazil. This is a sexually transmitted cancer through a mechanism of transplantation of viable tumor cells, it has high incidence among dogs of both sexes in reproductive age, with high occurrence in areas of high concentration of dogs with poor control of reproduction. The diagnosis made in the routine of clinical medicine is usually based only on clinical symptoms and the chemotherapy of choice has been the vincristine sulfate. This drug has been shown in most cases a good response to treatment with complete regression of the tumor, but there are also cases where the tumor appears resistant to treatment. This study aimed to demonstrate the practicality of using fine needle aspiration cytology as a method of diagnosis and cytomorphologic classification, being effective and safe as well as measuring the response of different cytomorphologic groups forward to treatment with vincristine sulfate. Also evaluating the clinical response, hematologic and biochemical tests using serum liver function (ALT) and renal (creatinine), in the therapy instituted. Were evaluated and treated 18 dogs of both sexes, carrying TVT, which received six consecutive weeks during the administration of vincristine sulfate in the dosage of 0.03 mg / kg administered intravenously. The animals underwent weekly prior to medication, clinical assessment, haematological and biochemical. It was observed in this study that cytological examination is a simple technique, minimally invasive and painless, and a safe method that provides no risk to the patient's life and does not require the use of sophisticated equipment, sedation or anesthesia for their achievement. Animals carrying the TVT plasmacytoid type, had higher rate of tumor resistance to treatment in relation to established groups and linfocytic mixed, showing a greater resistance to treatment with this group of vincristine sulfate. The efficiency of response to treatment was presented by the linfocytic group. The vincristine sulfate showed few side effects, low hematological, hepatic and renal toxicity, it is therefore an effective option in the control of transmissible venereal tumor in not resistant cases. / O tumor venéreo transmissível (TVT) é uma das neoplasias mais freqüentes em cães no Brasil. Trata-se de uma neoplasia sexualmente transmissível, através de um mecanismo de transplantação de células tumorais viáveis, apresenta alta incidência entre cães de ambos os sexos em idade reprodutiva, tendo grande ocorrência em ambientes de alta concentração de cães errantes e com deficiente controle de reprodução. O diagnóstico realizado na rotina da clínica médica geralmente se baseia apenas na sintomatologia clínica e o quimioterápico de eleição tem sido o sulfato de vincristina. Este quimioterápico tem demonstrado na maioria dos casos boa resposta ao tratamento com regressão completa da neoplasia, mas também há casos onde o tumor se mostra resistente ao tratamento. O presente trabalho visou demonstrar a praticidade do uso da citologia aspirativa por agulha fina como método de diagnóstico e de classificação citomorfológica eficaz e seguro, assim como mensurar a resposta dos diferentes grupos citomorfológicos frente ao tratamento com sulfato de vincristina. Avaliando também a resposta clínica, hematológica e por meio de provas bioquímicas séricas a função hepática (ALT) e renal (creatinina), frente à terapia instituída. Foram avaliados e tratados 18 cães de ambos os sexos, portadores de TVT, os quais receberam durante seis semanas consecutivas a administração de sulfato de vincristina na dosagem de 0,03 mg/kg administrado via intravenosa. Os animais foram submetidos semanalmente previamente a medicação, avaliação clínica, hematológica e bioquímica. Observou-se com este estudo que o exame citológico constitui-se em uma técnica simples, minimamente invasiva e indolor, sendo um método seguro, que não proporciona riscos à vida do paciente e não requer o uso de equipamento sofisticado, sedação ou anestesia para sua realização. Os animais portadores do TVT do tipo plasmocitóide, apresentaram maior índice de resistência tumoral ao tratamento estabelecido em relação aos grupos linfocitóide e misto, demonstrando uma maior resistência deste grupo ao tratamento com sulfato de vincristina. A maior eficácia de resposta ao tratamento foi apresentada pelo grupo linfocitóide. O sulfato de vincristina apresentou poucos efeitos colaterais, baixa toxicidade hematológica, hepática e renal constituindo, portanto em opção eficaz no controle do tumor venéreo transmissível em casos não resistentes.